孫宇婷 馮鈺珉 戴科芳 郝進敏

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的原發(fā)性腫瘤，WHO分級Ⅰ～Ⅱ級膠質(zhì)瘤5 年存活率在30%～70%，Ⅳ級存活期僅9～12 個月[1]。DEAD 盒蛋白（DEAD-box protein，Ddx）是一類高度保守的RNA 解旋酶。多種癌癥Ddx5和Ddx17表達水平升高，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[2]。本文探討人腦膠質(zhì)瘤Ddx5和Ddx17表達水平變化及其與病人臨床預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選取2013 年1 月至2016 年6 月手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤組織120 例，術(shù)前均未接受過放、化療，其中男62 例，女58 例；年齡24～77 歲，平均（52.64±3.24）歲；腫瘤全切除71 例，次全切除49 例；WHO分級Ⅰ級14例，Ⅱ級36例，Ⅲ級22例，Ⅳ級48例；星形膠質(zhì)瘤42例，少突膠質(zhì)瘤38例，室管膜瘤17例，混合膠質(zhì)瘤23例；術(shù)后化療62例。另選取50例顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)中切取正常腦組織為對照，其中男33 例，女17 例；年齡36～65 歲，平均（52.06±8.96）歲。兩組性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 免疫組化法檢測Ddx5 和Ddx17 的表達 取膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織石蠟切片（4～8 μm），經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化、枸櫞酸溶液抗原修復(fù)后，聚乙二醇辛基苯基醚通透，用3%H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶，隨后用山羊血清封閉。滴加兔抗人Ddx5 或Ddx17一抗（1:500，美國Invitrogen 公司），4 ℃孵育過夜。用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法顯色，蘇木精復(fù)染。顯微鏡下觀察Ddx5 為黃褐色，染色位于細胞核；Ddx17 為黃褐色，染色位于細胞質(zhì)（圖1）。每張切片觀察5個視野，每個高倍鏡至少觀察100個細胞。染色強度評分：無著色0分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。染色細胞百分比評分：陽性細胞數(shù)＜5%為0 分；5%～25%為1 分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；＞75%為4分。染色強度評分+染色細胞百分比評分在0～3分為低表達，＞3分為高表達[3]。

1.3 隨訪 術(shù)后以電話和門診方式進行隨訪，隨訪時間截止至2018年9月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計量資料用±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，采用log-rank 檢驗；采用多因素Cox比例回歸風險模型分析生存預(yù)后危險因素；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人腦膠質(zhì)瘤組織Ddx5 和Ddx17 的表達情況 膠質(zhì)瘤組織Ddx5 和Ddx17 高表達分別為84 例、79 例，低表達分別為36例、41例。對照組Ddx5和Ddx17高表達分別為14 例、19 例，低表達分別為36 例、31例。膠質(zhì)瘤組織Ddx5（70.0%）和Ddx17（65.8%）高表達率均明顯高于對照組（分別為28.0%、38.0%；P＜0.05）。高級別膠質(zhì)瘤Ddx5 和Ddx17 高表達率明顯高于低級別膠質(zhì)瘤（P＜0.05）。

2.2 膠質(zhì)瘤病人生存期的影響因素 多因素Cox比例回歸風險模型分析結(jié)果顯示，年齡≥60歲、術(shù)前KPS評分＜80 分、高級別膠質(zhì)瘤、術(shù)后未化療、Ddx5 和Ddx17高表達是膠質(zhì)瘤病人PFS和OS較短的獨立影響因素（P＜0.05），見表1、2。

2.3 Ddx5和Ddx17與膠質(zhì)瘤病人生存期的關(guān)系120例膠質(zhì)瘤隨訪86～2178 d，死亡39例，復(fù)發(fā)89例。與低表達組比較，Ddx5和Ddx17高表達組PFS和OS均明顯縮短（P＜0.05，圖2）。

3 討論

Ddx5是一種具有多種生物活性功能的核蛋白，在轉(zhuǎn)錄、前mRNA 處理或選擇性剪接和miRNA 處理等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用[2]。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人腦膠質(zhì)瘤組Ddx5 表達水平明顯增高。這與Luo 等[4]發(fā)現(xiàn)一致。研究發(fā)現(xiàn)Ddx5 可能通過Wnt/β-catenin信號通路發(fā)揮促癌作用[2]。但Quan等[5]發(fā)現(xiàn)Ddx5可能通過抑制酪氨酸激酶2/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3 通路抑制基底細胞的增殖、侵襲和遷移。這種差異可能與組織特異性有關(guān)。本文多因素Cox比例回歸分風險模型分析結(jié)果顯示，Ddx5高表達是膠質(zhì)瘤病人PFS 和OS 縮短的獨立危險因素。這與練曉文等[6]發(fā)現(xiàn)一致。

表1 膠質(zhì)瘤病人無進展生存期影響因素的Cox比例回歸風險模型分析結(jié)果

表2 膠質(zhì)瘤病人總生存期影響因素的Cox比例回歸風險模型分析結(jié)果

Ddx5 和Ddx17 具有高度同源性。Ddx5/Ddx17作為轉(zhuǎn)錄共同調(diào)節(jié)因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本文發(fā)現(xiàn)Ddx17 與膠質(zhì)瘤病人的不良預(yù)后有關(guān)。放療和化療是高級別膠質(zhì)瘤的主要輔助治療手段。研究顯示，術(shù)后放療和/或化療后Ddx5和Ddx17高表達病人生存率明顯低于低表達病人，提示Ddx5和Ddx17表達水平可有用于評估放、化療效果[4]。

總之，膠質(zhì)瘤Ddx5 和Ddx17 表達水平顯著增高，二者均與膠質(zhì)瘤病人的不良預(yù)后有關(guān)。