戴媛　張忠琴　喬思琪　冷進(jìn)松

摘要 為優(yōu)化豌豆蛋白提取工藝條件，深入了解其生理功能活性，拓寬豌豆蛋白的產(chǎn)品范圍，以干豌豆為研究對象，采用超聲輔酶法提取豌豆粉中的蛋白質(zhì)，優(yōu)化提取工藝條件并測定提取產(chǎn)物的體外抗氧化活性。在試驗(yàn)范圍內(nèi)，最佳提取工藝條件如下：料液比為1∶30（g∶ mL），提取時(shí)間為50 min，提取次數(shù)3次，超聲波功率為150 W。在此工藝條件下得豌豆蛋白提取率高達(dá)95.64%，其抗氧化活性測定結(jié)果如下：DPPH·自由基的清除率為51.5%，超氧陰離子自由基清除率為54.5%，羥自由基清除率為56.3%，還原力為0.54。因此，優(yōu)化的提取工藝合理、可行，豌豆蛋白具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

關(guān)鍵詞 豌豆蛋白;超聲輔酶法;提取;抗氧化活性

中圖分類號 TS201.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號 0517-6611（2020）13-0165-06

Abstract In order to optimize the extraction conditions of pea protein，deeply understand its physiological function and activity，and broaden the product range of pea protein，the protein from pea powder was extracted by ultrasonic coenzyme method with dried pea as the research object.The extraction conditions were optimized and the antioxidant activity of the extracted products in vitro was determined.The results of the optimum extraction conditions within the scope of experimental research were as follows：the ratio of raw material to water 1∶30（g∶ mL），extracted 50 minutes，3 times，ultrasonic power 150 W.Under those conditions，the extraction rate of pea protein was up to 95.64%.The results of antioxidant activity were as follows：the scavenging rate of pea protein to DPPH·，superoxide anion and hydroxyl radical was 51.5%，54.5% and 56.3%，respectively，and the reducing ability was 0.54.Therefore，the optimization of pea protein extraction process technology was reasonable and feasible，and pea protein had stronger antioxidant activity.

Key words Pea protein;Ultrasonicassisted enzymatic method;Extraction;Antioxidant activity

豌豆（Pisum sativum Linn，pea），別稱麥豌豆、寒豆、麥豆、雪豆、畢豆、麻累、國豆、蠶豆（吳語）等，原產(chǎn)于地中海南部及地中海沿岸，是一種營養(yǎng)性食品[1]。豌豆種子富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、膳食纖維、維生素和礦物質(zhì)等，其中蛋白質(zhì)含量達(dá)20.6%[2]，豌豆蛋白具有抗氧化、抗癌防癌、抗菌消炎和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種生理功能[3]，在眾多功能中，抗氧化作用是其發(fā)揮其他生理功能的基礎(chǔ)。目前有關(guān)豌豆蛋白的研究多針對于理化特性，而關(guān)于其生理功能尤其是抗氧化功能的研究較少。系統(tǒng)地研究豌豆蛋白的抗氧化功能有助于深入挖掘豌豆蛋白的其他生理功能，并為其他生理功能的深入研究奠定基礎(chǔ)。

目前國內(nèi)外提取豌豆蛋白的方法主要有物理法（超濾膜法、超聲波提取法）、化學(xué)法（鹽析法、沉淀法）和生物學(xué)法（酶水解法）3種。將超聲波提取技術(shù)與酶水解2種提取方法有機(jī)結(jié)合，也就實(shí)現(xiàn)了物理法與生物學(xué)法之間的結(jié)合，進(jìn)而得到一種具有提取率高、提取時(shí)間短、工作效率高等優(yōu)點(diǎn)的超聲輔酶法。該研究采用超聲輔酶法提取豌豆蛋白，設(shè)置合理的工藝條件，確定最佳工藝參數(shù)，使豌豆蛋白提取工藝得到優(yōu)化，提高豌豆蛋白提取率，并測定提取產(chǎn)物豌豆蛋白的抗氧化活性，以期為豌豆蛋白的深入研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 豌豆，網(wǎng)絡(luò)購買，產(chǎn)于河南商丘;堿性蛋白酶購自浙江博南生物科技有限公司;考馬斯亮藍(lán)G-250購自上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司;牛血清蛋白購自蘇州達(dá)麥迪生物醫(yī)學(xué)科技有限公司;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）購自合肥巴斯夫生物科技有限公司;三羥甲基氨基甲烷和鄰苯三酚購自成都市科龍化工試劑廠;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備 UV 2600型紫外可見分光光度計(jì)（上海天美科技科學(xué)儀器有限公司）;TG16W高速離心機(jī)（長沙平凡儀器儀表有限公司）;SB-5200 DTDN超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）;RRH-250型高速多功能粉碎機(jī)（上海緣沃工貿(mào)有限公司）;KDN-102C凱氏定氮儀 （上海纖檢儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 豌豆蛋白提取的工藝流程。干豌豆→粉碎成粉→加水混勻→加酶→調(diào)節(jié)溶液pH（酶的最適pH）→在超聲波輔助提取下提取一定時(shí)間→100 ℃水浴，滅酶10 min→6 000 r/min 離心15 min→去掉上層的脂肪結(jié)塊和下層沉淀→收集中間的清液→分光光度計(jì)測吸光度→計(jì)算蛋白質(zhì)含量。

1.3.2 豌豆基礎(chǔ)成分的測定。水分：常壓干燥法，參照GB/T 5009.3—2016[4];蛋白質(zhì)：凱氏定氮法，參照GB/T 5009.5—2016[5]。

1.3.3 蛋白含量測定。

1.3.3.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)樣品，采用考馬斯亮藍(lán)法測定其含量，以吸光度值（A）為橫坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度（μg/mL）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]。

1.3.3.2 蛋白含量測定。取0.3 mL提取液于試管中，加015 mol/L氯化鈉溶液定容至1 mL，加5.0 mL考馬斯亮藍(lán)溶液后搖勻，在595 nm波長下測定吸光值。與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，計(jì)算蛋白質(zhì)含量[7]。

1.3.4 單因素試驗(yàn)。采用“1.3.1”方法提取蛋白質(zhì)，固定提取條件為提取次數(shù)3次、提取時(shí)間50 min、超聲波功率150 W，考察不同料液比對豌豆蛋白提取率的影響;固定提取條件為提取次數(shù)3次、料液比1∶30（g∶mL）、超聲波功率150 W，考察不同提取時(shí)間對豌豆蛋白提取率的影響;固定提取條件為料液比1∶30、超聲波功率150 W、提取時(shí)間50 min，考察提取次數(shù)對豌豆蛋白提取率的影響;固定提取條件為提取次數(shù)3次、料液比1∶30、提取時(shí)間50 min，考察超聲波功率對豌豆蛋白提取率的影響。

1.3.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用Design Expert軟件的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以豌豆蛋白提取率為響應(yīng)值（Y），以料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）、超聲波功率（D）為自變量，設(shè)計(jì)四因素三水平響應(yīng)面分析試驗(yàn)，以優(yōu)化豌豆蛋白提取工藝。因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

1.3.6 抗氧化活性測定。取最佳工藝條件下制得的蛋白質(zhì)提取液，測定其抗氧化活性。

1.3.6.1 DPPH·自由基清除率的測定。參考Teng等[8]的方法，并略作修改：將配成不同底物濃度的蛋白溶液2 mL和0.2 mmol/L的DPPH·溶液2 mL，立即混勻，在避光處保存30 min，以無水乙醇溶液作為參比溶液，在波長為517 nm處測定吸光度（Ai）;用無水乙醇溶液代替DPPH·溶液，測定吸光度（Aj）;用無水乙醇溶液代替豌豆蛋白溶液測定吸光度（A0）。清除率計(jì)算公式：

清除率=A0-（Ai-Aj）A0×100%（1）

1.3.6.2 超氧陰離子自由基

（O2·-）清除率的測定。采用鄰苯三酚法[9]：4.5 mL Tris-HCl和3.3 mL蒸餾水混勻后，25 ℃下保持20 min后加入0.9 mL提取液和0.3 mL鄰苯三酚溶液，混勻后倒入比色皿，以10 mmol/L的HCl作參比溶液，在波長為320 nm處，每30 s測定吸光度，計(jì)算4 min內(nèi)平均每分鐘吸光度的增加A2，并計(jì)算不加樣品的對照組的吸光度A1。清除率計(jì)算公式：

清除率=A1-A2A1×100%（2）

1.3.6.3 還原力測定。參考Benzie等[10]的方法：1 mL蛋白質(zhì)提取液中加入2.5 mL pH為6.6的0.2 mol/L磷酸緩沖液（PBS），50 ℃水浴20 min，快速冷卻后加入2.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸（TCA）溶液，3 000 r/min離心10 min后取上清液2.5 mL，再加入2.5 mL蒸餾水、0.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的FeCl3溶液，混合均勻，于10 min后以蒸餾水作為參比液，波長700 nm處測定吸光度（A），并測定不加樣品的對照組的吸光度（A0）。還原力計(jì)算公式：

還原力=A-A0 （3）

1.3.6.4 羥自由基（·OH）清除率的測定。參考水楊酸法[11]，并作相應(yīng)改動(dòng)：蛋白質(zhì)提取液1 mL，加入FeSO4溶液、水楊酸-乙醇溶液和H2O2溶液各1 mL，37 ℃下保持30 min后離心，以蒸餾水作參比溶液，510 nm波長處測定吸光度（Ai），用蒸餾水溶液代替H2O2溶液，測定吸光度（Aj）;用蒸餾水代替提取液測定吸光度（A0）。清除率計(jì)算公式：

清除率=A0-（Ai-Aj）A0×100%（4）

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用Microsoft Excel 2007、Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、分析及繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 豌豆基礎(chǔ)成分的測定結(jié)果 豌豆中水分含量為912%，蛋白質(zhì)含量為20.60%。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 料液比對豌豆蛋白提取率的影響。由圖1可知，隨著料液比的不斷減小，蛋白質(zhì)提取率不斷增大，當(dāng)料液比在1∶30時(shí)，提取率達(dá)到最大，主要是由于溶劑與樣品接觸面濃度差變大，引起滲透壓增大，更有利于溶質(zhì)的滲出，最終得到蛋白質(zhì)提取率不斷升高的現(xiàn)象[12];隨后料液比減小，提取率下降，主要是由于隨著料液比的不斷減小，提取液中蛋白質(zhì)濃度降低，增加了蛋白質(zhì)的提取難度。因此，選擇料液比1∶25、1∶30、1∶35進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.2 提取時(shí)間對豌豆蛋白提取率的影響。由圖2可知，隨著提取時(shí)間的增加，蛋白質(zhì)提取率呈先上升后下降的變化趨勢，在提取時(shí)間為50 min時(shí)，蛋白質(zhì)提取率達(dá)到最大。主要由于提取時(shí)間增加，溶質(zhì)的溶解度逐漸增大，酶與蛋白質(zhì)充分反應(yīng)，當(dāng)達(dá)到一定時(shí)間后，溶質(zhì)的溶解度達(dá)到最大，且酶活性降低，進(jìn)而蛋白質(zhì)的提取達(dá)到最大限度，不再溶出蛋白質(zhì)[13]。因此，選擇提取時(shí)間40、50、60 min進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.3 提取次數(shù)對豌豆蛋白提取率的影響。由圖3可知，提取次數(shù)不同豌豆蛋白提取率不同，隨著提取次數(shù)的增加，豌豆蛋白提取率呈上升趨勢，當(dāng)次數(shù)在1～3時(shí)，提取率上升趨勢明顯，之后繼續(xù)增加提取次數(shù)，提取率雖有上升，但是幅度很小，這主要是由于前期已經(jīng)將大部分蛋白質(zhì)提取出來，后期繼續(xù)提取效果已不明顯，反而會(huì)增加時(shí)間和試劑的消耗，因此，選擇提取2、3和4次進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.4 超聲波功率對豌豆蛋白提取率的影響。由圖4可知，隨著超聲波功率的增大，豌豆蛋白提取率先增加后下降，在超聲波功率為150 W時(shí)，提取率達(dá)到最大。這是因?yàn)槌暡ǖ墓β试黾?，其空化效?yīng)和機(jī)械效應(yīng)就愈加明顯，作用更加強(qiáng)烈，將植物細(xì)胞壁進(jìn)一步破碎，增大蛋白質(zhì)溶出速率，進(jìn)而使蛋白質(zhì)更易溶出。但超聲波功率大于150 W后，超聲波作用則會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性，最終會(huì)影響蛋白質(zhì)提取率[14]。因此，選擇超聲波功率120、150和180 W進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)

2.3.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果。在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，以豌豆蛋白提取率為響應(yīng)值（Y），以料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）、超聲波功率（D）為自變量，應(yīng)用Design Expert8.0.6統(tǒng)計(jì)分析軟件設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，結(jié)果如表2所示。

2.3.2 回歸模型擬合及方差分析。利用統(tǒng)計(jì)軟件對表2數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到提取率（Y）與自變量之間的回歸方程，即：

分析可知，回歸模型P<0.01，表明該回歸模型極顯著;模型的R2=0.962 5，表明模型的擬合值與實(shí)際結(jié)果的相關(guān)性較高;失擬項(xiàng)不顯著（P>0.05），說明回歸方程擬合較好，模型穩(wěn)定;變異系數(shù)CV=4.69%<10.00%，進(jìn)一步說明模型擬合較好，可用來進(jìn)行分析和預(yù)測。

由F可知，4個(gè)因素對響應(yīng)值影響的大小順序A>B >C>D，其中，一次項(xiàng)A和交互項(xiàng)AB，以及二次項(xiàng)A2、B2、C2、D2對響應(yīng)值的影響極顯著（P<0.01），一次項(xiàng)B和交互項(xiàng)AC、AD對響應(yīng)值的影響顯著（P<0.05）。

2.3.3 響應(yīng)面分析。兩因素之間的交互作用對響應(yīng)值的影響可以通過響應(yīng)面圖反映出來，響應(yīng)曲面坡度越陡峭，說明因素改變對于響應(yīng)值的影響越大，而曲面坡度越平滑，說明因素改變對響應(yīng)值的影響也就越小[15]。圖5為料液比與提取時(shí)間、料液比與提取次數(shù)、料液比與超聲波功率、提取時(shí)間與提取次數(shù)、提取時(shí)間與超聲波功率、提取次數(shù)與超聲波功率之間交互作用對豌豆蛋白提取率的影響。從圖中可以看出，圖5a曲面坡度最陡峭，圖5b和圖5c曲面坡度較陡峭，而圖5d、圖5e和圖5f曲面坡度較平滑，說明料液比與提取時(shí)間的交互作用對豌豆蛋白提取率的影響最明顯，其次是料液比與提取次數(shù)的交互作用、料液比與超聲波功率的交互作用的影響，而提取時(shí)間與提取次數(shù)、提取時(shí)間與超聲波功率、提取次數(shù)與超聲波功率的交互作用對豌豆蛋白提取率的影響不明顯，此結(jié)果與方差分析結(jié)果一致。

2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn)。對回歸方程進(jìn)行分析求解，得豌豆蛋白提取率達(dá)到最大值時(shí)的提取條件為料液比1∶30.51，提取次數(shù)3.1次，提取時(shí)間50.22 min，超聲波功率150.98 W，此條件下的提取率預(yù)測值為95.04%。為方便試驗(yàn)操作，將提取條件定為料液比1∶30，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間50 min，超聲波功率150 W，在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，得豌豆蛋白提取率為95.64%，預(yù)測誤差為0.63%，與預(yù)測值接近。說明此模型可以用于豌豆蛋白提取條件的分析預(yù)測，響應(yīng)面法也可以有效優(yōu)化豌豆蛋白提取工藝條件。

2.4 抗氧化活性試驗(yàn)

2.4.1 DPPH·清除率測定結(jié)果。DPPH·是一種很穩(wěn)定的氮中心的自由基，它的無水乙醇溶液呈紫色，在517 nm波長處有最大吸收，吸光度與濃度呈線性關(guān)系，向其中加入自由基清除劑時(shí)，可以結(jié)合或替代DPPH·，使自由基數(shù)量減少，吸光度變小，溶液顏色變淺，進(jìn)而可評價(jià)其清除自由基的能力[16]。豌豆蛋白提取物對DPPH·的清除能力如圖6所示，由圖中可以看出，DPPH·清除率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，當(dāng)豌豆蛋白提取物濃度為1%～3%時(shí)，隨著濃度的升高，DPPH·清除率上升，當(dāng)濃度達(dá)3%時(shí)，DPPH·清除率達(dá)到最大值51.5%。之后隨著濃度的下降， DPPH·清除率也下降。說明豌豆蛋白具有一定的清除DPPH·自由基的作用，且最佳清除濃度為3%。

2.4.2 超氧陰離子自由基（O2·-）清除率測定結(jié)果。O2·-在水溶液中不太活潑，但其質(zhì)子化形式HOO·比較活潑，它可以啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并能和GSH反應(yīng)。細(xì)胞膜表面的微酸性環(huán)境非常利于HOO·的生成，HOO·的穿透性很強(qiáng)，容易引起細(xì)胞膜深層及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的損傷[17]。因此，通過測定O2·-的清除率可判斷物質(zhì)抗氧化能力的強(qiáng)弱。豌豆蛋白提取物對O2·-的清除率如圖7所示，從圖中可以看出，O2·-的清除率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。當(dāng)提取物濃度為1%～3%時(shí)，O2·-清除率隨提取物濃度的增加而升高，當(dāng)提取物濃度達(dá)3%時(shí)，O2·-清除率達(dá)到最大值54.5%，之后當(dāng)濃度為3%～5%時(shí)，清除率逐漸下降。結(jié)果表明豌豆蛋白具有一定清除O2·-的作用，且最佳清除濃度為3%。

2.4.3 還原力測定結(jié)果。由圖8可知，在1%～3%內(nèi)，隨著濃度的增加，吸光度增大，還原力也增大，這是因?yàn)楫?dāng)提取物濃度增大時(shí)，和堿性蛋白酶接觸并反應(yīng)得更加充分，其還原力也隨著提取物濃度的增大而增大，當(dāng)提取物濃度為3%時(shí)，吸光度最大，即還原力最大，但在3%～5%內(nèi)，提取物濃度繼續(xù)增大，吸光度逐漸變小，還原力也變小，主要是因?yàn)楫?dāng)提取物濃度增大到一定程度時(shí)，會(huì)抑制酶促反應(yīng)的進(jìn)行[18]，因此，其還原力最強(qiáng)的濃度為3%。

2.4.4 ?羥自由基（·OH）測定結(jié)果。·OH是已知的氧自由基中最強(qiáng)的氧化劑，它可以啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，幾乎可以和所有的細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng)，對機(jī)體的危害極大[19]。因此，通過測定物質(zhì)清除·OH的能力可以判斷物質(zhì)抗氧化能力的強(qiáng)弱。由圖9可以看出，豌豆蛋白提取物對·OH的清除能力隨濃度增加呈先上升后下降趨勢，即在濃度為1%～3%時(shí)，清除率逐漸上升，濃度達(dá)3%時(shí)，清除率達(dá)到最高點(diǎn)56.3%，之后當(dāng)濃度為3%～5%時(shí)，清除率逐漸下降，此結(jié)果表明，豌豆蛋白具有一定的清除·OH的能力，且清除效果最佳的濃度為3%。

3 結(jié)論

該研究采用超聲輔酶法從豌豆中提取豌豆蛋白，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化豌豆蛋白的提取工藝，并得到豌豆蛋白提取的最佳工藝條件為料液比1∶30（g∶mL），提取次數(shù)3次，提取時(shí)間50 min，超聲波功率150 W，在此條件下得豌豆蛋白提取率為95.64%，預(yù)測值為95.04%，預(yù)測誤差為0.63%，說明采用響應(yīng)面方法優(yōu)化豌豆蛋白提取工藝可行，此結(jié)果為今后對豌豆蛋白的進(jìn)一步研究奠定了理論基礎(chǔ)。

抗氧化活性試驗(yàn)結(jié)果表明，豌豆蛋白具有一定的抗氧化能力，其中，對DPPH·、O2·-和·OH的最大清除率分別為51.5%、54.5%、56.3%，最大還原力為0.54，此結(jié)果可為豌豆蛋白在食品及醫(yī)藥保健品等領(lǐng)域的開發(fā)利用提供一定的借鑒。

參考文獻(xiàn)

[1]梁晗妮，唐傳核.豌豆蛋白的功能特性研究[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28（12）：1640-1644.

[2] 薛園園.豌豆蛋白的酶水解及其產(chǎn)物抗氧化性能研究[D].鄭州：河南工業(yè)大學(xué)，2011.

[3] 師偉偉，華欲飛.豌豆粉絲廠廢水中蛋白質(zhì)的提取和性質(zhì)研究[J].食品工業(yè)科技，2014，35（1）：120-124.

[4] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測定：GB/T 5009.3—2016[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[5] 國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定：GB/T 5009.5—2016[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[6] 柳蔭，吳鳳智，陳龍，等.考馬斯亮藍(lán)法測定核桃水溶性蛋白含量的研究[J].中國釀造， 2013，32（12）：131-133.

[7] 鄧麗莉，潘曉倩，生吉萍，等.考馬斯亮藍(lán)法測定蘋果組織微量可溶性蛋白含量的條件優(yōu)化[J].食品科學(xué)，2012， 33（24）：185-189.

[8] TENG D，F(xiàn)ANG Y，SONG X Y，et al.Optimization of enzymatic hydrolysis parameters for antioxidant capacity of peptide from goat placenta[J].Food and bioproducts processing，2011，89（3）：202-208.

[9] 楊文麗，楊光，楊波.納豆多糖發(fā)酵工藝的優(yōu)化及清除自由基研究[J].工業(yè)微生物，2018，48（6）： 39-45.

[10] BENZIE I F，STRAIN J J.The ferric reducing ability of plasma （FRAP） as a measure of"antioxidant power"：The FRAP assay[J].Analytical biochemistry，1996，239（1）：70-76.

[11] 葛慧芳，孫明飛，葉佳，等.川芎醇提物抗氧化活性及抗食源性致病菌特性分析[J].食品工業(yè)科技，2019，40（10）：127-132.

[12] PILLAI P K S，STONE A K，GUO Q，et al.Effect of alkaline deesterified pectin on the complex coacervation with pea protein isolate under different mixing conditions [J].Food chemistry，2019，284：227-235.

[13] CHAO D F，JUNG S，ALUKO R E.Physicochemical and functional properties of high pressuretreated isolated pea protein [J].Innovative food science and emerging technologies，2018，45：179-185.

[14] 張曉云，謝玲燕，季明敏，等.超聲波輔助堿法提取芡實(shí)蛋白工藝[J].食品研究與開發(fā)，2012，33（11）：96-99.

[15] CUI H，PAN H W，WANG P H，et al.Essential oils from Carex meyeriana Kunth：Optimization of hydrodistillation extraction by response surface methodology and evaluation of its antioxidant and antimicrobial activities [J].Industrial crops and products，2018，124：669-676.

[16] HA MLAOUI I，BENCHERAIET R，BENSEGUENI R，et al.Experimental and theoretical study on DPPH radical scavenging mechanism of some chalcone quinoline derivatives[J].Journal of molecular structure，2018，1156：385-389.

[17] RANJBARAN A，KAVOOSI G，MOJALLALABATABAEI Z，et al.The antioxidant activity of Trachyspermum ammi essential oil and thymol in murine macrophages[J].Biocatalysis and agricultural biotechnology，2019，20：1-7.

[18] 黃越，周春暉，黃惠華.不同提取方法猴頭菇粗多糖的表征及其抗氧化活性的比較[J].食品工業(yè)科技，2017，38（3）：80-86.

[19] POWNALL T L，UDENIGWE C C，ALUKO R E.Effects of cationic property on the in vitro antioxidant activities of pea protein hydrolysate fractions [J].Food research international，2011，44（4）：1069-1074.