王敏 徐麗 朱永娜 張曉東

[摘 要] 該文研究之目的：慢性根尖炎主要是以根尖炎性骨破壞為表現(xiàn)的口腔常見(jiàn)疾病，RANKL/OPG調(diào)節(jié)慢性根尖周病中的骨吸收。該文主要研究炎性因子IL-34對(duì)RANKL/OPG的平衡的影響，從而進(jìn)一步探索IL-34在該疾病中的致病機(jī)理。之方法：實(shí)驗(yàn)組選用18組根尖周炎病例的肉芽組織，對(duì)照組選用正畸拔牙中的健康牙周組織8例。應(yīng)用免疫組化檢測(cè)IL-34、RANKL及OPG的表達(dá)情況，并進(jìn)行數(shù)據(jù)測(cè)量及定量分析三者之間的相關(guān)性。之結(jié)果：在慢性根尖周炎中IL-34在根尖周炎和對(duì)照組的表達(dá)量分別為0.206±0.038和0.131±0.023，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在根尖周炎組IL-34與RANKL呈負(fù)相關(guān)（r=-0.578，P=0.039）;IL-34與OPG呈正相關(guān)（r=0.778，P=0.000），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。之討論：本次實(shí)驗(yàn)證明了IL-34與根尖周炎的發(fā)生有很大關(guān)系，但I(xiàn)L-34可能只是很多影響RANKL/OPG平衡的炎性因子的一種。

[關(guān)鍵詞] IL-34;RANKL;OPG

[基金項(xiàng)目] 蚌埠醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)基金（BYKY17118）

[作者簡(jiǎn)介] 王 敏，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科;徐 麗，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院口腔科;朱永娜，張曉東，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科。

[中圖分類號(hào)] G642.0? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? [文章編號(hào)] 1674-9324（2020）23-0113-02? ? [收稿日期] 2019-11-13

慢性根尖周炎是口腔臨床上最為常見(jiàn)的一種疾病，臨床表現(xiàn)為炎癥性的骨吸收導(dǎo)致的根尖組織破壞[1]。骨吸收主要由破骨細(xì)胞負(fù)責(zé)。核因子κB受體活化因子配體RANKL是由成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、T或B淋巴細(xì)胞等分泌的膜結(jié)合配體，其與受體RANK結(jié)合后，促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成并產(chǎn)生骨吸收[2]。而OPG（骨保護(hù)素）是另外一種配體，它可以結(jié)合RANK受體，從而阻斷了其與RANKL的結(jié)合，破骨細(xì)胞的產(chǎn)生被抑制了，從而壓抑了炎性骨的破壞[3-4]。RANKL/OPG的平衡受炎癥因子IL-34的調(diào)節(jié)。本課題組前期研究表明IL-34與慢性根尖周病的發(fā)生密切相關(guān)[5-7]，但是其在該病中的致病機(jī)理還不清楚。因此本課題旨在前期研究的基礎(chǔ)上通過(guò)免疫組化研究慢性根尖周肉芽腫和慢性根尖周囊腫中三者的表達(dá)，揭示IL-34對(duì)慢性根尖周病中RANKL/OPG平衡的調(diào)節(jié)，從而進(jìn)一步探索IL-34在該疾病中的致病機(jī)理，為慢性根尖周病的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

一、資料與方法

（一）臨床資料

【實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組】

根據(jù)X線表現(xiàn)確定標(biāo)本

收集2018年1月—2018年6月在蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科就診的病例，患者年齡均為成年，患者無(wú)其他口腔疾病和全身系統(tǒng)性疾病。由兩名口腔影像學(xué)醫(yī)生與主治大夫一起根據(jù)X線參考標(biāo)準(zhǔn)[8]確定慢性根尖炎病例，并收集其組織標(biāo)本40例。

收集因正畸拔除健康牙時(shí)切除的牙周組織10例為正常對(duì)照組。

（二）方法

1.HE染色。及時(shí)將收集的標(biāo)本（軟組織）用去離子水仔細(xì)清洗。放于甲醛溶液中（4%）固定。一天后行石蠟包埋，連續(xù)切片后進(jìn)行染色。在顯微鏡下觀察結(jié)果，嚴(yán)格遵照相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，并與影像學(xué)資料進(jìn)行對(duì)比，最終得出18例實(shí)驗(yàn)組，8例對(duì)照組。

2.免疫組化。嚴(yán)格按照SP免疫組化法，將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行抗原修復(fù)。每張切片加入相應(yīng)的IL-34、RANKL及OPG抗體，加入DAB顯色液，蘇木素復(fù)染后得到觀察切片。在顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選擇其中5個(gè)視野進(jìn)行拍照，用圖像軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。

3.數(shù)據(jù)處理。將所得到的數(shù)據(jù)使用SPSS20.0軟件進(jìn)行分析，將所得到的結(jié)果計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，相關(guān)結(jié)果比較用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Pearson法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）HE染色結(jié)果

根尖炎中的肉芽組織HE染色明顯可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（包括GRA、LYN及Plasma cell等），很多微小的新生血管形成。因正畸而拔牙的健康牙周組織HE染色見(jiàn)大量纖維組織，炎性細(xì)胞較少。

（二）IL-34的表達(dá)

兩組切片行免疫組化，后對(duì)根尖組（n=18）和對(duì)照組（n=9）進(jìn)行IL-34表達(dá)測(cè)量，所得的兩組結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果參見(jiàn)表1，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所得（t=2.59，P=0.017）P<0.05，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（三）IL-34與RANKL和OPG表達(dá)的關(guān)系

如表2所示，經(jīng)Pearson相關(guān)檢驗(yàn)，在根尖炎組中IL-34與RANKL的相關(guān)性分析結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），呈負(fù)相關(guān)。IL-34與OPG的相關(guān)性分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），呈正相關(guān)。

三、討論

本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)了IL-34與根尖周炎的發(fā)生發(fā)展有著很大的聯(lián)系。IL-34的表達(dá)與RANKL表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與OPG的表達(dá)呈正相關(guān)。彭彬等[9]在2005年就在SD大鼠的根尖周炎中發(fā)現(xiàn)了RANKL，在牙髓暴露后的7天觀察就發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞樣細(xì)胞和RANKL呈陽(yáng)性的細(xì)胞。14天后隨著炎性骨吸收進(jìn)一步發(fā)生，破骨細(xì)胞和RANKL陽(yáng)性細(xì)胞繼續(xù)增多。但28天以后，骨吸收減弱，相對(duì)應(yīng)的破骨細(xì)胞和RANKL陽(yáng)性細(xì)胞較少，正好與此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符。黃哲敏[ 10 ]在2015年發(fā)現(xiàn)，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者中的血清中發(fā)現(xiàn)，IL-34與RANKL陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)呈正相關(guān)。國(guó)外學(xué)者在2012年在大鼠的根尖周炎模型中發(fā)現(xiàn)，在根尖周炎發(fā)生后的第7和第8周，發(fā)現(xiàn)RANKL表達(dá)明顯增加，OPG表達(dá)明顯減少。其第7周，兩者比值是正常的對(duì)照組的30倍。第8周，兩者的比例是對(duì)照組的41倍[ 11 ]。Menezes R等[ 12 ]在2008年發(fā)現(xiàn)RANKL和OPG之間的比值大小，可以作為根尖周炎病變不同時(shí)期的標(biāo)準(zhǔn)。

本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的異常原因可能顯示影響RANKL/OPG平衡除了IL-34炎性因子外可能還有其他因子。另外和實(shí)驗(yàn)切片的選取，抗體的購(gòu)買選擇都有可能產(chǎn)生異常結(jié)果，未達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。故下一步?shí)驗(yàn)增加樣本量，并且對(duì)樣本的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格篩選，希望能找到除IL-34外其他能影響RANKL/OPG表達(dá)的炎性因子。

參考文獻(xiàn)

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The Effect of IL-34 on the Balance of RANKL/ OPG in Chronic Periapical Inflammation

WANG Mina，XU Lib，ZHU Yong-naa，ZHANG Xiao-donga

（a.Department of Stomatology，The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China;b.Department of Stomatology，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China）

Abstract：Objective：Chronic apical inflammation is mainly a common oral disease characterized by apical inflammatory bone destruction.RANKL/OPG regulates bone resorption in chronic periapical disease.In this paper，the effect of inflammatory factor IL-34 on the balance of RANKL/OPG is studied，so as to further explore the pathogenic mechanism of IL-34 in the disease.Methods：The granulation tissue of 18 groups of periapical periodontitis was selected in the experimental group，and 8 cases of healthy periodontal tissue in orthodontic extraction were selected in the control group.The expression of IL-34，RANKL and OPG was detected by immunohistochemistry，and the data were measured and quantitatively analyzed.Results：In chronic periapical periodontitis，the expression levels of IL-34 in periapical periodontitis and control group were 0.206 ±0.038 and 0.131 ±0.023 respectively，and the difference was statistically significant （P<0.05）.In periapical periodontitis group，IL-34 was negatively correlated with RANKL （r=-0.578，P=0.039），and IL-34 was positively correlated with OPG （r=0.778，P=0.000）.Discussion：This experiment proves that IL-34 has a great relationship with the occurrence of periapical periodontitis，but IL-34 may only be one of the many inflammatory factors that affect RANKL/OPG balance.

Key words：IL-34;RANKL;OPG