王顥，譚玉杰

(鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院，河南 洛陽(yáng) 471009)

發(fā)生自然流產(chǎn)的次數(shù)超過(guò)2次(≥2)且是與同一性伴侶共同經(jīng)歷的事件，我們通常稱為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(RM)。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因復(fù)雜，嚴(yán)重危害人類的生育健康。目前其發(fā)病機(jī)制不明，治療處于摸索階段，因此成為婦產(chǎn)科領(lǐng)域的研究重點(diǎn)與難點(diǎn)[1-2]。miRNA是一種不編碼蛋白質(zhì)的RNA分子，由18～25個(gè)核苷酸組成，它可以通過(guò)干預(yù)調(diào)控基因的表達(dá)起到干預(yù)細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的作用。在妊娠多種相關(guān)疾病的研究中發(fā)現(xiàn)它的干預(yù)效應(yīng)明顯[3-4]。有研究報(bào)道m(xù)iR-1233在胎盤(pán)組織中的異常高表達(dá)明顯影響妊娠期高血壓疾病的發(fā)病進(jìn)程，同時(shí)發(fā)現(xiàn)HoxB3是具有拮抗miR-1233生物效能的細(xì)胞因子[5]。在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中miR-1233與HoxB3相互間的影響及它們對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的干預(yù)效果，目前還不明確。本研究旨在探討miR-1233，HoxB3和VEGF在RM發(fā)生中的作用機(jī)制，希望能在效應(yīng)基因序列未變的情況下通過(guò)分子調(diào)控改變其表達(dá)水平，以達(dá)到改善妊娠結(jié)局的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年3月—2019年3月在我院就診的90 例RM患者(連續(xù)經(jīng)歷≥2 次的20 周前的自然流產(chǎn))為觀察組。將其分為觀察1組(自然流產(chǎn)2次)、觀察2組(自然流產(chǎn)3次)和觀察3組(自然流產(chǎn)≥4次)，每組30 例。選擇同期因意外妊娠行人工流產(chǎn)的30 例患者為對(duì)照組(無(wú)自然流產(chǎn)史及其他不良妊娠史且非人工受孕等)。兩組患者年齡20～40 歲。無(wú)菌絨毛組織由人流術(shù)獲取，并液氮冷存。

1.2 方法及觀察指標(biāo)

1.2.1 檢測(cè)絨毛組織中miR-1233和HoxB3 mRNA的表達(dá)

提取絨毛組織總RNA，對(duì)待測(cè)基因進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)，測(cè)定miR-1233和HoxB3 mRNA的表達(dá)。

1.2.2 VEGF測(cè)定

空腹抽取肘靜脈血3 mL，3 000 r/min離心10 min，制備血清。采用購(gòu)自晶美生物技術(shù)有限公司的酶聯(lián)免疫法(ELISA)試劑盒測(cè)定VEGF水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

與對(duì)照組比較，觀察1，2，3組絨毛中miR-1233的表達(dá)明顯增高，HoxB3和VEGF的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在觀察1，2，3組之間比較可以看出隨著流產(chǎn)次數(shù)的增加，絨毛中miR-1233的表達(dá)逐漸增高，HoxB3和VEGF的表達(dá)越來(lái)越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 兩組miR-1233和HoxB3及血清VEGF表達(dá)情況比較

3 討 論

miRNA在體內(nèi)穩(wěn)定且代謝周期長(zhǎng)(高度保守)，可以作為治療及預(yù)后判斷的分子標(biāo)記物。有研究發(fā)現(xiàn)由于它的異常調(diào)控使RM向不可逆轉(zhuǎn)的方向發(fā)展[6]。miRNA家族成員眾多，近年來(lái)逐漸被人們認(rèn)識(shí)。有研究發(fā)現(xiàn)miR-1233參與細(xì)胞周期調(diào)控，可干預(yù)細(xì)胞DNA的復(fù)制起始和增殖[7]。遺傳基因?qū)W發(fā)現(xiàn)miR-1233過(guò)表達(dá)是引發(fā)自身性炎性反應(yīng)的主要原因[8]。HoxB3是miR-1233調(diào)控下的細(xì)胞因子，能促進(jìn)細(xì)胞的增殖與分化，同時(shí)參與血管內(nèi)皮增生、腫瘤血管及淋巴管的生成等[9-11]。在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中miR-1233和HoxB3的表達(dá)及其影響目前還不明確。本研究認(rèn)為絨毛中miR-1233在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中表達(dá)相對(duì)較高，且伴隨流產(chǎn)次數(shù)的增多，差異也越顯著地表現(xiàn)出來(lái)。研究發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛細(xì)胞有特征性的高凋亡率。因此我們推測(cè)miR-1233的過(guò)度表達(dá)促使胚胎組織凋亡速率大幅增加，加快了滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的進(jìn)程，最終導(dǎo)致妊娠失敗。

同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)RM患者的絨毛組織中HoxB3和VEGF相對(duì)于正?；颊弑磉_(dá)水平低，且流產(chǎn)發(fā)生頻率越高，彼此之間的表達(dá)差異就越明顯。既往研究發(fā)現(xiàn)HoxB3可調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞DNA的復(fù)制起始和增殖，且其作用機(jī)制與miR-1233相反[3-4]。有研究發(fā)現(xiàn)VEGF低表達(dá)可導(dǎo)致絨毛組織血管新生受阻，加速孕囊萎縮壞死排出[12]。因此我們推斷HoxB3因子作為miR-1233的下游負(fù)調(diào)控因子，表現(xiàn)出伴隨miR-1233過(guò)表達(dá)，負(fù)反饋性地減少表達(dá)，從而起到抑制細(xì)胞DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖分化的作用。同時(shí)干預(yù)VEGF的生成，破壞細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供給，從而更進(jìn)一步加速胚胎組織凋亡過(guò)程。

綜上所述，miR-1233，HoxB3及VEGF可能通過(guò)調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡參與RM的發(fā)生、發(fā)展，并起著至關(guān)重要的作用。