戴利銘，熊延林，李發(fā)昌，劉一賢，施玉萍，李嵐嵐，蔡志英

（云南省熱帶作物科學(xué)研究所，云南景洪666100）

我國植膠區(qū)溫暖濕潤的氣候非常適宜多種病原微生物的生存繁衍，導(dǎo)致橡膠樹病害種類繁多［1］。葉病為橡膠樹毀滅性病害，是限制我國橡膠單產(chǎn)提高的關(guān)鍵因子之一。在前期研究中，云南省熱帶作物科學(xué)研究所植物保護和微生物利用中心在廣東、海南橡膠苗圃病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)1 種新的橡膠樹葉部病害——嘴突凸臍蠕孢菌（Exserohilum rostratum），癥狀表現(xiàn)為：葉片感病后，最初出現(xiàn)黃色小斑點，隨后病斑逐漸擴展成直徑5～15 mm 的近圓形至不規(guī)則形的灰褐色至灰色病斑。前期采用十字交叉法進行該菌的生物學(xué)特性基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫研究，發(fā)現(xiàn)該菌具有較強的環(huán)境適應(yīng)能力［2］。

林善海從香蕉葉斑病樣品中分離得到3 株突凸臍蠕孢菌，通過生防實驗篩選到一株洋蔥伯克霍爾德氏菌（Burkholderia cepacia），該菌對香蕉突凸臍蠕孢葉斑病菌的盆栽防效達到74.71%［3］。張馳成等報道了從桂牧1 號雜交象草上分離得到嘴突凸臍蠕孢菌，并測定不同殺菌劑對此病菌的敏感性，發(fā)現(xiàn)殺菌劑咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔玖ψ顝姡?］。

目前國內(nèi)對嘴突凸臍蠕孢菌引起橡膠樹葉斑病的相關(guān)研究報道僅此一例，對其防控研究還處于空白。病原菌遇到合適的氣候因素有引發(fā)病害大流行的可能，為使我國天然橡膠產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，有必要開展對該病原菌殺菌劑的敏感性實驗研究。本研究選用10 種殺菌劑對橡膠樹嘴突凸臍蠕孢菌進行室內(nèi)毒力測定，分析不同藥劑對菌株生長的影響，為后續(xù)生產(chǎn)上科學(xué)選擇防治橡膠樹葉斑病的田間藥效試驗提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌

本研究室前期分離、保存、鑒定的病原菌種［4］。

1.1.2 供試藥劑

咪鮮胺（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、丙環(huán)唑（先正達作物保護有限公司）、苯醚甲環(huán)唑（先正達作物保護有限公司）、代森錳鋅（北京燕華永樂生物科技股份有限公司）、百菌清（世科姆化學(xué)貿(mào)易有限公司）、甲基硫菌靈（山東海迅生物科技有限公司）、三唑酮（江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司）、異菌脲（江門方大光明農(nóng)化新會有限公司）、多菌靈（江蘇藍豐生物化工股份有限公司）、嘧菌酯（先正達南通作物保護有限公司）。

1.1.3 儀器

超凈工作臺（蘇州凈化SW-CJ-2FD）、恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特DH5000BⅡ）、分析天平（梅特勒托利多PL203）

1.1.4 培養(yǎng)基

PDA 培 養(yǎng) 基：土 豆200 g，葡 萄糖15 g，瓊 脂18 g，水定容至1 000 mL，自然pH；在121℃高壓滅菌20 min 后備用。

1.2 方法

將供試殺菌劑用無菌水配制成不同濃度的母液（表1），按比例加入到PDA 培養(yǎng)基中，倒入直徑9 cm 的培養(yǎng)皿制成有毒培養(yǎng)基平板。在已培養(yǎng)5 d 的嘴突凸臍蠕孢菌菌落邊緣用打孔器打取直徑為5 mm 的菌餅，移入含藥PDA 平板中央，每皿接菌餅1個，每個濃度重復(fù)3 次，以不含藥PDA 平板作為對照，28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑。

表1 不同殺菌劑的有效濃度

菌絲生長抑制率（%）＝（對照菌落直徑－處理菌落直徑）／（對照菌落直徑-0.5 cm）×100%。以藥劑濃度對數(shù)為橫坐標和對應(yīng)的菌絲生長抑制率為縱坐標做回歸分析，求毒力回歸方程［5-8］，計算相關(guān)系數(shù)、EC50值和EC75值，比較供試10 種殺菌劑對菌株的毒力大小。

采用Excel 2003 進行數(shù)據(jù)分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

毒力測定結(jié)果顯示，不同殺菌劑對病原菌的毒力水平存在差異，殺菌劑對病原菌菌絲生長強弱與藥劑濃度均呈正相關(guān)，各藥劑的EC50值見表2。苯醚甲環(huán)唑毒力最強，EC50值為0.0133 μg/mL，其次為丙環(huán)唑、咪鮮胺、異菌脲，其平均EC50值分別為0.0581、0.1061、0.5572 μg/mL；代森錳鋅、百菌清、三唑酮的EC50為1～100 μg/mL；而多菌靈、甲基硫菌靈和嘧菌酯對病原菌基本無效，EC50分別為866.9619、809.8414、2 630.2680 μg/mL。

10 種供試藥劑可分為4 類，第1 類是丙環(huán)唑，抑菌效果最好，平均EC75值小于1 μg/mL；第2 類是咪鮮胺、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑，平均EC75值小于10 μg/mL；第3 類是三唑酮、代森錳鋅，平均EC75值在34.4826～75.648 μg/mL，抑菌效果較差；第4類為多菌靈、百菌清，甲基硫菌靈、嘧菌酯，平均EC75值為104.61～236 210.93 μg/mL，對病原菌基本沒有抑制效果。

根據(jù)藥劑篩選試驗統(tǒng)計分析結(jié)果，推薦用苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、咪鮮胺、異菌脲防治嘴突凸臍蠕孢菌引起的葉斑病。

表2 供試殺菌劑對嘴突凸臍蠕孢的毒力測定

3 結(jié)論

嘴突凸臍蠕孢菌作為植物致病菌，寄主范圍廣泛，危害馬唐草［9］、臺灣青棗［10］、香牛筋草［11］、香蕉［3］、桂牧［4］等，但對其藥劑篩選實驗研究卻鮮見報道。張弛成［4］對桂牧葉斑病分離得到的病原菌進行室內(nèi)毒力測定，發(fā)現(xiàn)對嘴突凸臍蠕孢菌毒力最強的殺菌劑為咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑，EC50分別為0.0071 μg/mL 和0.0072 μg/mL。本研究以10 種藥劑對嘴突凸臍蠕孢菌絲體生長的EC50值和EC75進行分析，最終發(fā)現(xiàn)咪鮮胺、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔种菩Ч^好，其中苯醚甲環(huán)唑毒力最強，其EC50為0.0133 μg/mL。與張弛成［4］報道的結(jié)果相比，桂牧葉斑病上分離得到的嘴突凸臍蠕孢菌對苯醚甲環(huán)唑比橡膠葉上分離得到的更敏感，但是從整體考慮，咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔加休^為明顯的毒力作用；此外，與張弛成［4］報道的結(jié)果相似，多菌靈、嘧菌酯對嘴突凸臍蠕孢菌基本沒有抑制效果。由此我們推測，不同種類農(nóng)藥對嘴突凸臍蠕孢病原菌抑制效果存在差異的原因可能在于靶標生物作用機理存在差異。

本研究以10 種供試藥劑對橡膠樹嘴突凸臍蠕孢葉斑病病菌菌絲體生長的EC50、EC75值和毒力回歸方程斜率的分析發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹葉斑病上的嘴突凸臍蠕孢病原菌抑制效果最好，室內(nèi)毒力測定采用了農(nóng)藥原藥，測定結(jié)果較客觀、準確，研究結(jié)果可為生產(chǎn)上防治該病提供參考依據(jù)。