朱昌松 張南專

摘要：目的，建立測定胸腺五肽制劑半成品含量的UPLC法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法 色譜條件：以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液PH：7.0-甲醇=（90：10）為流動(dòng)相，等度洗脫：進(jìn)樣量為4ul，流速0.2ml/min，檢測波長275nm.結(jié)果：在1ug-3ug范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系（R=0.99996），空白溶劑對(duì)該法無干擾，重復(fù)性RSD=0.3%，中間精密度RSD=0.2%;溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD=0.3%;不同加標(biāo)量的平均回收率為100.13%;耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各條件檢測結(jié)果RSD=1%以內(nèi)，采用HPLC與UPLC對(duì)6批樣品的含量測定進(jìn)行對(duì)比，兩法相對(duì)偏差均未超過0.5%，結(jié)論UPLC法快速、簡便、準(zhǔn)確性、專屬性強(qiáng)。適用于胸腺五肽制劑半成品含量測定。

關(guān)鍵詞：胸腺五肽制劑半成品;UPLC;含量

【中圖分類號(hào)】R-02? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B??? 【文章編號(hào)】2107-2306（2020）02-297-02

引言

胸腺五肽適用于惡性腫瘤﹑急慢性肝炎﹑外科大手術(shù)及嚴(yán)重感染﹑自身免疫性疾病﹑年老體弱免疫功能低下的患者的輔助治療，是比較安全有效的.目前國內(nèi)采用HPLC測定其含量和有關(guān)物質(zhì)，其方法檢測時(shí)間長，化學(xué)試劑用量大，本文參照HPLC含量測定方法建立其UPLC含量測定法。

1材料

[樣品與對(duì)照品] 胸腺五肽注射液（20190601、20190602、20190605）;注射用胸腺五肽（20190601、20190602、20190605），工作對(duì)照品（O1810026）.

[主要試劑及儀器]CQUITY? UPLC –Class型超高效液相色譜儀。ACQ? TUV 紫外檢測器;Waters? C18? 2.1*50mm 1.7um色譜柱;磷酸二氫鉀（成都市科隆化學(xué)品有限公司 批號(hào)：2018062201? 分析純）? 氫氧化鈉（成都市科隆化學(xué)品有限公司?? 批號(hào)：2018070201 ???分析純）甲醇（美國天地 批號(hào)：19025062??? 色譜純）。

[色譜條件]以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液PH：7.0-甲醇=（90：10）為流動(dòng)相，等度洗脫;進(jìn)樣量為4ul，流速0.2ml/min，檢測波長275nm，同時(shí)精密稱取胸腺五肽對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并制成每1 ml含主藥0.5mg，精密量取4ul注入超高效液相色譜儀，理論板數(shù)按胸腺五肽峰計(jì)應(yīng)不低于2000。

2.方法與結(jié)果

[系統(tǒng)適用性試驗(yàn)] 稱取胸腺五肽對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并制成每1 ml中含0.5mg胸腺五肽約0.5mg作為系統(tǒng)適用性溶液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RSD=0.2%，理論板數(shù)為3625。

[專屬性]配制空白溶劑，空白輔料溶液 對(duì)照品溶液與供試品溶液，進(jìn)行輔料干擾分析，結(jié)果顯示，空白溶劑與空白輔料在該條件無吸收峰，對(duì)含量測定無干擾，方法專屬性良好，結(jié)果見下表：

[線性試驗(yàn)]? 配制濃度為0.5mg對(duì)照品溶液，分別精密量取2ul、3ul、4ul、5ul、 6ul 注入液相色譜儀，記錄峰面積，以主峰峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣體積（ul） 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=296469X-23302，相關(guān)系數(shù)r=0.99996，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在進(jìn)樣濃度為1ug-3ug范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系.

[重復(fù)性與中間精密度試驗(yàn)] 結(jié)果顯示重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD=0.3%，中間精密度RSD=0.2%.

[準(zhǔn)確度試驗(yàn)]在空白輔料中加入對(duì)照品制成加標(biāo)對(duì)照品約為10.24mg/ml? 12.59mg/ml ??15.13mg/ml的溶液各三份，計(jì)算回收率， 回收率分別為：99.89% 、 100.07% 、 100.43%，平均回收率為：100.13 %..表明方法準(zhǔn)確度高.

[溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)]? 取供試品溶液于第0 、2 、4、 8 、12小時(shí)進(jìn)樣，進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積RSD，結(jié)果顯示 RSD為0.3%，表明樣品在溶解后在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好.

[耐用性實(shí)驗(yàn)]結(jié)果顯示 RSD均在1.0%以內(nèi)，表明當(dāng)色譜柱、流速、柱溫等條件微小變化時(shí)對(duì)含量測定結(jié)果無影響.

[UPLC法與HPLC法對(duì)比試驗(yàn)]6批樣品的含量測定結(jié)果表明，相對(duì)偏差均未超過0.5%，該方法與HPLC法的測定結(jié)果一致性良好.

3.討論.

UPLC分析方法是一種高效、快捷的檢測方法，比HPLC法在檢測時(shí)間上節(jié)省60% ，檢出能力與HPLC法一致，方法驗(yàn)證結(jié)果表明，該法是一種準(zhǔn)確，可靠的測定方法.

參考文獻(xiàn)

【1】任仲輝 郭衛(wèi).胸腺五肽合成工藝的研究[J]黑龍江醫(yī)藥，2008，（05）：67-68

【2】 張璽煒 趙子儀.胸腺五肽配合化療治療中晚期惡性腫瘤[J]中外醫(yī)療，2008（22）：29+31