王曉霞，許天祥，呂鏜烽，胥武劍，劉建波，宋 勇

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，呼和浩特010017；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腹部腫瘤外科，呼和浩特010017；3.東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，南京 210002

急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是感染、創(chuàng)傷、失血、休克、誤吸等多種病因引起的炎癥反應(yīng)失控而導(dǎo)致以肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞彌漫性損傷為主要病理改變的臨床綜合征，其病死率高達(dá)30%～50%[1-2]，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前，臨床上對(duì)ARDS 患者的診斷主要依靠臨床標(biāo)準(zhǔn)，缺乏高特異度和敏感度可以反映ARDS 病情嚴(yán)重程度和預(yù)后情況的生物標(biāo)志物，給ARDS 臨床診治帶來(lái)巨大的困難。因此，尋找新的指標(biāo)判斷ARDS 患者預(yù)后至關(guān)重要[3]。研究[4-7]表明，某些生物標(biāo)志物在評(píng)估ARDS 高風(fēng)險(xiǎn)人群、臨床療效、疾病預(yù)后、臨床試驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?yōu)化方面起到一定作用，甚至有利于促進(jìn)臨床上開(kāi)展有針對(duì)性治療方法的研究。香葉基香葉基焦磷酸合成酶（geranylgeranyl diphosphate synthase，GGPPS）是甲羥戊酸代謝途徑中重要的分支酶，催化法尼基焦磷酸（farnesyl pyrophosphate，F(xiàn)PP）合成香葉基香葉基焦磷酸（geranylgeranyl pyrophosphate，GGPP），F(xiàn)PP 與GGPP 參與蛋白的異戊二烯化修飾[8]。這些蛋白只有發(fā)生異戊二烯化修飾后才能定位到細(xì)胞膜上，促發(fā)下游信號(hào)通路的激活，廣泛參與細(xì)胞的生理、病理生理過(guò)程。GGPPS 表達(dá)異常會(huì)引起FPP 與GGPP 表達(dá)失衡，導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生[9]，包括炎癥性疾病，如吸煙誘導(dǎo)的肺部炎癥性疾病[10]、睪丸支持細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[11]等。筆者前期研究[12]用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)小鼠肺損傷模型，小鼠肺泡上皮細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞中的GGPPS 表達(dá)升高，并參與肺部炎癥反應(yīng)，推測(cè)GGPPS有望作為ARDS 治療的作用靶點(diǎn)。但目前尚缺乏關(guān)于GGPPS 在ARDS 診治中臨床意義的相關(guān)研究。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)ARDS 患者及正常體檢人群外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 的表達(dá)情況，對(duì)GGPPS 在ARDS 診治中的臨床意義進(jìn)行初步探討。

1 資料與方法

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)柏林診斷標(biāo)準(zhǔn)[13]，將ARDS 患者分為輕度、中度、重度。輕度：呼吸末正壓（positive end expiratory pressure，PEEP）或持續(xù)氣道正壓（continuous positive airway pressure，CPAP）≥5 cmH2O（1 cmH2O=0.098 kPa） 時(shí)，200 mmHg＜氧合指數(shù)（PaO2/FiO2）≤300 mmHg（1 mmHg= 0.133 kPa）。 中 度：PEEP ≥5 cmH2O 時(shí)，100 mmHg＜PaO2/FiO2≤ 200 mmHg。重 度：PEEP ≥ 5 cmH2O 時(shí)，PaO2/FiO2≤ 100 mmHg。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 歲；符合柏林診斷標(biāo)準(zhǔn)；住院后測(cè)得PaO2/FiO2當(dāng)日入組。排除標(biāo)準(zhǔn)：①發(fā)病時(shí)間超過(guò)24 h，臨床診斷不明確者。②免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病、肺間質(zhì)性疾病及近期使用免疫抑制劑治療者。③孕婦及合并惡性腫瘤患者。④拒絕提供外周血及拒絕機(jī)械通氣的患者。

1.3 研究對(duì)象及分組

收集2015 年3 月—2018 年3 月于內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科（intensive care unit，ICU）住院的60例符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)的ARDS 患者；男性35 例，女性25 例，年齡（60.03±13.09）歲。同時(shí)收集60 例門(mén)診正常體檢人群（對(duì)照組）；男性33 例，女性27 例，年齡（58.45±7.15）歲。2 組間年齡、性別構(gòu)成的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者均于確診24 h 內(nèi)采集動(dòng)、靜脈血進(jìn)行血?dú)夥治觥⒀Ｒ?guī)及實(shí)驗(yàn)室檢查。對(duì)照組采集清晨空腹靜脈血，用于實(shí)驗(yàn)室檢查。ARDS 患者中，輕度ARDS 32 例、中度ARDS 17 例、重度ARDS 11 例。存活組40 例，死亡組20 例；死亡組中，輕度ARDS 1 例、中度ARDS 8 例、重度ARDS 11 例。本研究通過(guò)內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象或其家屬簽署知情同意書(shū)。

1.4 疾病嚴(yán)重程度評(píng)估

應(yīng)用急性生理與慢性健康評(píng)分Ⅱ（ acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHE Ⅱ）、序貫器官功能衰竭估計(jì)（ sequential organ failure assessment，SOFA）評(píng)分、PaO2/FiO2及柏林診斷標(biāo)準(zhǔn)[13]進(jìn)行疾病嚴(yán)重程度評(píng)估，在診斷后24 h 內(nèi)完成。

1.5 主要試劑及儀器

人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液（天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司），TRIzol 試劑（15596-018，Invitrogen），反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RR036A，TaKaRa），real-time PCR 試劑盒（RR420A，TaKaRa），real-time PCR 引物（南京Realgene 生物技術(shù)有限公司合成），BCA 蛋白定量試劑盒（KGP904，江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司），SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司），兔抗β-微管蛋白（β-tubulin）單克隆抗體（2128，CST，1:1 000 稀釋），鼠 抗GGPPS 單 克 隆 抗 體（sc-271680，Santa Cruz Biotechnology，1:500 稀釋），辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗兔IgG（ab6721，Abcam，1:10 000 稀釋），HRP 標(biāo)記山羊抗鼠IgG（ab6789，Abcam，1:10 000 稀釋）。蛋白電泳轉(zhuǎn)移儀（Bio-Rad），real-time 定量PCR 儀（Eppendorf）。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1 人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 采集ARDS 患者和對(duì)照組人群的外周靜脈血 4 ～5 mL 于EDTA 抗凝管，與全血稀釋液1:1 混勻后緩慢加于1 份人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液的液面之上，以1 500 r/min（半徑為10 cm 水平轉(zhuǎn)子）離心15 min；此時(shí)，離心管中由上至下細(xì)胞分4 層，第1 層為血漿層，第2 層為環(huán)狀乳白色的單個(gè)核細(xì)胞層，第3 層為分離液層，第4 層為紅細(xì)胞層；用吸管小心吸取第2 層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一支15 mL 離心管中，按照說(shuō)明書(shū)清洗離心，即得所需的單個(gè)核細(xì)胞，用于提取RNA 及蛋白。

1.6.2 定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reversetranscription polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 表達(dá) ①提取外周血分離的單個(gè)核細(xì)胞的總RNA。②將總RNA 反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA。③以cDNA 為模板，以人甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因?yàn)閮?nèi)參基因，利用GGPPS 和GAPDH 特異性引物（表1），采用SYBR Green qRT-PCR 檢測(cè)GGPPS 和GAPDH 的表達(dá)水平。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)定量PCR 所得出的GGPPS 和GAPDH 的CT值，應(yīng)用2-ΔΔCT方法計(jì)算GGPPS mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

表1 GGPPS 和GAPDH 的PCR 引物Tab 1 PCR primers of GGPPS and GAPDH

1.6.3 蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）檢測(cè)單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 蛋白表達(dá) ①提取外周血分離的單個(gè)核細(xì)胞的總蛋白。②BCA 法蛋白定量。③在加樣孔中加入2 ～5 μL標(biāo)準(zhǔn)蛋白及蛋白樣品（30 ～50 μg），根據(jù)測(cè)得的蛋白濃度計(jì)算蛋白樣品加樣體積。④先以電壓80 V 恒壓處理30 ～45 min，使蛋白樣品經(jīng)濃縮膠壓縮，待樣品徹底進(jìn)入分離膠后切換電壓，使其升至110 ～120 V 繼續(xù)電泳將蛋白分離。⑤恒流，200 mA 轉(zhuǎn)移至PVDF 膜。⑥封閉過(guò)夜。⑦分別加入一抗4 ℃孵育12 h，TBST 充分洗膜后再分別與二抗室溫孵育1 h。⑧TBST 充分洗膜，進(jìn)行ECL 化學(xué)發(fā)光顯色。曝光后掃描，分別以GGPPS/β-tubulin 顯影條帶灰度值的比值表示GGPPS 蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用GraphPad Prism 5 軟件作圖。定量資料以±s 表示。2 組間均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間比較前行方差齊性檢驗(yàn)。定性資料以頻數(shù)和百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。GGPPS 表達(dá)與ARDS 患者臨床指標(biāo)的相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 存活組與死亡組患者臨床資料比較

存活組及死亡組患者臨床資料對(duì)比分析見(jiàn)表2。2 組患者的年齡、性別、白細(xì)胞（white blood cell，WBC）計(jì)數(shù)、C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、ICU 住院時(shí)間及ARDS 的病因構(gòu)成比的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。死亡組患者血肌酐（creatinine，Cr）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamatepyruvate transaminase，GPT）、 谷 草 轉(zhuǎn) 氨 酶（glutamicoxaloacetic transaminase，GOT）、APACHE Ⅱ評(píng)分、SOFA評(píng)分、機(jī)械通氣（mechanical ventilation，MV）時(shí)間高于存活組，死亡組PaO2/FiO2低于存活組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表2 存活組與死亡組ARDS 患者臨床資料比較Tab 2 Comparison of clinical data between survivors and non-survivors in ARDS patients

Continued Tab

2.2 ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 表達(dá)水平

ARDS 組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 相對(duì)表達(dá)量（3.994±1.325）明顯高于對(duì)照組（P=0.000）（圖1）。ARDS 重度組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 相對(duì)表達(dá)量（5.774±0.573）明顯高于輕度組（3.215±0.958）和中度組（4.365±0.837），中度組明顯高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P=0.000）（圖2）。

圖1 ARDS組與對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA表達(dá)水平比較（n=60）Fig 1 Expression levels of GGPPS mRNA in peripheral blood mononuclear cells of patients with ARDS and healthy controls (n=60)

圖2 不同程度ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 表達(dá)水平比較Fig 2 Expression levels of GGPPS mRNA in peripheral blood mononuclear cells of patients with different degrees of ARDS

2.3 ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 蛋白表達(dá)水平

ARDS 組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，重度組明顯高于輕度及中度組，中度組明顯高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）（圖3）。

圖3 不同程度ARDS 組和對(duì)照組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 蛋白表達(dá)水平Fig 3 Protein expression levels of GGPPS in peripheral blood mononuclear cells of patients with different degrees of ARDS and healthy controls

2.4 ARDS 死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 及蛋白表達(dá)

ARDS 死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 相對(duì)表達(dá)量（5.178±0.675）明顯高于存活組（3.401±1.163），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）（圖4）；ARDS 死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 蛋白表達(dá)水平明顯高于存活組（P＜0.05）（圖5）。

圖4 ARDS 存活組與死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 表達(dá)的比較Fig 4 Expression levels of GGPPS mRNA in peripheral blood mononuclear cells of survivors and non-survivors

圖5 ARDS 存活組和死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中 GGPPS 蛋白表達(dá)Fig 5 Protein expression levels of GGPPS in peripheral blood mononuclear cells of survivors and non-survivors

2.5 ARDS 患者中GGPPS 升高與臨床指標(biāo)的關(guān)系

ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 的高表達(dá)與高的APACHE Ⅱ評(píng)分（r=0.862，P=0.000）、高SOFA 評(píng)分（r=0.719，P=0.023）、低氧合指數(shù)（r=-0.821， P=0.000）、高C 反應(yīng)蛋白（r=0.758，P=0.024）及高白細(xì)胞計(jì)數(shù)（r=0.761，P=0.015）相關(guān)（表3）。

表3 ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析（n=60）Tab 3 Correlation analysis of GGPPS mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells and clinical indicators of ARDS patients (n=60)

3 討論

ARDS 是ICU 常見(jiàn)危重病，盡管目前在臨床治療上取得了很多進(jìn)展，但病死率仍居高不下[2]。早期預(yù)測(cè) ARDS 患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后，探索可行的藥物治療靶點(diǎn)，對(duì)改善患者的預(yù)后及降低病死率具有重要的意義。

他汀類藥物是3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl -coenzyme A，HMG-CoA）還原酶特異性抑制劑，作用于甲羥戊酸代謝途徑的上游，廣泛用于治療高脂血癥。有研究[14-16]顯示，他汀類藥物通過(guò)抑制甲羥戊酸代謝途徑抑制LPS 誘導(dǎo)的肺損傷炎癥反應(yīng)。但是，2 項(xiàng)大型的Ⅲ期隨機(jī)對(duì)照臨床研究顯示，辛伐他汀和洛伐他汀不能降低ARDS 患者的病死率和縮短機(jī)械通氣時(shí)間[17-18]。這2 項(xiàng)研究的結(jié)果，不僅與ARDS 患者的異質(zhì)性過(guò)大有關(guān)，也可能因?yàn)榧词菇o予高劑量藥物也難以達(dá)到有效的血藥濃度及組織濃度[19-20]，還有可能與他汀類藥物的作用靶點(diǎn)處于上游，其阻斷后不良反應(yīng)過(guò)大而限制了藥物的治療作用有關(guān)[16]。因此，在甲羥戊酸代謝途徑下游找到更具特異性的炎癥相關(guān)分子，可能可以更有針對(duì)性地對(duì)ARDS 患者進(jìn)行治療。GGPPS 作為甲羥戊酸代謝途徑下游關(guān)鍵的代謝產(chǎn)物，通過(guò)調(diào)控FPP/GGPP 的平衡在許多疾病中發(fā)揮重要作用。研究[10]顯示，在慢性香煙煙霧暴露誘導(dǎo)的肺部炎癥中GGPPS 表達(dá)升高，下調(diào)肺組織 GGPPS表達(dá)后，促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）/胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular regulated kinases，ERK） 活化水平降低，肺組織白細(xì)胞介素-8 （interleukin-8，IL-8）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表達(dá)降低，提示GGPPS 表達(dá)下調(diào)抑制了炎癥的發(fā)展，推測(cè)GGPPS 在肺部炎癥中可能發(fā)揮作用。本研究組前期研究[12]發(fā)現(xiàn)，在LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型的肺組織中GGPPS 表達(dá)升高，特異性敲除小鼠肺泡上皮細(xì)胞中的Ggpps 可抑制LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷的肺泡蛋白表達(dá)、細(xì)胞滲出及減輕肺組織損傷程度；并且發(fā)現(xiàn)在該模型的肺泡巨噬細(xì)胞中，GGPPS 表達(dá)也升高。肺泡巨噬細(xì)胞在炎癥早期階段即發(fā)生激活，并能釋放多種炎癥因子，在炎癥的進(jìn)程中發(fā)揮重要的作用[21]。如果在早期階段阻止肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)過(guò)度炎癥的啟動(dòng)，將在ARDS 的臨床治療中獲益。本研究通過(guò)檢測(cè)ARDS 患者及正常體檢人群外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 的表達(dá)情況，分析其與APACHE Ⅱ評(píng)分、SOFA 評(píng)分的相關(guān)性等，明確GGPPS 在ARDS 中的臨床意義，進(jìn)一步驗(yàn)證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，為ARDS 的病情判斷、預(yù)后評(píng)估及進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 及蛋白表達(dá)水平均明顯高于正常對(duì)照人群。這一結(jié)果與在慢性香煙煙霧暴露誘導(dǎo)的肺部炎癥研究[10]中肺組織的GGPPS 表達(dá)變化趨勢(shì)一致，與本研究組前期研究[12]中急性肺損傷小鼠肺泡上皮細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞中GGPPS 變化趨勢(shì)一致。前期研究[12]發(fā)現(xiàn)，GGPPS 通過(guò)調(diào)節(jié)小G 蛋白R(shí)ab10 在細(xì)胞膜的分布而影響Toll 樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）-LPS 信號(hào)通路的活性，并最終調(diào)控核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3 （nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 3，NLRP3）炎癥體的活性。本研究結(jié)果顯示，ARDS 患者中，外周血單個(gè)核細(xì)胞GGPPS mRNA 的高表達(dá)與高C 反應(yīng)蛋白及高白細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證了前期研究結(jié)果，提示GGPPS 與ARDS 炎癥程度相關(guān)，GGPPS 可能參與ARDS 的炎癥過(guò)程。前期研究[12]發(fā)現(xiàn)，肺泡上皮細(xì)胞GGPPS 表達(dá)呈LPS 作用時(shí)間及濃度依賴性增加，肺部炎癥越重，GGPPS 表達(dá)越高；而本研究發(fā)現(xiàn)ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 表達(dá)水平隨ARDS 病情加重逐漸升高，其表達(dá)趨勢(shì)與前期研究中GGPPS 的變化趨勢(shì)較一致，提示GGPPS 與ARDS 病情嚴(yán)重程度相關(guān)。APACHE Ⅱ評(píng)分是目前公認(rèn)的危重疾病綜合評(píng)估模型，包含多項(xiàng)重要的臨床體征及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，其分值越高表明患者的狀態(tài)越差，死亡的可能性越大，能夠較為全面地反映患者機(jī)體狀況和評(píng)估危重患者的預(yù)后；SOFA 評(píng)分也是常用的急重癥評(píng)分系統(tǒng)，分值越高，患者病死率越高[22]。柏林診斷標(biāo)準(zhǔn)[13]提出氧合指數(shù)與ARDS 患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 高表達(dá)與高APACHE Ⅱ評(píng)分、高SOFA 評(píng)分、低氧合指數(shù)相關(guān)。ARDS 患者死亡組外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS mRNA 及蛋白表達(dá)水平均明顯高于存活組。以上結(jié)果提示GGPPS 與ARDS 疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)，GGPPS 表達(dá)越高，患者病情越重，預(yù)后 越差。

綜上所述，本研究結(jié)果提示ARDS 患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中GGPPS 表達(dá)水平升高預(yù)示病情危重及預(yù)后不良。關(guān)于GGPPS 是否有望成為治療ARDS 的作用靶點(diǎn)，需要進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞、動(dòng)物及臨床試驗(yàn)進(jìn)行深入研究。此外，本研究存在不足之處，例如缺少對(duì)患者治療期間GGPPS水平的動(dòng)態(tài)評(píng)估，有待于今后進(jìn)一步探索。

參·考·文·獻(xiàn)

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