戴青，楊秀玉，趙暉，王軒，韓寧寧

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

水分是獸用藥品檢驗中常見的檢測項目，在藥品檢測領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，檢測實驗室進行水分測定的水平可以客觀地、較有代表性地反映出該實驗室的藥品檢測能力。目前，費休氏法是測定藥物和液體化學(xué)試劑中水分含量最常用的方法[1-2]。藥品中水分測定的影響因素較多，需要較高的技術(shù)能力[3]。

能力驗證是實驗室質(zhì)量保證體系中的一個重要組成部分[4]。參加能力驗證活動是評價實驗室檢測水平，鍛煉人員技術(shù)能力，促進實驗室認可和國際交流的重要手段[5-6]。在檢測和校準(zhǔn)實驗室的國家認可制度中對實驗室參加能力驗證并取得滿意結(jié)果提出了明確要求[7]。本次研究通過組織費休氏法水分測定的能力驗證計劃可以使參加實驗室識別實驗室間存在的差異，促進實驗室共同提高水平。本研究對中國50家獸藥檢測機構(gòu)的水分測定能力進行測試，其中省級獸藥檢測機構(gòu)29家，第三方檢測機構(gòu)3家，獸藥企業(yè)18家，研究水分測定能力驗證的樣品制備、均勻性與穩(wěn)定性、結(jié)果統(tǒng)計、能力評價等情況，并對測試結(jié)果進行討論。

1 材料與方法

1.1 材料 卡氏水分儀(701KF 型， 瑞士萬通公司)；費休氏試液(分析純，F(xiàn)luka公司)；無水甲醇(分析純，Honeywell公司)；液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(來源/標(biāo)準(zhǔn)值/批號：中國計量科學(xué)研究院/1.000%/201801)。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 經(jīng)調(diào)研，中國計量科學(xué)研究院的液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是由高純度有機試劑(包括丁醇和二甲苯等)加入去離子水制成的混合溶液[8]。丁醇和二甲苯沸點均高于100 ℃，性質(zhì)穩(wěn)定，不易揮發(fā)，向其中再定量添加去離子水，配制成本次能力驗證的樣品，即可有效保證樣品的均一穩(wěn)定。因此，購買了同一批次的液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將去離子水定量添加至上述溶液中，混合均勻，在25±2 ℃、相對濕度≤50%的環(huán)境下分裝至棕色安瓿，即制得本次能力驗證樣品。采用上述方法配制兩批能力驗證樣品，其水分值分別為2.41%(低濃度)和3.62%(高濃度)(其水分值為通過計算精密稱定加入的去離子水重量和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)重量而得的理論計算值)。提供給各參加單位樣品A和樣品B各一支(每支裝量均約為1.5 mL)，采用棕色安瓿包裝。

1.2.2 樣品均勻性和穩(wěn)定性考察 從兩組能力驗證樣品中各隨機抽取10支進行均勻性檢驗，每支測定兩次。為考察樣品的穩(wěn)定性，在正式制備本次能力驗證的樣品前，配制兩份小試樣品(計算理論值分別為2.57%和3.52%)各10支，分別用于考察樣品在高濕環(huán)境和高溫環(huán)境下的穩(wěn)定性。為考察開封后的樣品對高濕環(huán)境的耐受性，將小試樣品(計算理論值為2.57%)開封后，放置于實驗室允許的最大濕度(相對濕度70%)條件下，分別放置10 min、30 min、60 min后測定。為考察樣品對運輸過程中高溫的耐受性，將小試樣品(計算理論值為3.52%)放置于可能接觸到的最高溫度(40 ℃)下，分別放置3 d、5 d、7 d后測定。

1.2.3 評定方法及標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)CNAS-GL002《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》要求，采用穩(wěn)健統(tǒng)計法計算各參加實驗室的Z值[9]。本次能力驗證的樣品為將去離子水定量添加至液體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中配制而得，具有理論計算值，為保證指定值具有更小的不確定度，將該理論計算值作為指定值(X)。采用標(biāo)準(zhǔn)化四分位距(NIQR)作為變動性度量值(目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差)。將各實驗室報告的兩種樣品的各兩次測定結(jié)果計算平均值作為實驗室測試結(jié)果(x)，根據(jù)以下公式計算實驗室Z比分數(shù)。

Z=(x-X)/NIQR

以Z比分數(shù)評價各實驗室結(jié)果，即：若同一實驗室兩份樣品的Z比分數(shù)均滿足|Z|≤2，檢測結(jié)果為滿意結(jié)果；若同一實驗室兩份樣品的Z比分數(shù)有1個或兩個滿足2<|Z|<3，檢測結(jié)果為有問題；若同一實驗室兩份樣品的Z比分數(shù)有1個或兩個滿足|Z|≥3，檢測結(jié)果為不滿意結(jié)果或離群值。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品均勻性結(jié)果 采用單因子方差分析法計算統(tǒng)計量F值(表1)，兩種樣品的F值均小于給定顯著性水平α=0.05時的臨界值F0.05(9,10)，表明兩種樣品的均勻性均符合要求。

表1 能力驗證樣品均勻性考察結(jié)果表Tab 1 Results of homogeneity test of proficiency testing samples

2.2 樣品穩(wěn)定性結(jié)果 采用單一樣本t檢驗的方法對測定結(jié)果的平均值與計算理論值(2.57%)進行比較(表2-表5)，結(jié)果顯示t值小于查表值，二者無顯著性差異，表明樣品對高溫和高濕環(huán)境耐受性良好。

表2 小試樣品高濕環(huán)境耐受性測定結(jié)果Tab 2 Results of high humidity environmental tolerance test of small samples

表3 小試樣品高濕環(huán)境測定結(jié)果的單一樣本t檢驗Tab 3 t-test for determination results of high humidity environment of small samples

表4 小試樣品高溫環(huán)境耐受性測定結(jié)果Tab 4 Results of high temperature environmental tolerance test of small samples

表5 小試樣品高溫環(huán)境測定結(jié)果的單一樣本t檢驗Tab 5 t-test for determination results of high temperature environment of small samples

2.3 能力驗證結(jié)果 以實驗室Z比分數(shù)柱狀圖表示各參加實驗室Z值(圖1-圖2)。在Z比分數(shù)的統(tǒng)計中，有39家的結(jié)果為滿意，有4家的結(jié)果有問題，7家的結(jié)果為不滿意或離群值，各占總數(shù)的78.0%、8.0%、14.0%。

對參加能力驗證的省級獸藥檢測機構(gòu)、獸藥企業(yè)及第三方檢測機構(gòu)的結(jié)果進行了對比(圖3)，發(fā)現(xiàn)省級獸藥檢測機構(gòu)的滿意率(93.1%)高于獸藥企業(yè)(61.1%)。這表明省級獸藥檢測機構(gòu)整體具有較高水平的檢測能力，同時應(yīng)注意加強對企業(yè)進行相關(guān)檢測項目的培訓(xùn)與指導(dǎo)。

圖1 低濃度組(2.41%)各實驗室Z比分數(shù)分布圖Fig 1 Distribution of Z-score of laboratories in 2.41% sample groups

圖2 高濃度組(3.62%)各實驗室Z比分數(shù)分布圖Fig 2 Distribution of Z-score of laboratories in 3.62% sample groups

圖3 各檢測機構(gòu)滿意率對比Fig 3 Comparisons of satisfaction rates among testing institutions

3 討論與結(jié)論

《中國獸藥典》一部附錄0832第一法A規(guī)定[10]：精密稱定純化水后用水分測定儀進行標(biāo)定，標(biāo)定過程應(yīng)精密稱取純化水10 mg～30 mg。水分標(biāo)定所得F值的相對平均偏差越小，表明儀器狀態(tài)越穩(wěn)定[11]。實驗室在日常檢驗過程中應(yīng)對水分標(biāo)定這一關(guān)鍵步驟加強重視。藥典凡例中明確規(guī)定：“精密稱定”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。由此可推算而得：精密稱取純化水的操作應(yīng)使用感量為十萬分之一的天平，即讀數(shù)至0.01 mg。有16家實驗室使用了感量為萬分之一的天平，未達到精密稱定的要求，有3家實驗室未按照作業(yè)指導(dǎo)書要求操作，稱取水分重量小于10 mg。上述兩種操作均會導(dǎo)致純化水取樣量不準(zhǔn)確，從而使測定結(jié)果的不準(zhǔn)確性增大[12]。

費休氏試液滴定度太低或太高對滴定的準(zhǔn)確性也有一定的影響[13]。當(dāng)?shù)味ǘ容^低時，需要消耗大量的滴定液，使滴定時間延長，在滴定過程中也可能更多地引入空氣中的水分，從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性；滴定度太高有可能使消耗的滴定液過少，滴定體積的微量變化就可能影響結(jié)果，造成偏差。

本研究首次對中國50家獸藥檢測機構(gòu)的水分測定能力進行了測試，為了能更真實、更全面地反映出各單位的實際檢測能力，本次能力驗證采用當(dāng)前國際上主要實驗室認可機構(gòu)最常用的實驗室間檢測能力驗證方法——分割水平檢測樣品進行，既能客觀地評價實驗室系統(tǒng)誤差，也能客觀地評價實驗室隨機誤差，更有利于分析查找結(jié)果異常產(chǎn)生的原因。通過穩(wěn)健統(tǒng)計法計算各參加實驗室的Z值，測試結(jié)果的滿意率為78.0%，表明國內(nèi)大部分獸藥檢測實驗室具備水分檢測能力，并客觀地反映出各參加實驗室的檢測水平，推動實驗室檢測技術(shù)和實驗室管理水平等方面的進一步提高，對促進行業(yè)檢驗檢測工作高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。