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        響應(yīng)面法優(yōu)化辣木籽蛋白質(zhì)提取工藝的研究

        2020-07-09 02:04:32唐詩琦劉小玲白聰豪
        糧食與飼料工業(yè) 2020年2期

        唐詩琦,劉小玲,林 瑩,白聰豪,符 珍

        (廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院,廣西 南寧 530004)

        辣木(Moringa)又稱“鼓槌樹”,原產(chǎn)于熱帶和南亞熱帶地區(qū)的印度北部[1]。19世紀(jì)末,我國云南省已經(jīng)引入種植辣木[2]。目前開發(fā)利用最多的是印度傳統(tǒng)辣木[3],對其研究主要集中在動物飼料、凈水功能、化妝品添加劑、功能性食品、食用油等[4-6]。

        辣木籽作為辣木相關(guān)衍生產(chǎn)物,其營養(yǎng)成分極其豐富,含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)、礦物元素和膳食纖維[7-8],被譽(yù)為“植物鉆石”。在東南亞國家,辣木籽作為民間傳統(tǒng)藥物用于預(yù)防和治療多種疾病,如心腦血管疾病、胃潰瘍和糖尿病等[9-11]。目前對辣木籽的研究多為醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用[12]、辣木籽多糖的提取[13]、水酶法和甲醇法提取辣木籽中的油脂和蛋白質(zhì)[14]、辣木籽蛋白質(zhì)對水濁度的影響等[15-17],但對分離提取辣木籽蛋白質(zhì)相關(guān)研究較少。段瓊芬等人[18]研究表明,辣木籽蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)37%,與大豆蛋白質(zhì)含量相接近,辣木籽蛋白質(zhì)提取利用范圍極大,常采用鹽溶提取法和水酶法對辣木籽蛋白質(zhì)進(jìn)行提取研究[19-20],但這2種提取方法對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)以及性質(zhì)影響較大,蛋白質(zhì)極易變性。

        較現(xiàn)有提取辣木籽蛋白質(zhì)方法相比,本試驗(yàn)采用超聲波輔助堿法提取辣木籽蛋白質(zhì),并采用響應(yīng)面法對提取工藝優(yōu)化,降低蛋白質(zhì)變性程度;將提取的辣木籽粗蛋白質(zhì)進(jìn)行初步純化,采用SDS-PAGE電泳技術(shù)分析其分子量分布范圍,以期為辣木籽蛋白質(zhì)的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        辣木籽,市售,粉碎后過80目篩;牛血清蛋白,BIOFROX公司;鹽酸體積分?jǐn)?shù)36%~38%,優(yōu)級純;考馬斯亮藍(lán)G-250、氫氧化鈉、冰醋酸等,均為國產(chǎn)分析純。

        722N可見分光光度計(jì),上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;JAC-300N型數(shù)控超聲波清洗儀,山東省濟(jì)寧市奧波超聲電氣有限公司;SKD-2000凱氏定氮儀,上海沛歐分析儀器有限公司;SZF-06A脂肪測定儀,上海新嘉電子有限公司;CR21N高速冷凍離心機(jī),日本Himac公司;FD-1D-50冷凍干燥機(jī),北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;041BR95359電泳儀,BIO RAD公司;ChemiDoc MP System化學(xué)發(fā)光熒光成像系統(tǒng),BIO RAD公司;L-8900高速全自動氨基酸分析儀,日本Hitachi公司。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1基本成分的測定

        測定辣木籽水分、蛋白質(zhì)、脂肪、黃酮和灰分。水分按照GB 5009.3—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測定》中直接干燥法測定;蛋白質(zhì)按照GB 5009.5—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定》中凱氏定氮法測定;脂肪按照GB 5009.6—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》中索氏抽提法測定;黃酮按照NY/T 1295—2007《蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定》測定;灰分按照GB 5009.4—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測定》中質(zhì)量法測定。

        1.2.2牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

        采用Bradford[21]的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 ml,濃度為0.1 mg/ml的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液并補(bǔ)至1.00 ml,加入5.00 ml考馬斯亮藍(lán)。在波長為595 nm處測定吸光度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程y=3.649 1x+0.016,R2=0.996 1,線性關(guān)系較好。

        1.2.3辣木籽蛋白質(zhì)提取工藝流程

        新鮮辣木籽→粉碎→過篩(80目)→正己烷脫脂→晾干→脫脂辣木籽→提取→離心(8 000 r/min,4℃,20 min)→取上清液→二次提取→離心(8 000 r/min,4℃,15 min)→取上清液→合并2次粗提液→等電點(diǎn)沉淀→離心(8 000 r/min,4℃,15 min)→取沉淀,透析→冷凍干燥→辣木籽蛋白粉。

        1.2.4辣木籽蛋白質(zhì)提取率的測定

        采用1.2.2節(jié)中Bradford的方法,精密移取0.02 ml辣木籽蛋白質(zhì)提取液于試管中,補(bǔ)至1.00 ml,加入5.00 ml考馬斯亮藍(lán)溶液,于波長595 nm下測定吸光度值。由所測得的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算辣木籽蛋白質(zhì)含量,其中蛋白質(zhì)總含量采用1.2.1節(jié)中凱氏定氮法測定脫脂后辣木籽蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為55.24%,根據(jù)公式(1)計(jì)算辣木籽蛋白質(zhì)提取率。

        (1)

        1.2.5單因素試驗(yàn)

        每組單因素試驗(yàn)分別稱取2.00 g脫脂辣木籽粉末,并采用相同方法重復(fù)提取2次。考察固液比、pH值、提取時(shí)間、提取溫度和超聲功率5個(gè)因素對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響,并選擇最佳因素水平進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)。

        1.2.6響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)

        以提取辣木籽蛋白的單因素試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù),影響辣木籽蛋白質(zhì)提取率較大的pH值、提取時(shí)間、提取溫度、超聲功率為試驗(yàn)因素,辣木籽蛋白質(zhì)提取率為響應(yīng)值,建立四因素三水平以Box-Benhnken為原理的中心組合試驗(yàn)。響應(yīng)面法試驗(yàn)因素水平編碼見表1。

        表1 響應(yīng)面法試驗(yàn)因素水平編碼表

        1.2.7辣木籽蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定

        在辣木籽蛋白質(zhì)提取工藝最佳條件情況下測定辣木籽蛋白質(zhì)等電點(diǎn)。pH值處于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí),由于相鄰蛋白質(zhì)分子之間沒有靜電斥力而趨于聚集沉淀,其溶解度達(dá)到最低點(diǎn)并保持天然構(gòu)象[22]。取辣木籽蛋白質(zhì)粗提液25 ml,將粗提液pH值分別調(diào)至2.8、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、4.0、4.2、4.4、4.6、4.8,靜置2.0 h,以轉(zhuǎn)速8 000 r/min、溫度4℃ 離心15 min,取上清液。采用1.2.4節(jié)中Bradford的方法測量上清液吸光度值,計(jì)算上清液蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù),同時(shí)以空白試劑為參照。

        將等電點(diǎn)沉淀后的蛋白質(zhì)粗提液離心,棄上清液,取沉淀透析36 h,將透析液冷凍干燥,得到辣木籽蛋白粉。辣木籽蛋白質(zhì)沉淀率根據(jù)公式(2)計(jì)算。其辣木籽蛋白純度按照1.2.1中凱氏定氮法測量。

        (2)

        1.2.8SDS-PAGE電泳

        取適量辣木籽蛋白粉加入一定比例的尿素和5倍樣品緩沖液,使用12%分離膠和5%濃縮膠,Marker上樣量為5 μl,辣木籽蛋白上樣量為10 μl,濃縮膠和分離膠電壓分別為80 V和120 V。電泳結(jié)束后取出凝膠片,考馬斯亮藍(lán)G-250染色液染色1.0 h,脫色至條帶清晰后使用熒光成像系統(tǒng)對凝膠片圖像采集成像[23]。

        1.2.9氨基酸組分測定及計(jì)算分析

        取300 mg脫脂辣木籽粉末加入10.00 ml 6 mol/L HCl于水解管中冷凍10 min,取出后于110℃烘箱中水解22 h。水解完畢取出冷卻,過濾定容至50 ml。取1.00 ml濾液移入100 ml燒杯中,于60℃水浴蒸發(fā)干燥,加水1.00 ml重復(fù)干燥3次至酸揮發(fā)完全。加入0.02 mol/L HCl沖洗并定容至10 ml,以0.22 μm水系濾膜過濾至進(jìn)樣瓶中待測。檢測樣品進(jìn)樣量為20 μl,儀器運(yùn)行壓力30 kPa,氮?dú)鈮毫?.06~0.1 MPa。樣品中的氨基酸含量依照標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.124—2016計(jì)算。

        1.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

        以上試驗(yàn)均重復(fù)測量3次,以保證試驗(yàn)值的精確度。試驗(yàn)分析采用統(tǒng)計(jì)分析軟件Design-expert8.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行響應(yīng)面分析,SPSS20.0進(jìn)行顯著性分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 辣木籽基本組成成分分析

        辣木籽基本成分如表2所示,其中辣木籽蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35.48%±0.16%。常鑫[24]測得我國70種大豆蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34.46%~45.13%,平均值為40.17%,李若姝等人[25]測得我國黑龍江和吉林兩省53種大豆蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值為40.57%。由此可知,辣木籽蛋白質(zhì)含量較高,與大豆蛋白質(zhì)含量相接近,有極大的研究價(jià)值。

        表2 辣木籽基本成分含量

        2.2 單因素試驗(yàn)

        2.2.1固液比對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        在提取溫度45℃,提取時(shí)間45 min,pH 8.5,超聲功率180 W,固液比分別在1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35的條件下提取辣木籽蛋白,結(jié)果如圖1所示。固液比1∶15~1∶35時(shí)辣木籽蛋白質(zhì)提取率隨溶劑量的增大呈先增大后減小趨勢,并且在固液比為1∶25時(shí)蛋白質(zhì)提取率達(dá)到最大值42.92%±0.9%。這是因?yàn)楫?dāng)溶劑較少時(shí),辣木籽與溶劑接觸面積較小結(jié)合不充分,辣木籽蛋白質(zhì)不能充分溶出[26]。固液比在1∶20~1∶30時(shí)無顯著性差異,均在42%左右,為了減小后續(xù)分離純化的不便,選擇1∶25作為辣木籽蛋白質(zhì)提取的最佳固液比,并且不作為響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)的條件因素之一。

        圖1 固液比對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        2.2.2pH值對辣木籽蛋白提取率的影響

        在固液比1∶25,提取溫度45℃,提取時(shí)間45 min,超聲功率180 W,pH值分別在6、7、8、9、10的條件下提取辣木籽蛋白質(zhì),結(jié)果如圖2所示。pH值在6.0~10.0時(shí),辣木籽蛋白質(zhì)提取率呈現(xiàn)先上升后下降趨勢,且當(dāng)pH值為8.0時(shí)提取率最高為43.34%±0.76%。隨著pH值的增大,反應(yīng)體系中蛋白質(zhì)分子攜帶的同種符號的凈電荷增加并相互排斥,阻止了單個(gè)分子的聚集,因此溶解度增大[27]。但過高的pH值會影響辣木籽蛋白質(zhì)聚集,促進(jìn)發(fā)生美拉德反應(yīng)[28],并且pH值的變化使蛋白質(zhì)提取率波動范圍較大。綜上所述,選擇最佳提取pH 8.0,以有效的提取辣木籽蛋白質(zhì)。

        圖2 pH值對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        2.2.3提取時(shí)間對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        在固液比1∶25,提取溫度45℃,pH 8.5,超聲功率180 W,提取時(shí)間分別在25、30、35、40、45、50、55 min的條件下提取辣木籽蛋白質(zhì),結(jié)果如圖3所示。提取時(shí)間在25~45 min時(shí),辣木籽蛋白質(zhì)提取率隨著超聲時(shí)間增大而增大,增加趨勢較陡;提取時(shí)間在45~55 min時(shí),辣木籽蛋白質(zhì)提取率隨著超聲時(shí)間增大而減小,降低趨勢較緩慢。若提取時(shí)間較短,辣木籽與溶劑沒有進(jìn)行充分接觸,辣木籽細(xì)胞破裂程度較小,導(dǎo)致辣木籽蛋白質(zhì)不能充分溶出。提取時(shí)間過長會破壞維持辣木籽蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用力[29],使原來已析出的蛋白質(zhì)分子與結(jié)合的水分子分離,最終導(dǎo)致蛋白質(zhì)含量降低。

        圖3 提取時(shí)間對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        2.2.4提取溫度對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        在固液比1∶25,提取時(shí)間45 min,pH 8.5,超聲功率180 W,提取溫度分別在35、40、45、50、55℃的條件下提取辣木籽蛋白質(zhì),結(jié)果如圖4所示。提取溫度對辣木籽蛋白質(zhì)提取率影響較提取時(shí)間小,蛋白質(zhì)提取率波動范圍在40%~45%。辣木籽蛋白質(zhì)提取率隨著提取溫度的升高先上升后下降。這是因?yàn)殡S著溫度的逐步升高,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)得以伸展,在適宜溫度下可有效的提取辣木籽蛋白質(zhì)。但溫度過高會破壞蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu),使辣木籽蛋白質(zhì)變性,改變其營養(yǎng)特性,降低辣木籽蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值[30]。顯著性差異分析表明組間存在顯著性差異,綜合考慮選擇45℃為最佳提取溫度。

        圖4 提取溫度對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        2.2.5超聲功率對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        在固液比1∶25,提取溫度45℃,提取時(shí)間45 min,pH 8.5,超聲功率分別為60、120、180、240、300W的條件下提取辣木籽蛋白質(zhì),結(jié)果如圖5所示。隨著超聲功率的增大,辣木籽蛋白質(zhì)提取率先上升后下降,超聲功率在120 W時(shí)蛋白質(zhì)提取率時(shí)為45.35%±0.88%。超聲功率為60~120 W時(shí)提取率明顯上升,因?yàn)槌暡軌蛴绊懙鞍踪|(zhì)結(jié)構(gòu)和周圍基團(tuán)分布,使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變得松散,并且超聲波能產(chǎn)生空化效應(yīng),增強(qiáng)辣木籽蛋白質(zhì)間的能量傳遞,增加析出蛋白質(zhì)濃度[31]。在120~300 W時(shí)提取率下降,這是因?yàn)殡S著超聲功率增大,部分蛋白質(zhì)分子能量傳遞成倍增大,相互作用力增大,導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)被破壞,提取率降低。

        圖5 提取功率對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響

        2.3 響應(yīng)面法試驗(yàn)

        2.3.1響應(yīng)面法試驗(yàn)方案及結(jié)果

        在響應(yīng)面試驗(yàn)中以蛋白質(zhì)提取率為響應(yīng)值,pH值(A)、提取時(shí)間(B)、提取溫度(C)、超聲功率(D)為自變量,采用Box-Benhnken設(shè)計(jì)對辣木籽蛋白質(zhì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,試驗(yàn)方案與結(jié)果見表3。

        表3 響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)及蛋白質(zhì)提取率

        2.3.2響應(yīng)面模型的建立與分析

        根據(jù)Design-expert8.0對響應(yīng)面模型進(jìn)行擬合分析,得到二元回歸方程:Y=45.21-0.24A-0.28B-0.26C+0.33D+0.25AB-0.35AC+0.57AD+1.46BC-0.47BD-0.62CD-0.66A2-3.00B2-1.81C2-1.35D2。由回歸方程可知,A、B、C和D一次項(xiàng)系數(shù)的絕對值大小排列為D>B>C>A,則判斷出各因素影響辣木籽蛋白提取率順序?yàn)椋撼暪β?提取時(shí)間>提取溫度>pH值。

        對響應(yīng)面回歸模型進(jìn)行方差分析,結(jié)果如表4所示。由表4可知,模型P<0.000 1,表明試驗(yàn)?zāi)P蜆O顯著,試驗(yàn)方法可靠;失擬項(xiàng)P=0.426 7(>0.05),表明失擬項(xiàng)不顯著,未知因素對試驗(yàn)影響較小。相關(guān)系數(shù)R2=0.960 6,模型預(yù)測值與真實(shí)試驗(yàn)值在試驗(yàn)范圍內(nèi)擬合度較好。BC、B2、C2、D2極顯著,D、AD、CD、A2顯著,表明提取功率對辣木籽蛋白提取率產(chǎn)生影響較大,其余因素及因素交互作用均不顯著。

        表4 回歸模型方差分析

        注:**為極顯著(P<0.01),*為顯著(P<0.05)。

        2.3.3響應(yīng)曲面圖分析

        響應(yīng)曲面圖反映了不同試驗(yàn)因素的交互作用對辣木籽蛋白質(zhì)提取率的影響[32],詳見圖6。由圖6(a)可知,提取時(shí)間比pH值曲面變化陡峭,曲面變化越陡峭說明對辣木籽蛋白質(zhì)提取率影響越顯著,并且觀察等高線形狀為橢圓形表明兩因素的交互作用比較明顯。同理,在圖6(b~f)中,提取時(shí)間比提取溫度對辣木籽蛋白提取率影響顯著,提取溫度比pH值對辣木籽蛋白質(zhì)提取率影響顯著,該結(jié)果與表4結(jié)果相同。a、d、e、f的等高線較b、c等高線更為密集,提取功率和提取時(shí)間較其他因素對辣木籽蛋白質(zhì)提取率影響更加明顯,其中d的等高線趨近于圓形,表明提取溫度與提取時(shí)間之間交互作用最小,其他各因素間交互作用較大。

        (a)提取時(shí)間與pH值

        (b)提取溫度與pH值

        (c)超聲功率與pH值

        (d)提取溫度與提取時(shí)間

        (e)提取功率與提取時(shí)間

        (f)超聲功率與提取溫度

        2.3.4驗(yàn)證試驗(yàn)

        為了進(jìn)一步確定提取辣木籽蛋白質(zhì)的最佳工藝條件,利用Design-expert 8.0繼續(xù)分析,預(yù)測在pH 7.95、提取時(shí)間44.54 min、提取溫度44.39℃、超聲功率154.27 W的條件下,辣木籽蛋白質(zhì)提取率達(dá)到最大值為45.275%?;谠囼?yàn)條件的考量,確定響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)條件為pH 8.0、提取時(shí)間45 min、提取溫度44℃、超聲功率150 W,進(jìn)行3次平行試驗(yàn)以確保準(zhǔn)確性。在該條件下辣木籽蛋白質(zhì)實(shí)際提取率為(4.03±0.71)%,與預(yù)測值無顯著性差異。因此響應(yīng)面法優(yōu)化辣木籽蛋白質(zhì)的提取條件具有可行性。

        2.4 辣木籽蛋白等電點(diǎn)測定結(jié)果分析

        以辣木籽蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo),pH值為橫坐標(biāo),繪制辣木籽蛋白質(zhì)含量與pH值關(guān)系圖。由圖7可知,辣木籽蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度在pH 2.8~4.8時(shí),先減少后增加,在pH值為3.4時(shí),酸沉后上清液蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度最低為2.64 mg/ml,沉淀率為54.27%。采用等電點(diǎn)沉淀后得到辣木籽蛋白質(zhì)的純度為91.31%。

        圖7 辣木籽蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定

        2.5 SDS-PAGE電泳分析

        對照Marker來表達(dá)辣木籽蛋白質(zhì)亞基分子量分布范圍。圖8表明辣木籽蛋白質(zhì)分子量在14.4~180.0 kDa,主要含有16.0、25.0和45.0 kDa三個(gè)亞基,整體無明顯雜帶。非變性的辣木籽蛋白質(zhì)在電泳過程中可以保持辣木籽蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)和活性不變[33]。加入β-巰基乙醇后,辣木籽蛋白質(zhì)亞基分開或消失,存在3條亞基條帶,說明辣木籽蛋白質(zhì)中含有二硫鍵。二硫鍵斷裂后形成的亞基分子量較未加β-巰基乙醇時(shí)減小,在0~14.4、22.0和31.0~43.0 kDa均有分布。

        2.6 氨基酸組成分析

        辣木籽蛋白質(zhì)各氨基酸組分含量及占總氨基酸比例詳見表5。通過對辣木籽氨基酸的檢測分析發(fā)現(xiàn),辣木籽蛋白質(zhì)中含有18種氨基酸,總量達(dá)到38.383 g/(100 g)。辣木籽蛋白質(zhì)氨基酸組分中含有7種必需氨基酸,總量達(dá)到9.839 g/(100 g),占總氨基酸含量的25.63%。谷氨酸可促進(jìn)人體新陳代謝,在辣木籽所有氨基酸組分中含量最高,達(dá)到9.031 g/(100 g)。該結(jié)論與楊東順等[34]研究結(jié)果相似。

        泳道1:未加β-巰基乙醇的非還原SDS-PAGE電泳泳道2:加入β-巰基乙醇的還原SDS-PAGE電泳圖8 辣木籽蛋白電泳圖譜

        表5 辣木籽氨基酸組分含量及占總氨基酸比例分析表

        3 結(jié)論

        (1)辣木籽的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為41.14%,蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35.48%,水分為5.56%,黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.094%,灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.12%。

        (2)超聲波輔助堿法提取辣木籽蛋白的最佳工藝為:pH 8.0、提取時(shí)間45 min、提取溫度44℃、超聲功率150W,所得辣木籽蛋白質(zhì)提取率達(dá)到44.03%,各因素影響辣木籽蛋白提取率的順序?yàn)椋撼暪β?提取時(shí)間>提取溫度>pH值。

        (3)辣木籽蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為3.4,在等電點(diǎn)條件下沉淀辣木籽蛋白質(zhì)得到蛋白質(zhì)沉淀率為54.27%,純度達(dá)到91.31%;SDS-PAGE電泳分析表明辣木籽蛋白質(zhì)主要含有3個(gè)亞基,其分子量分別為16.0、25.0和45.0 kDa。

        (4)氨基酸分析表明辣木籽中含有18種氨基酸,有7種人體必需氨基酸,占總氨基酸含量的25.63%。谷氨酸含量最高達(dá)到9.031 g/(100g),占比23.53%。辣木籽蛋白質(zhì)作為一種優(yōu)質(zhì)的植物蛋白質(zhì)資源,具有極大開發(fā)潛力

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