邵長(zhǎng)波 錢 琨 周 影 孫繼紅 劉雋彥

(吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院,吉林吉林 132012)

柞蠶雌蛾為大蠶蛾科昆蟲柞蠶的雌性成蟲，其性味咸、溫、歸肝腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝益腎，溫脾助胃、寧心安神、調(diào)氣活血的作用，可用于調(diào)整內(nèi)分泌失調(diào)[1-3]。另?yè)?jù)報(bào)導(dǎo)，柞蠶雌蛾提取液含有多種人體類激素，其中含有相對(duì)豐富的類雌性激素，對(duì)更年期綜合征有一定療效[4]?；谏鲜隼碚?，近多年來(lái)，我們以柞蠶雌蛾為主要原料，研究其最佳配方、安全性及功能性[5-6]，開發(fā)其新的功能食品，其中重點(diǎn)進(jìn)行了配方篩選的試驗(yàn)研究。本試驗(yàn)在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上通過連續(xù)給予小鼠不同劑量的柞蠶雌蛾保健食品數(shù)天，觀察柞蠶雌蛾女性功能食品不同配方對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、小鼠睡眠的影響，根據(jù)小鼠血清孕酮(P)、雌二醇(E2)的含量變化及卵巢、子宮等生殖器官重量變化指標(biāo)等篩選最佳配方。試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

柞蠶雌蛾取春秋兩季制種未交尾或交尾的雌蛾。葛根、茯苓、薏苡等中藥材購(gòu)于當(dāng)?shù)厮幉墓尽Ｔ囼?yàn)動(dòng)物選用SPF級(jí)昆明種雌性小鼠，18～22 g，購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)SCXK-(吉)2003-0001。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

血清孕酮放射免疫分析藥盒及血清雌二醇放射免疫分析藥盒，購(gòu)自科大創(chuàng)新股份有限公司忠家分公司，批號(hào)20071225； 碘[125I]雌二醇放射免疫分析藥盒(國(guó)藥準(zhǔn)字S10950191)，碘[125I]孕酮放射免疫分析藥盒(國(guó)藥準(zhǔn)字S10950195)，天津新灣生物科技有限公司生產(chǎn)。大豆異黃酮，規(guī)格1 200 mg/片，(衛(wèi)食健字(2004)第0968號(hào)，香港天力堂醫(yī)藥國(guó)際有限公司監(jiān)制，河南省鄭州市旭龍生物醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司生產(chǎn))。S-9肝微粒體酶由本試驗(yàn)室制備，經(jīng)已知突變物試驗(yàn)結(jié)果，酶活性良好。菌株來(lái)源 TA98、TA100、兩個(gè)菌株由衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所購(gòu)進(jìn)。

1.1.3 儀器與設(shè)備

JJ500電子天平，常熟雙杰測(cè)試儀器廠；DHG-9140型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海恒升科技有限公司；BDC-207型冰柜，青島澳柯馬股份有限公司生產(chǎn)；WF-系列萬(wàn)能粉碎機(jī)，江陰市億豐機(jī)械設(shè)備有限公司；全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，美國(guó)Beckman公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的制備

柞蠶雌蛾粉：于相應(yīng)的時(shí)間收集新鮮柞蠶雌蛾，去翅，處死后置于60 ℃烘箱內(nèi)干燥，研磨粉碎，過100目篩備用。

中藥材粉：葛根、茯苓、薏苡和紅景天分別取原藥材，除去木質(zhì)莖殘根及雜質(zhì)，抖凈灰屑，研磨粉碎，過100目篩，備用。

1.2.2 小鼠生殖器官系數(shù)的測(cè)定

小鼠按要求分籠飼養(yǎng)，室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度45%～52%。食固體飼料，食水自由，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)15日，于末次給藥1 h后稱重，眼眶取血，斷頸法處死，取其子宮及卵巢并稱重。按以下公式求出卵巢(子宮、陰道)系數(shù)：卵巢(子宮、陰道)系數(shù)=卵巢(子宮、陰道)重量(mg)/體重(g)。

1.2.3 小鼠血清性激素含量的測(cè)定

小鼠按“1.2.2”項(xiàng)飼養(yǎng)，眼眶取血后，將血液置離心機(jī)中3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?，采用放射免疫分析試劑盒測(cè)定小鼠血清孕酮和雌二醇的含量。

1.2.4 柞蠶雌蛾粉的原料篩選

設(shè)置7個(gè)試驗(yàn)組，1號(hào)：春蠶雌蛾，且交尾產(chǎn)卵的全蛾；2號(hào)：春蠶雌蛾，且未交尾產(chǎn)卵的全蛾；3號(hào)：春蠶雌蛾，且未交尾產(chǎn)卵的頭胸部；4號(hào)：春蠶雌蛾，且未交尾產(chǎn)卵的全蛾，加入中藥；5號(hào)：春蠶雌性蛾，未交尾產(chǎn)卵的全蛾，加中藥；陽(yáng)性對(duì)照組：大豆異黃酮和空白對(duì)照組。

取雌性小鼠70只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、0.4 g/kg大豆異黃酮組、1-5號(hào)試驗(yàn)組4 g/kg，七個(gè)組，每組10只。按“1.2.2”和“1.2.3”項(xiàng)進(jìn)行小鼠生殖器官系數(shù)的測(cè)定和小鼠血清雌二醇的測(cè)定。

1.2.5 復(fù)方柞蠶雌蛾粉的最佳配方篩選

選取最佳單方柞蠶雌蛾粉組，加入葛根、茯苓、薏苡、紅景天等幾味中草藥按不同量配制，分為6號(hào)、7 號(hào)、8號(hào)、9號(hào)和10號(hào)五個(gè)組；陽(yáng)性對(duì)照同上。

取雌性小鼠70只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、0.4 g/kg大豆異黃酮組、6-10號(hào)試驗(yàn)組4 g/kg，七個(gè)組，每組10只。按“1.2.2”和“1.2.3”項(xiàng)進(jìn)行小鼠生殖器官系數(shù)的測(cè)定和小鼠血清雌二醇的測(cè)定。

1.2.6 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠生殖器官和性激素的影響

選取最佳復(fù)方柞蠶雌蛾粉作為柞蠶雌蛾女性保健食品的初步配方進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。

1.2.6.1 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠體重的影響

取小鼠30只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、高劑量組(4 g/kg)和低劑量組(2 g/kg)，每組10只。灌胃給藥，連續(xù)給藥21 d，每天1次。試驗(yàn)前以及試驗(yàn)期間每周稱量小鼠體重1次并記錄。

1.2.6.2 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠生殖器官和性激素的影響

另取雌性小鼠40只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、高劑量組(4 g/kg)、中劑量組(2 g/kg)和低劑量組(1 g/kg)，每組10只。按“1.2.2”和“1.2.3”項(xiàng)進(jìn)行小鼠生殖器官系數(shù)的測(cè)定和小鼠血清雌二醇的測(cè)定，考察其對(duì)小鼠生殖器官和性激素的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理

以上數(shù)據(jù)采用SPSS13.0數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 柞蠶雌蛾粉原料對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

由表1可知，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，2號(hào)樣的子宮系數(shù)差異顯著(P<0.05)。其次是4號(hào)樣增重較大，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。卵巢系數(shù)以2號(hào)增重較大，其次5號(hào)，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說(shuō)明春蠶雌性未交尾產(chǎn)卵的全蛾對(duì)小鼠子宮和卵巢具有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，交尾蛾雖有作用但影響不顯著。

表1 不同處理對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

注：* 表示P<0.05

2.2.2 柞蠶雌蛾粉原料對(duì)小鼠血清雌二醇的影響

由表2可知，2號(hào)和5號(hào)小鼠的血清雌二醇含量與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)，說(shuō)明未交尾蛾有明顯增加小鼠體內(nèi)雌二醇含量的作用，交尾蛾的此作用不明顯；柞蠶雌蛾體的不同部位對(duì)小鼠體內(nèi)雌二醇的含量無(wú)顯著性差別(P>0.05)。以上結(jié)果表明：在選擇柞蠶雌蛾作為保健食品原料時(shí)，選擇未交尾的雌性全蛾即可。

表2 不同配方的小鼠血清雌二醇含量

注：* 表示P<0.05

2.3 柞蠶雌蛾復(fù)方最佳配方篩選

以2號(hào)柞蠶雌蛾粉為主要原料，按幾種不同比例配以葛根、茯苓、薏苡、女貞子、紅景天等中藥材，分成6～10號(hào)五組復(fù)方，考察復(fù)方柞蠶雌蛾粉對(duì)小鼠生殖器官和血清雌二醇含量的影響，結(jié)果如下。

2.3.1 復(fù)方柞蠶雌蛾粉對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

由表3可見，不同組方對(duì)小鼠生殖器官的重量系數(shù)影響不同，6號(hào)組的子宮和卵巢的重量系數(shù)與陽(yáng)性對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)，但與空白對(duì)照組相比差異不明顯。其它組子宮和卵巢的重量系數(shù)與陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)，說(shuō)明無(wú)增重作用。

表3 不同組方對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

注：* 表示P<0.05。

2.3.2 復(fù)方柞蠶雌蛾粉對(duì)小鼠血清雌二醇的影響

從表4可知，6號(hào)、7號(hào)組小鼠血清雌二醇含量高于空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，但沒達(dá)到顯著性水平(P>0.05)。其他組沒有增加小鼠血清雌二醇含量的作用。

綜合以上結(jié)果，擬選用6號(hào)組作為柞蠶雌蛾女性保健食品的初步配方，進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。

表4 柞蠶雌蛾對(duì)小鼠血清雌二醇的影響

2.4 柞蠶雌蛾女性保健食品的配方篩選

2.4.1 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠體重的影響

從表5可見，小鼠經(jīng)21天給予柞蠶雌蛾女性保健食品，小鼠體重沒有明顯的變化，但有一定的促進(jìn)作用(P>0.05)，沒有發(fā)胖和消瘦、生病和死亡。由此說(shuō)明小鼠日取食4 g/kg較大劑量的雌蛾保健食品對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。

表5 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)的影響[6]

2.4.2 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

從表6可見，低劑量組柞蠶雌蛾女性保健食品可顯著增加卵巢的重量系數(shù)(p<0.05)，中、高劑量組均達(dá)到了極顯著水平(p<0.001)。各劑量組子宮的重量系數(shù)也有所增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明柞蠶雌蛾女性保健食品具有促進(jìn)動(dòng)物性器官發(fā)育的作用。

表6 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠生殖器官系數(shù)的影響

注：* 表示P<0.05， **表示P<0.001。

2.4.3 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠血清孕酮、雌二醇的影響

從表7可知，高劑量的柞蠶雌蛾女性保健食品可極顯著提高小鼠血清孕酮和雌二醇的含量(P<0.001)。中、低劑量組有提高小鼠血清孕酮、雌二醇的含量的作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表7 柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠血清孕酮、雌二醇的影響

注：**表示P<0.001。

3 討 論

卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官之一。卵巢的功能是產(chǎn)生卵子和分泌類固醇激素、雌激素和孕激素以及少量的雄性激素，卵巢衰老后則分泌的各種激素自然減少，卵巢的功能也隨之衰退。卵巢功能衰退可使女性帶來(lái)月經(jīng)失調(diào)、排卵率低下、骨蒸潮熱、失眠多夢(mèng)等癥狀。30歲以后的女性，步入了卵巢功能衰退期，卵巢早衰是引起體內(nèi)一系列變化的根本原因。卵巢功能改善后，可從本質(zhì)上延緩女性衰老[4,7]。

本研究表明：柞蠶雌蛾女性保健食品對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)不良影響，沒有增重和減重作用；且能顯著增加卵巢的重量，提高小鼠血清中孕酮和雌二醇的含量。由此可推論柞蠶雌蛾女性保健食品副作用低，并具有促進(jìn)動(dòng)物性器官發(fā)育和類雌性素樣作用，是良好的女性保健食品。