楊涵，黃學(xué)惠 ，鄧?yán)^紅，張?chǎng)?，楊廷?/p>

（1 昆明市婦幼保健院，云南 昆明；2 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，云南 昆明）

0 引言

卵巢癌是影響女性健康的重大惡性腫瘤之一，且死亡率在女性惡性腫瘤中最高[1]。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種含精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，廣泛分布于胃腸、卵巢、腎臟等組織細(xì)胞中，其與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移有很大的關(guān)系[2,3]，國(guó)內(nèi)外大量研究表明[4-7]，在病理狀態(tài)時(shí)(免疫性疾病、炎癥和腫瘤)OPN表達(dá)增強(qiáng)。本研究為探索OPN 基因與卵巢上皮性腫瘤的相關(guān)性，使用的方法為免疫組化學(xué)SABC，分別對(duì)正常的卵巢組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織及卵巢上皮性癌組織中的OPN進(jìn)行檢測(cè)，分析OPN 與卵巢上皮性癌組織學(xué)類型、臨床分期及年齡之間存在的相關(guān)性，現(xiàn)將研究情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)抽取昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中留存的病理檔案82 例，均為卵巢上皮組織蠟片，時(shí)間均在2010 年9 月至2011 年9 月，將82 例分為三個(gè)小組：（1）惡性組：共有24 例，均經(jīng)過(guò)手術(shù)及病理確診為原發(fā)性上皮性卵巢癌，漿液性囊腺癌最多，其次為粘液性囊腺癌，再次為宮內(nèi)膜樣癌；（2）良性組：共有28 例，均經(jīng)過(guò)手術(shù)及病理證實(shí)，腫瘤類型為漿液性囊腺瘤及粘液性囊腺瘤各占一半；（3）正常組：共有30 例，均經(jīng)過(guò)病理證實(shí)。所有病例均為首次治療，均無(wú)其他部位腫瘤、心臟病、高血壓等疾病。將所有的切片進(jìn)行HE 染色，由2 名有豐富工作經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生將合適的切片挑選出來(lái)進(jìn)行染色處理，使用的方法為免疫組化學(xué)SABC 法。

1.2 免疫組化SABC 法

OPN 基因單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)Abcam 公司（貨號(hào)：ab91655），免疫組化學(xué)染色SABC 試劑盒購(gòu)于英國(guó)Novocastra 公司。按照SABC 試劑盒說(shuō)明書，OPN 抗體稀釋1:100 進(jìn)行操作，檢測(cè)OPN 基因的表達(dá)情況。

1.3 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

采用雙盲法，2 名有經(jīng)驗(yàn)的病理診斷醫(yī)師同時(shí)進(jìn)行診斷。將PBS 液作為陰性對(duì)照，并參考相關(guān)的文獻(xiàn)[8]：OPN 基因陽(yáng)性呈現(xiàn)出的是胞漿顏色的變化，即為棕色及黃褐色。在高倍視野下（×200），隨機(jī)選取5 個(gè)不同的視野來(lái)統(tǒng)計(jì)切片視野中細(xì)胞總數(shù)和核/漿陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率的方法為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)之比，根據(jù)患者陽(yáng)性細(xì)胞所占比例來(lái)進(jìn)行計(jì)分統(tǒng)計(jì)：（1）陽(yáng)性細(xì)胞率≤5%為0 分；（2）陽(yáng)性細(xì)胞率6%-25% 為1 分；（3）陽(yáng)性細(xì)胞率26%-50% 為2 分；（4）陽(yáng)性細(xì)胞率＞51%為3 分。染色強(qiáng)弱程度計(jì)分：（1）陰性1 分；（2）弱染色2 分；（3）中等強(qiáng)度染色3 分；（4）強(qiáng)染色4 分。每張片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率之積為最后的得分。通過(guò)得分來(lái)判定，當(dāng)分?jǐn)?shù)為0-1 分為（-），＞2 分（+）。統(tǒng)計(jì)分析時(shí)（-）表示陰性表達(dá)，（+）表示陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況

本實(shí)驗(yàn)中正常卵巢組織的平均年齡為（40.4±9.4）歲，良性卵巢上皮性腫瘤組織的平均年齡為（40.0±11.5）歲，卵巢上皮性癌組織的平均年齡為（38.8±11.0）歲，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；24 例卵巢上皮性癌中將其進(jìn)行分期，其中有8 例患者為I 期，9 例患者為II 期，7 例患者為III 期，前兩者之間的例數(shù)分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 基本情況

2.2 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

OPN 在正常組、良性組和惡性組的陽(yáng)性率分別為10.00%、7.14%、62.50%。見表2。

表2 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

2.3 OPN 基因在不同類型上皮性卵巢癌（EOC）組織中的表達(dá)

OPN 在EOC 組織表達(dá)陽(yáng)性率分別為：漿液性囊腺癌為70.00%，粘液性囊腺癌為62.50%，惡性宮內(nèi)膜樣癌為50.00%；不同病理類型EOC 的陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但均顯著高于良性卵巢上皮性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 OPN 在不同類型卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)

2.4 OPN 基因表達(dá)與EOC 臨床特征的關(guān)系

（1）OPN 在早期EOC（Ⅰ-Ⅱ期）和晚期（Ⅲ期）患者組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.06%，100%，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其陽(yáng)性表達(dá)均隨國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2000年）臨床分期增高而增強(qiáng)；（2）OPN 表達(dá)與EOC 患者年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

3 討論

OPN 最初是從骨質(zhì)中分離出來(lái)的，是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)的組成成分[9]。在本次研究中得出的結(jié)果為OPN 基因在卵巢上皮性癌組、良性卵巢上皮性腫瘤組和正常卵巢組織組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.50%、7.14%、10.00%，OPN 明顯表達(dá)于過(guò)度細(xì)胞，其在正常的細(xì)胞中呈現(xiàn)出低表達(dá)或者是不呈現(xiàn)表達(dá)，這就表明OPN 的過(guò)度表達(dá)能夠成為良惡性卵巢上皮性腫瘤鑒別重要的免疫標(biāo)記物。通過(guò)進(jìn)一步的分析得出：在EOC 的臨床分期中OPN 基因呈現(xiàn)出的陽(yáng)性表達(dá)率間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在臨床晚期的OPN 基因有100%的呈現(xiàn)出高表達(dá)，只有47.06%臨床早期（Ⅰ-Ⅱ期）的腫瘤呈現(xiàn)出過(guò)度表達(dá)，同樣可說(shuō)明OPN 基因表達(dá)程度的檢測(cè)可能作為判斷EOC 病情的指標(biāo)。這一結(jié)論符合大多數(shù)研究[10,11]：OPN 在原發(fā)性及復(fù)發(fā)性的卵巢癌癥患者中均有高表達(dá)。因此，OPN 有助于EOC 的診斷以及病情檢測(cè)，但是在不同病理類型上皮性卵巢癌組間和不同年齡患者中OPN 表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），此結(jié)果與Bhattacharya R 等研究存在差異[12]，這是否與樣本例數(shù)不夠有關(guān)，尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，OPN 基因?qū)τ诹紣盒月殉采掀ば阅[瘤的鑒別有一定的臨床意義，可作為鑒別的重要免疫標(biāo)記物；其呈現(xiàn)出的過(guò)表達(dá)與卵巢癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2000 年）臨床分期有關(guān)，隨著臨床分期的不斷增高，OPN 表達(dá)陽(yáng)性率也越來(lái)越高，在一定程度上反映了EOC 的惡性程度。