王 成段樹卿宋 佳李云霞*

（1.頸復康藥業(yè)集團有限公司， 河北 承德067000； 2.河北省中藥新輔料技術創(chuàng)新中心， 河北 承德067000）

蒼術為菊科蒼術屬植物北蒼術Atractylodes chinensis（DC.） Koidz.或茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb.） DC.的干燥根莖［1］。始載于東漢《神農本草經》，被列為上品，目前收載于2015 年版《中國藥典》，具有燥濕健脾、祛風散寒之功效［1］。北蒼術多分布于北京、河北、山西、內蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、安徽等省。

承德有著得天獨厚的自然條件，是北蒼術藥材主要產地之一［2］。研究表明，不同產地、不同采收期的北蒼術質量狀況存在較大差異［3-8］，承德產北蒼術中蒼術素含有量大多高于內蒙古、遼寧所產［9］。近年來，由于市場需求逐年增加，加之亂采濫挖，致使蒼術野生資源日益枯竭，價格日益上漲［10-11］。本研究選取了承德地區(qū)野生和家種北蒼術藥材樣本，按2015 年版《中國藥典》 方法，從外觀性狀、顯微形態(tài)、薄層鑒別和含有量測定等方面作比較分析；并檢測重金屬及農藥殘留。以往對蒼術中重金屬及農藥殘留并沒有進行控制，但是隨著蒼術種植面積的逐步擴大，有必要增加重金屬及農藥殘留的考察，保證臨床用藥安全。本研究參照有關文獻［12-14］增加了藥材中5 種重金屬和9 種有機氯農藥殘留量的檢測；蒼術素和β -桉葉醇等揮發(fā)性成分是北蒼術中的主要活性成分［15-18］，本研究參照課題之前所建立的方法［9］對野生和種植北蒼術中的主要成分及特征圖譜進行系統性比較，探究家種與野生北蒼術質量的差異，以期為北蒼術藥材質量均一、穩(wěn)定及承德地區(qū)北蒼術的栽培、擴大藥源提供依據。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1260（VWD 檢測器） 液相色譜儀、Agilent7890 A（FID 檢測器） 氣相色譜儀、Agilent TC18色譜柱（250 mm×0.46 mm，5 μm）、Agilent HP-5 毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）（美國Agilent 公司）；電子顯微鏡（奧林巴斯工業(yè)有限公司）；XSE205DU型電子分析天平、MS204TS／02型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多集團）；KQ-500DE型數控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥物 北蒼術對照藥材（批號201605） 購于中國食品藥品檢定研究院；蒼術素對照品（批號18071301）、蒼術酮對照品（批號18110201）、β-桉葉醇對照品（批號18092503） 均購于成都普菲德生物技術有限公司；石油醚（60～90℃，農殘級） 購于天津科密歐化學試劑有限公司；丙酮、甲醇、二氯甲烷、正己烷為色譜純，購自德國默克公司；純化水（自制）；硅膠G 薄層板（青島譜科分離材料有限公司）。

北蒼術樣品經頸復康藥業(yè)集團有限公司中藥材、中藥飲片高級鑒別師商春麗鑒定為北蒼術Atractylodes chinensis（DC.） Koidz.的干燥根莖，信息見表1。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品預處理 10 批北蒼術樣品均用相同條件處理，樣本經室內自然陰干1 到2個月，初步干燥后撞去須根。

1.3.2 性狀鑒別 參照2015 年版《中國藥典》 規(guī)定，觀察野生與種植北蒼術藥材的形狀、色澤、大小、氣味與質地等特征，進行北蒼術樣品的性狀鑒別。

表1 樣品信息

1.3.3 顯微鑒別 根據2015 年版《中國藥典》 規(guī)定，分別取各北蒼術藥材樣品粉末少量，置于載玻片上，滴加1到2 滴水合氯醛試液，蓋上玻片，將其置于顯微鏡下進行顯微鑒別。

1.3.4 薄層鑒別 根據2015 年版《中國藥典》 蒼術項下的薄層法（通則0502），取本品粉末0.8 g，加甲醇10 mL，超聲處理15 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取北蒼術對照藥材0.8 g，同法制成對照品溶液。再取蒼術素對照品，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照藥材溶液各6 μL、對照品溶液2 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90℃） -丙酮（9∶2） 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與北蒼術對照品色譜對應的位置上有相同顏色的斑點。

1.4 樣品含有量測定

1.4.1 藥典方法

1.4.1.1 色譜條件 填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相甲醇-水（79∶21）；檢測波長340 nm。理論板數按蒼術素峰計算應不低于5 000。

1.4.1.2 對照品溶液制備 取蒼術素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度為0.020 81 mg／mL 的溶液，即得。

1.4.1.3 供試品溶液制備 取本品粉末（過3 號篩） 約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲（250 W，40 kHz） 處理1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.4.2 文獻方法 參考文獻［9］。

1.4.2.1 色譜條件 HP-5 石英毛細管柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；進樣口溫度250℃，檢測器溫度250℃；柱溫130℃；載氣為高純氮氣，進樣量2 μL；分流比10∶1；程序升溫（初始溫度130℃，保持8 min，以5℃／min的速率升溫至145℃，保持8 min，以10℃／min的速率升溫至190℃，保持1 min，再以5℃／min 的速率升溫至230℃，保持13 min）。

1.4.2.2 對照品溶液制備 分別稱取蒼術素、蒼術酮和β-桉葉醇對照品適量，精密稱定，加正己烷配制成含蒼術素0.048 4 mg／mL、蒼術酮 0.082 2 mg／mL、β-桉葉醇0.045 9 mg／mL的混合對照品貯備液。

1.4.2.3 供試品溶液制備 取北蒼術粉末（過3 號篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷15 mL，超聲30 min，放冷，再稱定質量，用正己烷補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2 常規(guī)項目的鑒別與檢查

2.1 外觀性狀 外觀性狀是中藥材最為顯著、直觀的指標，傳統經驗鑒別認為蒼術以個大、質堅實、朱砂點多、香氣濃者為佳。將野生與家種的北蒼術藥材進行性狀比較，野生樣本大多成長塊狀和結節(jié)狀圓柱形，橫走，直徑相對較?。患曳N樣本大多成疙瘩塊狀，較粗壯，直徑相對較大。兩者表面黑棕色，斷面黃棕色或黃白色，質較疏松。斷面均散有多數黃棕色油室，香氣濃郁。均符合2015 年版《中國藥典》 中對蒼術的性狀控制要求，與傳統鑒別中的優(yōu)質蒼術相近。

2.2 顯微鑒別 按“1.3.3” 項下方法對10 批北蒼術樣品進行顯微鑒別，結果見圖1～2。各北蒼術樣品中均可見圖中所示的草酸鈣針晶、、纖維、石細胞、菊糖、導管。其中，草酸鈣針晶較為細小，不規(guī)則的充塞于薄壁細胞中；纖維木質化，呈現長梭形、成束出現，直徑約40 μm，壁甚厚；導管多為短網紋形；石細胞木質化，數量較多，呈多角或類長方形，壁極厚，直徑約20～80 μm；菊糖多數呈塊狀或扇形，其表面有放射狀的紋理。

2.3 薄層鑒別 按“1.3.4” 項下方法對10 批樣品進行了薄層鑒別，結果見圖3。

圖3 10 批樣品薄層鑒別

2.4 蒼術素含有量測定 按“1.4.1” 項下方法測定10 批北蒼術中的蒼術素含有量，結果見圖4。

圖4 蒼術素含有量測定結果

3 其他檢測項目

3.1 氣相色譜法 按“1.4.2” 項下方法，對β-桉葉醇、蒼術酮、蒼術素3 種成分，配制不同濃度的對照品溶液，繪制標準工作曲線，r均大于0.999，β-桉葉醇、蒼術酮、蒼術素線性范圍分別為20.00～406.10、35.00～348.70、16.46～329.30 μg／mL。結果見表3。

3.2 特征圖譜比較 按“1.4.2” 項下方法，對10 批北蒼術揮發(fā)性成分進行分析，得到特征圖譜。以10 批野生和家種北蒼術的特征圖譜生成平均譜圖作為對照圖譜。見圖5。

圖5 10 批樣品特征圖譜及對照圖譜

3.3 重金屬及農藥殘留 按2015 年版《中國藥典》 四部鉛、鎘、砷、汞、銅測定法（通則2321） 和農藥殘留量測定法（通則2341 第一法） 對10 批北蒼術中的5 種重金屬鉛、鎘、砷、汞、銅含有量及α-BHC、β-BHC、五氯硝基苯、γ-BHC、δ-BHC、PP'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT 等9 種農藥殘留量進行檢測，結果見表2。

表2 10 批北蒼術新增檢測項目檢測結果

4 結果分析與討論

4.1 數據分析 檢測結果表明，承德地區(qū)野生和家種北蒼術的顯微圖像及薄層鑒別均符合藥典要求。家種和野生北蒼術中蒼術素的含有量分別為0.31%～0.70%、0.33%～0.68%，均滿足藥典中蒼術素含有量不得低于0.30% 的要求，承德地區(qū)家種及野生北蒼術均符合藥用要求。運用SPSS 19.0 軟件對10 批樣品中蒼術素含有量進行方差分析，結果見表3。方差分析表明，家種和野生北蒼術中蒼術素含有量的差異無統計學意義（P＞0.05），表明兩者蒼術素含有量沒有顯著性差別。

表3 蒼術素含有量方差分析結果

4.2 氣相色譜測試結果分析 運用SPSS 19.0 軟件對表3中10 批樣品中蒼術素、蒼術酮和β-桉葉醇3 種揮發(fā)性成分的含有量進行方差分析，結果見表4～5、圖6。

表4 10 批北蒼術中3 種揮發(fā)性成分的平均含有量（%）

表5 10 批樣品中各成分的平均含有量方差分析結果

圖6 10 批樣品中各成分的平均含有量

表4 表明，家種北蒼術中蒼術素、蒼術酮和β-桉葉醇的含有量均值均高于野生北蒼術，二者中β-桉葉醇含有量的差異較大。其中家種北蒼術中蒼術素、蒼術酮和β-桉葉醇的總含有量均值為1.176%、野生北蒼術中這3 種成分的含有量均值為0.89%。表5 表明，家種和野生北蒼術中這些成分含有量的差異無統計學意義（P＞0.05），表明承德地區(qū)野生和家種北蒼術中的各主要揮發(fā)性成分的含有量沒有顯著性差別。

5 批野生北蒼術與對照圖譜比較，相似度均大于等于0.867，5 批家種北蒼術與對照圖譜的相似度均大于等于0.878。5 批野生北蒼術生成的平均譜與5 批家種北蒼術生成的平均譜的相似度為0.925。由此可知，野生和家種北蒼術二者揮發(fā)性成分的特征圖譜有良好的相似度。

4.3 重金屬及農藥殘留檢測結果分析 依據2015 年版《中國藥典》 一部、四部相關規(guī)定及相關文獻［12-13］對重金屬和農藥殘留量的限量要求，表3 中采自承德市寬城縣和鷹手營子的2個野生北蒼術鎘元素含有量高于0.3 mg／kg（可能與礦區(qū)土質有關），其余樣品的重金屬含有量符合要求。有1個樣品中五氯硝基苯含有量大于0.1 mg／kg，超出參考限度要求，其余農藥殘留均合格。由于在現代工業(yè)的飛速發(fā)展過程中環(huán)保措施及監(jiān)管不到位，使得工業(yè)產出的廢氣、廢水、污水等進入土壤，造成重金屬和殘留農藥在土壤中累積，作為農產品的中藥材難以幸免。承德市區(qū)及其周邊地區(qū)野生北蒼術生長過程中缺乏管理和質量監(jiān)控，易于產生重金屬和農藥殘留超標現象。在北蒼術種植過程中，對土壤中有害物質進行監(jiān)測是保證北蒼術質量的重要環(huán)節(jié)。

北蒼術藥材的質量研究需要進行長期的考察檢測，積累更多的數據，對藥材種植地的土壤進行系統管理和評估，規(guī)范種植過程中的農藥使用。

5 結論

承德地區(qū)的野生和家種北蒼術藥材的外觀性狀、顯微鑒別、薄層鑒別及蒼術素含有量測定結果均符合2015 年版《中國藥典》 要求。且野生與家種北蒼術的主要揮發(fā)性成分含有量無顯著性差異，二者特征圖譜相似。表明在承德地區(qū)采用家種北蒼術替代野生北蒼術是可行的。為避免重金屬和農藥殘留量超標，應該對藥材種植地的土壤進行系統管理和評估，規(guī)范種植過程中的農藥使用。