王 璐 白雨朦 李曉宇 閆旭升 霍東升 宋 嵬 楊占君 賈建新△

（包頭醫(yī)學(xué)院，1 第三臨床醫(yī)學(xué)院，2 巴彥淖爾臨床醫(yī)學(xué)院，3 第一臨床醫(yī)學(xué)院，4 人體解剖學(xué)教研室，包頭 014040）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是發(fā)生在老年前期或老年期的一種慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾??；以進(jìn)行性記憶減退、認(rèn)知功能障礙及心理精神狀態(tài)改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)[1]；以大腦皮質(zhì)萎縮、突觸神經(jīng)元丟失、老年斑（senile plaques，SP）沉積及神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles，NFT）為主要病理改變[2]，關(guān)于其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。肉蓯蓉（cistanch）為列當(dāng)科植物，藥效廣泛，素有“沙漠人參”之美譽(yù)。肉蓯蓉總苷（glycosides of cistanche，GCs）是肉蓯蓉的主要提取物，包括苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、揮發(fā)性成分、木脂素類、多糖、生物堿等。研究顯示，GCs 具有改善AD 相關(guān)學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的藥理作用[3-4]；但關(guān)于GCs 改善學(xué)習(xí)認(rèn)知的具體機(jī)制仍無(wú)定論，故研究GCs 對(duì)AD 模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能的影響，并探討其作用機(jī)制，以期為臨床治療AD 提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

雄性6月齡Wistar大鼠70只（購(gòu)自內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心），飼養(yǎng)于清潔級(jí)環(huán)境，自由進(jìn)食進(jìn)水。將動(dòng)物隨機(jī)分為以下7組（10只/組）：空白對(duì)照組（Control）、溶劑對(duì)照組（Vehicle）、假手術(shù)組（Sham）、模型組（Model）、肉蓯蓉總苷低劑量組（25 mg·kg-1·d-1）、中劑量組（50 mg·kg-1·d-1）、高劑量組（100 mg·kg-1·d-1）?？瞻讓?duì)照組不給予任何處理；假手術(shù)組只進(jìn)行側(cè)腦室插管，但無(wú)液體注射；溶劑對(duì)照組側(cè)腦室給予與模型組等體積的滅菌水；模型組給予雙側(cè)腦室可溶性Aβ1-42寡聚體注射（每側(cè)10 μg）；給藥組給予模型動(dòng)物肉蓯蓉總苷對(duì)應(yīng)劑量，肉蓯蓉總苷用滅菌水進(jìn)行溶解，調(diào)整藥液濃度，保證各組給藥體積相同。動(dòng)物通過(guò)灌胃給藥，灌胃給藥1次/日，連續(xù)給藥20 d。

1.2 AD 動(dòng)物模型制備

1.2.1 可溶性Aβ1-42 寡聚體的制備

具體制備過(guò)程詳見(jiàn)賈建新等[5]相關(guān)報(bào)道。將Aβ1-42粉末溶解于預(yù)冷的六氟異丙醇至濃度為 1 mmol/L，而后分裝到無(wú)菌微量離心管內(nèi)。留取 10 μL作為聚合對(duì)照。用冷凍抽干機(jī)在真空條件下將Aβ溶液抽干后-80℃保存?zhèn)溆?。聚合過(guò)程中先將抽干后的Aβ用二甲基亞砜溶解至5 mmol/L，再用預(yù)冷的F-12/DMEM培養(yǎng)基稀釋至200 μmol/L，4℃孵育24 h。4℃，14 000 r/min離心5 min，上清即為可溶性Aβ1-42寡聚體，將上清轉(zhuǎn)移至新的EP管，4℃保存，去除離心管下方不溶的寡聚體。可溶性Aβ1-42寡聚體用前使用無(wú)菌PBS稀釋至所用濃度（2 μg/μL）。

1.2.2 雙側(cè)側(cè)腦室可溶性Aβ1-42 寡聚體注射 大鼠經(jīng)2 % 戊巴比妥鈉（40～60 mg/kg）腹腔注射麻醉，固定于腦立體定位儀，顱頂備皮，常規(guī)碘酒消毒。至兩側(cè)眼眶之間向后沿顱骨中線切開顱頂皮膚約1 cm，鈍性分離皮下組織至顱骨外膜，反復(fù)用棉球擦拭切口，防止出血。充分顯露矢狀縫與冠狀縫，暴露前囟（bregma）。參照大鼠腦圖 譜[6]，以前囟為始點(diǎn)，向后0.9 mm，中線左、右 1.5 mm 處在顱骨表面用印度墨水做標(biāo)記點(diǎn)；用牙科電鉆在標(biāo)記點(diǎn)垂直顱骨表面進(jìn)行打孔，開直徑 1 mm 的骨窗，將微量注射器固定于腦立體定位儀的注射器夾持器上，垂直顱骨表面進(jìn)針3.5 mm（以顱骨外表面為基點(diǎn)）。5 min 內(nèi)緩慢注入5 μL Aβ1-42（2 μg/μL），留針5 min 使其充分?jǐn)U散，最后緩慢撤出注射器，對(duì)側(cè)進(jìn)行相同操作。注射完畢后，松弛注射器夾持器螺母旋鈕，將動(dòng)物從定位儀上撤下。手術(shù)全程動(dòng)物體溫維持在36℃～37 ℃，動(dòng)物于麻醉清醒前單獨(dú)放置。動(dòng)物造模完成后，回籠飼養(yǎng)7 d 后鑒定模型制備是否成功。AD 模型大鼠制備標(biāo)準(zhǔn)參照Christensen 等[7]相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

1.2.3 蛋白標(biāo)本、組織切片的存取和制備 全程實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，動(dòng)物腹膜腔注射常規(guī)麻醉。各組半數(shù)動(dòng)物斷頭取腦，撥取海馬凍存于超低溫冰箱以備后用。半數(shù)動(dòng)物剪開胸腔暴露心，將注射器針頭從心尖部刺入左心室，用剪刀快速剪開右心耳；隨后無(wú)菌生理鹽水灌注，4 %多聚甲醛進(jìn)行前固定，等待固定效果滿意后終止灌注；斷頭開顱取腦并用4 %多聚甲醛后固定24 h。修剪大腦組織塊，選取上丘平面至視交叉的節(jié)段，常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋。石蠟組織行冠狀切片，制備片厚 5 μm 的組織切片用于尼氏染色和免疫組織化學(xué)顯色。

1.3 Morris水迷宮測(cè)試（Morris water maze test，MWM test）

定位航行實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5 d，每天訓(xùn)練4 次。記錄動(dòng)物定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期、上臺(tái)前路程及平均游泳速度。第6 天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，記錄動(dòng)物120 s 內(nèi)穿越平臺(tái)的次數(shù)及在平臺(tái)所在象限停留的時(shí)間百分比等指標(biāo)。

1.4 尼氏染色及細(xì)胞計(jì)數(shù)

各組選取相同海馬CA1 區(qū)截面的切片進(jìn)行尼氏染色。每張切片在CA1 區(qū)隨機(jī)選取3 個(gè)視野（200倍），計(jì)數(shù)1 mm 長(zhǎng)度內(nèi)完整錐體細(xì)胞的個(gè)數(shù)，取其均數(shù)進(jìn)行分析。

1.5 免疫組織化學(xué)顯色

切片脫蠟至水，3 %過(guò)氧化氫孵育5～ 10 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，蒸餾水洗5 min×3 次，高壓微波抗原熱修復(fù)，PBS 洗 5 min×3 次，10 %山羊血清室溫封閉30 min，滴加多克隆兔抗突觸素（synaptophysin，SYN），4℃過(guò)夜，PBS 洗5 min×3 次，滴加生物素標(biāo)記的二抗，37 ℃孵育2 h，PBS 洗5 min×3 次，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，PBS 洗5 min×3 次，DAB 顯色2 min，自來(lái)水洗，蘇木精復(fù)染，上行梯度乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)全部結(jié)束后，10 %水合氯醛（0.35 mL/100 g）溶液經(jīng)腹膜腔注射麻醉。用一次性注射器從動(dòng)物尾靜脈抽取1 mL 全血留置于EP 管中，放入冰盒。隨后低溫離心機(jī)4 ℃離心15 min（5 000 r/min），取血清100 μL 備用。檢測(cè)血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。ELISA 操作步驟根據(jù)制造商試劑盒說(shuō)明書（南京建成生物技術(shù)公司）進(jìn)行。

1.7 免疫印跡檢測(cè)

從超低溫冰箱中取出凍存的腦組織，稱重后放入EP管中并加入蛋白裂解液，冰浴環(huán)境下超聲波破碎蛋白數(shù)次。低溫超速離心機(jī)離心15 min，提取蛋白并測(cè)定蛋白濃度，將剩余的蛋白按每100 μL樣品蛋白加入33.3 μL 4×上樣Buffer后振蕩器混勻，置于沸水中變性10 min備用。配制濃縮膠和分離膠，蛋白上樣并進(jìn)行電泳；濃縮膠恒壓80 V電泳，根據(jù)膜的面積大小計(jì)算轉(zhuǎn)膜電壓，恒壓濕轉(zhuǎn)約60 min；5 %脫脂奶粉室溫封閉1 h后進(jìn)行漂洗；SYN一抗（1∶3 000）4 ℃冰箱搖床緩慢過(guò)夜，次日取出T-TBS液漂洗；加入二抗室溫避光孵育1 h后避光漂洗；使用成像分析系統(tǒng)對(duì)條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.8 圖像處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組選取相同海馬截面進(jìn)行圖像分析，每張切片在CA1區(qū)隨機(jī)選取3個(gè)視野（200倍）計(jì)數(shù) 1 mm長(zhǎng)度內(nèi)正常錐體細(xì)胞數(shù)，取均數(shù)分析。免疫組織化學(xué)顯色結(jié)果用IPP 7.0圖像分析軟件進(jìn)行光密度測(cè)定。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；多樣本率的兩兩比較采用χ2分割法（partitions ofχ2method）。

2 結(jié)果

2.1 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能的作用

Morris 水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期（P＜0.05）與上臺(tái)前路程（P＜0.05）各組間存在顯著性差異。隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加，逃避潛伏期與上臺(tái)前路程均逐漸縮短，溶劑對(duì)照組、假手術(shù)組與空白對(duì)照組相比無(wú)差異；模型組逃避潛伏期、上臺(tái)前路程較空白對(duì)照組明顯增加（P＜0.05）；低劑量組、中劑量組逃避潛伏期、上臺(tái)前路程均較模型組明顯縮短（P＜0.05），高劑量組與模型組無(wú)差異；平均游泳速度各組之間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1，見(jiàn)封三）。

空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而假手術(shù)組、溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)差異，模型組與空白對(duì)照組比較明顯減小（P＜0.05）；與模型組相比，低劑量組、中劑量組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比明顯增加（P＜0.05），高劑量組與模型組比較無(wú)差異。穿越平臺(tái)次數(shù)組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而假手術(shù)組、溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)差異，模型組與空白對(duì)照組比較穿越平臺(tái)數(shù)明顯減?。≒＜0.05）；與模型組相比，低劑量組、中劑量組穿越平臺(tái)數(shù)明顯增加（P＜0.05），高劑量組穿越平臺(tái)數(shù)與模型組比較無(wú)差異（圖2）。

圖2 Morris 水迷宮測(cè)試檢測(cè)肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能的作用Fig2 Effects of GCs on cognitive performances of AD model rats in the MWM test

2.2 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠死亡率的影響

空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組與假手術(shù)組、模型組、低劑量組、中劑量組給藥全程結(jié)束后，動(dòng)物沒(méi)有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；而高劑量組給藥過(guò)程中出現(xiàn)動(dòng)物腸脹氣、死亡現(xiàn)象，死亡率為30.00 %，高劑量組死亡率與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠海馬CA1 區(qū)正常錐體細(xì)胞數(shù)量的作用

尼氏染色結(jié)果顯示，模型組、高劑量組CA1區(qū)神經(jīng)元減少，排列疏松紊亂，細(xì)胞形態(tài)大多異常、溶解壞死。低劑量組、中劑量組細(xì)胞形態(tài)規(guī)則、排列整齊、較致密，可見(jiàn)大量正常尼氏體，尼氏體呈紫色，核仁深染、清晰、居中，胞核不著色?？瞻讓?duì)照組、溶劑對(duì)照組、假手術(shù)組細(xì)胞形態(tài)與低、中劑量組類似。海馬CA1 區(qū)錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示，空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、假手術(shù)組CA1 區(qū)錐體細(xì)胞的數(shù)量最多，Aβ1-42 注射可以明顯導(dǎo)致CA1 區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)量減少（P＜0.05）；給予模型大鼠GCs干預(yù)后，低劑量組、中劑量組CA1 區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)顯著增加，與空白對(duì)照組比較無(wú)差異，而高劑量組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖3，見(jiàn)封三，表1）。

2.4 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠突觸相關(guān)蛋白表達(dá)的作用

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組與假手術(shù)組海馬CA1 區(qū)SYN 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多，Aβ1-42 注射可以使大鼠海馬CA1 區(qū)SYN 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少；體外GCs 補(bǔ)充治療一定程度上可以增加海馬CA1 區(qū)SYN 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，低劑量組、中劑量組作用較為顯著，與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，但與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組與模型組比較無(wú)差異（圖4，見(jiàn)封三）。免疫印跡結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組與假手術(shù)組海馬組織SYN 蛋白表達(dá)量較多，Aβ1-42 注射可以使大鼠海馬組織SYN 蛋白表達(dá)量減少；體外GCs 補(bǔ)充治療一定程度上可以增加海馬組織SYN蛋白的表達(dá)，低劑量組、中劑量組作用較為顯著，與空白對(duì)照組比較無(wú)差異，但與模型組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組與模型組比較無(wú)差異（圖5）。

2.5 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠氧化應(yīng)激標(biāo)志物的影響

空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組與假手術(shù)組血清SOD、GSH-Px 活性較高，MDA 活性較低；與空白對(duì)照組比較，模型組血清SOD、GSH-Px 活性明顯降低，MDA 活性顯著升高（P＜0.05）；給予GCs補(bǔ)充治療后，低劑量組、中劑量組可以使模型大鼠血清SOD、GSH-Px 活性顯著升高，MDA 活性顯著降低；上述指標(biāo)與空白對(duì)照組比較無(wú)差異，但與模型組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組與模型組上述檢測(cè)指標(biāo)比較無(wú)差異（表1）。

圖5 免疫印跡檢測(cè)各組海馬CA1 區(qū)SYN 蛋白的表達(dá)Fig5 Western blot analysis of SYN protein expression levels

表1 GCs 治療對(duì)海馬CA1 區(qū)正常錐體細(xì)胞數(shù)量，血清SOD、MDA 與GSH-Px 的影響（±s）Tab1 Effects of GCs on the number of intact pyramidal cells in hippocampal CA1 region，the levels of MDA and the activity of SOD and GSH-Px（±s）

表1 GCs 治療對(duì)海馬CA1 區(qū)正常錐體細(xì)胞數(shù)量，血清SOD、MDA 與GSH-Px 的影響（±s）Tab1 Effects of GCs on the number of intact pyramidal cells in hippocampal CA1 region，the levels of MDA and the activity of SOD and GSH-Px（±s）

*P＜0.05 vs control；#P＜0.05 vs model

Group Number of intact pyramidal cell（n）SOD（U/mL）MDA（nmol/L）GSH-Px（nmol/L）Control 80.16±8.34 250.28±22.03 1.86±0.30 58.62±5.75 Sham 83.45±7.08 245.85±23.01 1.90±0.31 60.02±5.70 Vehicle 79.86±7.55 252.26±21.85 1.91±0.28 57.56±6.07 Model 41.38±5.12*180.35±14.48*3.42±0.40*37.26±3.88*Low 72.60±7.33# 232.50±20.05# 2.02±0.34# 50.25±5.17#Intermediate 73.49±6.86# 230.16±19.86# 2.08±0.37# 51.01±4.98#High 50.51±5.40*180.35±14.48*3.03±0.42*40.20±4.23*

3 討論

AD以學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)，其主要的病理特征是胞外Aβ沉積形成的老年斑和胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)。Aβ在細(xì)胞基質(zhì)沉淀聚積可引起神經(jīng)元細(xì)胞毒性及神經(jīng)元纖維變性[8-9]。本實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)腦室可溶性Aβ1-42寡聚體注射制備AD大鼠模型，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AD模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能顯著降低，提示Aβ對(duì)學(xué)習(xí)認(rèn)知功能具有明顯的損害作用，該結(jié)果與既往報(bào)道相一致[10]。

在正常老化過(guò)程中，神經(jīng)元間信息傳遞的特化結(jié)構(gòu)——突觸的數(shù)量及完整性出現(xiàn)了不同程度的下降。突觸是神經(jīng)信息傳遞的關(guān)鍵部位，故突觸的病理改變被認(rèn)為是AD學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)[11]。突觸可塑性的降低是AD學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的主要發(fā)病因素之一。既往文獻(xiàn)報(bào)道，Aβ可誘導(dǎo)突觸結(jié)構(gòu)異常和功能失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致突觸可塑性明顯下降，故Aβ可能是引起AD學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的最主要的發(fā)病因素[12-13]。研究顯示，GCs具有改善AD相關(guān)學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的藥理作用[3-4]；文獻(xiàn)報(bào)道顯示，肉蓯蓉提取物可以通過(guò)阻止Aβ的沉積改善AD模型大鼠認(rèn)知缺陷，并且可以提高海馬多巴胺能神經(jīng)元功能[14]。筆者的前期研究顯示，GCs治療可以明顯改善快速老化小鼠的學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙，提高樹突棘的數(shù)量與突觸蛋白的表達(dá)，并可以減少Aβ的沉積，推測(cè)GCs可能是通過(guò)阻止Aβ的沉積，進(jìn)而降低對(duì)突觸可塑性的損害來(lái)改善AD模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙，但GCs通過(guò)何種機(jī)制改善突觸可塑性說(shuō)法不一。

AD的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，自由基堆積、細(xì)胞凋亡、突觸功能的損害為目前較為公認(rèn)的衰老學(xué) 說(shuō)[3]。既往研究證明，GCs可以明顯改善AD模型大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力[3]，GCs能顯著增加快速老化小鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)量、突觸蛋白SYN與PSD-95蛋白的表達(dá)量，同時(shí)可以增加對(duì)氧化自由基的清除，故推測(cè)GCs改善AD相關(guān)空間學(xué)習(xí)記憶能力損害可能是通過(guò)抗氧化自由基損害，清除自由基堆積，進(jìn)而提高突觸可塑性從而提高學(xué)習(xí)記憶能力和認(rèn)知功能[15-17]。本研究結(jié)果顯示GCs可以提高海馬CA1區(qū)正常錐體細(xì)胞的數(shù)量以及細(xì)胞形態(tài)，表明GCs能顯著提高細(xì)胞的存活率。此外，GCs明顯增加了海馬組織樹突棘的數(shù)量與SYN蛋白的表達(dá)，表明GCs提高了突觸可塑性，GCs改善AD模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能損害可能與提高突觸可塑性相關(guān)。

既往研究顯示，GCs 具有抗氧化、抗衰老、清除自由基等功效[18-19]。龔夢(mèng)鵑等[20]用不同劑量的肉蓯蓉水煎液給陽(yáng)虛證的小鼠灌胃，結(jié)果顯示肉蓯蓉水煎液可以降低丙二醛含量，升高超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性；高占友等[21]報(bào)道肉蓯蓉對(duì)大鼠產(chǎn)生的運(yùn)動(dòng)性疲勞有一定的延緩作用，并且對(duì)運(yùn)動(dòng)造成的腦組織中氧化損傷線粒體和脂質(zhì)過(guò)氧化的程度具有抑制作用。古力努爾·木特列夫等[22]的研究表明肉蓯蓉中提取的松果菊苷（ECH）能夠很好地抑制體外羥自由基、超氧陰離子自由基和脂自由基，提高GSH-px 和SOD 活性，降低MDA 含量，抑制單胺氧化酶（MAO）活性，對(duì)D-半乳糖所致的衰老引起的氧自由基損傷有一定的修復(fù)作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，GCs可以顯著提高SOD和GSH-Px活性，相反降低MDA的活性；能夠增強(qiáng)自由基清除酶活性，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基的清除活力，減少自由基對(duì)機(jī)體的損傷，防止脂質(zhì)過(guò)氧化作用，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，進(jìn)而提高細(xì)胞的存活率。此外，GCs量效實(shí)驗(yàn)表明，25～50 mg · kg－1· d－1的給藥劑量改善模型大鼠的學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的作用最為顯著，高劑量組對(duì)學(xué)習(xí)認(rèn)知功能幾乎無(wú)改善作用。另外，在給藥過(guò)程中，高劑量組容易引起動(dòng)物腸脹氣、死亡等現(xiàn)象，筆者推測(cè)可能是藥物給藥劑量過(guò)大，引起的毒性反應(yīng)，故理想的給藥劑量應(yīng)該限制在50 mg · kg－1· d－1之內(nèi)。今后的實(shí)驗(yàn)工作仍需要繼續(xù)細(xì)化給藥劑量，以期獲得較為準(zhǔn)確的給藥劑量，避免藥物的副作用以及動(dòng)物、藥物的浪費(fèi)。

綜上所述，筆者認(rèn)為GCs 改善AD 相關(guān)學(xué)習(xí)認(rèn)知功能障礙的機(jī)制可能是通過(guò)減少自由基堆積、清除體內(nèi)過(guò)多的過(guò)氧化物，進(jìn)而改善突觸可塑性和提高細(xì)胞存活率來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這將為GCs 用于臨床預(yù)防和治療AD 奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

圖1 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠學(xué)習(xí)認(rèn)知功能的作用。Fig1 Effects of GCs on cognitive performances of AD model rats in the MWM test.

圖3 肉蓯蓉總苷對(duì)AD 模型大鼠海馬CA1 區(qū)正常錐體細(xì)胞數(shù)量的作用，×200。Fig3 Effects of GCs on the number of intact pyramidal cells in hippocampal CA1 region in AD model rats，×200（per 1 mm linear length of the same section of hippocampal CA1 region）.

圖4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組海馬CA1 區(qū)SYN 的表達(dá)，×200。Fig4 Expression of SYN detected by immunohistochemisty in hippocampus of AD model rats，×200.