薛雄燕 朱嫦琳 潘練華 徐建華

摘要：目的 探討免疫層析法（金標(biāo)法）及化學(xué)發(fā)光免疫分析法（化學(xué)發(fā)光法）檢測2019新型冠狀病毒（2019-nCOV）抗體在新型冠狀病毒性肺炎（COVID-19）中的應(yīng)用價值。方法 回顧性分析。病例組樣本來自2020年1月23日至2月18日在本院住院并確診為COVID-19的患者，對照組樣本來自同期我院非COVID-19的住院患者。收集所有研究對象的血清、血漿及全血樣本，分別采用金標(biāo)法檢測樣本中2019-nCOV總抗體，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清及血漿樣本2019-nCOV IgM及2019-nCOV IgG抗體。結(jié)果? 金標(biāo)法采用全血樣本檢測時，與血清血漿的檢測結(jié)果有1例不一致（1/37，2.7%），未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異（χ²=0.083，P=0.959;χ²=0.078，P=0.962）。兩種方法采用血清與血漿樣本檢測的結(jié)果完全一致。COVID-19患者發(fā)熱超過5天后血清IgG水平明顯升高，其中有10例患者超過30AU/mL（76.9%），僅5例為IgM陽性（38.5%）。結(jié)論 金標(biāo)法和化學(xué)發(fā)光法檢測血清2019-nCOV抗體均可作為COVID-19的輔助診斷手段，其中化學(xué)發(fā)光法檢測IgM和IgG可為恢復(fù)期血漿治療COVID-19提供重要實驗室依據(jù)。

關(guān)鍵詞：2019新型冠狀病毒性肺炎;抗體;免疫層析法;化學(xué)發(fā)光免疫分析法

【中圖分類號】R563.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A??? 【文章編號】2107-2306（2020）02-085-02

自2019年12月以來，我國湖北省武漢市陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多例新型冠狀病毒性肺炎（coronavirus disease 2019，COVID-19）患者，并在短時間內(nèi)向全國乃至境外蔓延^[1]。該病主要經(jīng)過呼吸道飛沫和密切接觸傳播。目前COVID-19已被我國納入《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病，按照甲類傳染病管理^[2]。早發(fā)現(xiàn)早治療，是防治新冠肺炎的重要手段。尋找快速有效的COVID-19篩查及診斷方法，是目前亟待解決的問題。本研究對三種檢測2019-nCOV抗體的方法進(jìn)行比較分析，探討其在COVID-19篩查及診斷中的應(yīng)用價值。

對象與方法

一、對象

血液樣本來源于2020年1月23日至2月18日在我院感染科及重癥醫(yī)學(xué)科的住院患者，其中病例組13例為確診COVID-19的患者，確診標(biāo)準(zhǔn)為《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》^[1]，其中男8例，女5例，年齡20～76歲，平均年齡51.3±17.4歲?；颊甙l(fā)熱時間為3～19天，平均11.2±5.5天。對照組24例為非COVID-19的住院患者，并排除免疫功能障礙、惡性腫瘤等患者，男17例，女7例，年齡21～70歲，平均年齡49.2±16.8歲。于2020年2月17～18日收集所有研究對象的血清、血漿及全血樣本，所有樣本同一批檢測。其中血清樣本為黃色促凝管采集靜脈血3mL;血漿樣本為紫色EDTA-K₂抗凝管采集靜脈血2mL，分別3000r/min離心15min，全血樣本為紫色EDTA-K₂抗凝管采集靜脈血2mL。同時收集患者臨床資料。

二、檢測原理及判讀標(biāo)準(zhǔn)

金標(biāo)法試劑盒為廣州萬孚生物技術(shù)公司贈送。檢測原理：采用免疫層析技術(shù)，用捕獲法檢測樣本中的2019-nCOV總抗體。判讀標(biāo)準(zhǔn)：檢測區(qū)及質(zhì)控區(qū)各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線為陽性，僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紅色反應(yīng)線為陰性。

化學(xué)發(fā)光法試劑盒為深圳市新產(chǎn)業(yè)生物技術(shù)公司贈送。檢測原理：化學(xué)發(fā)光免疫間接法，采用重組抗原包被磁性微球，小分子發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記單克隆抗體，利用底物液啟動化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生光信號，通過相對光強度計算待測抗體濃度。判讀標(biāo)準(zhǔn)：<0.900AU/mL為陰性，≥1.10AU/mL為陽性，（0.900～1.10）AU/mL判斷為疑似，其中IgM檢測范圍為（0.050～30.0）AU/mL，IgG檢測范圍為（0.020～30.0）AU/mL。

三、檢測方案

分別采用金標(biāo)法檢測血清、血漿及全血樣本中2019-nCOV總抗體，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清及血漿樣本2019-nCOV IgM及2019-nCOV IgG?！耙伤啤苯Y(jié)果視為陽性。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

金標(biāo)法為定性試驗，檢測結(jié)果為分類變量，采用“陰性”或“陽性”表示?；瘜W(xué)發(fā)光法為半定量實驗，根據(jù)檢測數(shù)值判定為“陰性”或“陽性”。計數(shù)資料比較采用卡方（χ²）檢驗，統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0軟件，繪圖軟件采用GraphPad Prism 5.0軟件，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)??? 果

一、病例組13例COVID-19患者的基本臨床資料，男8例，女5例。其中重癥患者10例，占76.9%。12例患者就診時有發(fā)熱癥狀（92.3%），咳嗽多見（84.6%）。實驗室檢查常見C反應(yīng)蛋白（69.2%）、D-二聚體升高（61.5%）及淋巴細(xì)胞計數(shù)減少（53.8%），沒有一例出現(xiàn)白細(xì)胞總數(shù)降低。所有患者至少一次在咽拭子或痰標(biāo)本中檢出2019-nCOV核酸陽性。

二、不同樣本類型對2019-nCOV抗體結(jié)果的影響

采用金標(biāo)法及化學(xué)發(fā)光法對同一例患者的血清、血漿及全血樣本進(jìn)行2019-nCOV抗體檢測，2019-nCOV IgM及IgG抗體檢測，并比較不同類型樣本對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果顯示，金標(biāo)法采用全血樣本檢測時，與血清血漿的檢測結(jié)果有1例不一致（1/37，2.7%），未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異（χ²=0.083，P=0.959;χ²=0.078，P=0.962）。兩種方法采用血清與血漿樣本檢測的結(jié)果完全一致。

三、不同采血時間COVID-19患者血清中2019-nCOV IgM及IgG含量

以患者發(fā)熱時間開始計算，觀察不同采血時間患者血清中2019-nCOV IgM及IgG含量差異。結(jié)果顯示，COVID-19患者發(fā)熱超過5天后采血，體內(nèi)IgG水平升高明顯，其中有10例患者超過30AU/mL（76.9%）。13例患者中僅5例為IgM陽性（38.5%），其中2例IgM含量超過15AU/mL均為重癥患者。

目前，《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》對COVID-19的診斷要求增加血清學(xué)診斷：新型冠狀病毒特異性IgM和IgG抗體陽性;血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性或恢復(fù)期較急性期4倍及以上升高。本研究選取較常見的三種抗體檢測方法，分別為金標(biāo)法、熒光免疫法及化學(xué)發(fā)光法，對COVID-19患者及對照組患者的血液樣本進(jìn)行檢測和比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣本類型幾乎不影響檢驗結(jié)果，但由于全血樣本在判讀結(jié)果時紅細(xì)胞可能造成輕微的干擾，因此金標(biāo)法及熒光法的檢測建議采用血清或血漿標(biāo)本。化學(xué)發(fā)光法檢測IgM和IgG只可以采用血清及血漿標(biāo)本，經(jīng)比較二者結(jié)果完全一致，可根據(jù)臨床需求采用其中一種。

本研究中，由于采血時間較滯后，大部分患者采血時IgM抗體滴度較低，僅1例重癥患者在病程第17天仍保持較高滴度的IgM（15.08AU/mL），另一例重癥患者處于發(fā)熱第6天采血，IgM含量大于30AU/mL。

綜上，金標(biāo)法、熒光法和化學(xué)發(fā)光法檢測血清2019-nCOV抗體均可作為COVID-19的輔助診斷手段，其中化學(xué)發(fā)光法檢測IgM和IgG可為恢復(fù)期血漿治療COVID-19提供重要實驗室依據(jù)。然而，由于條件限制，本研究存在一定的不足。本研究僅納入13例病例，應(yīng)在后續(xù)研究中加大樣本量，多個時間點采血，進(jìn)一步明確抗體檢測在COVID-19中的應(yīng)用價值。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]國家衛(wèi)生健康委.新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）[EB/OL].http：//www.cntcm.com.cn/2020-03/05/content_72030.htm，2020-03-05.

[2]高亭，徐仰玲，何小鵬，等.40例新型冠狀病毒肺炎的流行病學(xué)及臨床特征分析[J].中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志，2020，19（02）：148-153.

[3]王旭東，施健，丁偉峰，等.2019新型冠狀病毒核酸檢測的研究狀況與應(yīng)用探討[J].臨床檢驗雜志，2020，38（02）：81-84.

基金項目：佛山新型冠狀病毒感染的肺炎應(yīng)急攻關(guān)專項（2020001000431）