牛志勇，陳淑芳，趙素娟

（1.河北省獸用液體制劑創(chuàng)新中心 050200；2.河北科星藥業(yè)有限公司 050200）

復(fù)合酚為酚（41.0%～49.0%）、醋酸（22.0%～26.0%）及十二烷基苯磺酸等配制而成的水溶性混合物， 由河北科星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。 本品為國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的新型、廣譜、高效消毒劑，能殺滅多種細(xì)菌、霉菌和病毒，對(duì)多種寄生蟲(chóng)卵也有殺滅作用，主用于畜禽舍、籠具、飼養(yǎng)場(chǎng)地、排泄物的消毒。 但國(guó)內(nèi)對(duì)此報(bào)道較少，為了進(jìn)一步了解其殺菌效果，為臨床提供依據(jù)，我公司特對(duì)其進(jìn)行消毒效果實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)采用懸液定量法進(jìn)行試驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 方法

1.1 菌種

金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌8099（購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）、某公司F-5 棟車(chē)間的常在菌。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌懸液的制備

開(kāi)封凍干菌種后，以普通肉湯溶化懸浮菌體，然后接種到固體培養(yǎng)上劃線培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)至細(xì)菌達(dá)到生長(zhǎng)平衡期時(shí)選擇典型的單體菌落在試管固體培養(yǎng)基斜面上傳代， 于37℃培養(yǎng)24h。 挑取上述第2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于試管固體培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)24h，即為第3 代培養(yǎng)物。 取菌種第3 代的試管固體培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物， 用稀釋液洗下并配制成試驗(yàn)菌懸液。

1.4 常在菌懸液的制備

將6 塊固體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，開(kāi)蓋放置于雞舍內(nèi)，分別于不同的方位，0.5h 后蓋蓋，膜封口，于37℃培養(yǎng)18～24h。 分別挑取不同方位固體營(yíng)養(yǎng)上的培養(yǎng)物中典型菌落， 接種于試管固體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24h，取試管固體培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物，用稀釋液洗下并配制成試驗(yàn)常在菌懸液。

1.5 試驗(yàn)菌的活菌計(jì)量

1.5.1 稀釋?zhuān)?先將菌懸液用比濁法初步估測(cè)菌液含菌濃度，然后用營(yíng)養(yǎng)肉湯做10 倍系列稀釋。 取0.1mL 菌懸液至0.9mL 營(yíng)養(yǎng)肉湯中做101倍稀釋標(biāo)記為1 號(hào)稀釋度； 從1 中取0.1～0.9mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中做102倍稀釋標(biāo)記為2 號(hào)稀釋度； 依次類(lèi)推稀釋至107倍標(biāo)記為7 號(hào)稀釋度。

1.5.2 接種： 4～7 號(hào)各吸取0.1mL 菌液于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿內(nèi)。每個(gè)稀釋度接種3 個(gè)平皿。 將平皿上的菌懸液搖勻后置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。

1.5.3 計(jì)數(shù)：選每個(gè)平皿菌落數(shù)在30～300 個(gè)者計(jì)數(shù)。將計(jì)數(shù)換算成每毫升原液的菌落數(shù)，并計(jì)算平均菌數(shù)。 平板間的誤差率不能超過(guò)10%。

1.6 中合劑鑒定試驗(yàn)

用金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌8099、某F-5 棟車(chē)間的常在菌，設(shè)計(jì)6 組，用懸液法進(jìn)行試驗(yàn)。 結(jié)果判定，以第1組無(wú)試驗(yàn)菌，或僅有極少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)，第2 組有較第1 組為多，但較第3、4、5（組）為少的試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)，第3、4、5（組）有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且1×107cfu/mL～5×107cfu/mL 之間，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%，第6 組無(wú)菌生長(zhǎng)，則判定中合劑合格。 連續(xù)3 次試驗(yàn)取得合格評(píng)價(jià)。 分組情況見(jiàn)下表

1.7 懸液定量法殺菌試驗(yàn)

將復(fù)合酚進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e制成200、400、800 和1600 的稀釋倍數(shù)。

1.7.1 將制備好的菌懸液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，然后用0.9%氯化鈉水溶液進(jìn)行稀釋含菌量1.63×107個(gè)/mL 的試驗(yàn)菌液。

1.7.2 吸取0.5mL 菌液于不同稀釋倍數(shù)的復(fù)合酚4.5mL 內(nèi)。

1.7.3 置20℃水浴中作用5min。

1.7.4 立即吸取上述菌混合菌液1.0mL， 加入9.0mL 已滅菌的硫代硫酸鈉溶液中混勻。

1.7.5 以0.9%氯化鈉水溶液代替復(fù)合酚， 同時(shí)進(jìn)行上述步驟，作為對(duì)照組。

1.7.6 中和10min 后，吸取1.0mL 于固體培養(yǎng)基上，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)、計(jì)算殺菌率。

2 結(jié)果

2.1 中和劑試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明， 用0.75%硫代硫酸鈉溶液作為復(fù)合酚的中合劑，可有效中和復(fù)合酚對(duì)試驗(yàn)菌的殘留作用。

2.2 懸液定量法殺菌試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 對(duì)大腸桿菌8099 的殺菌試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1.1 稀釋倍數(shù)200 結(jié)果

結(jié)果：經(jīng)計(jì)數(shù)細(xì)菌個(gè)數(shù)分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數(shù)：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前或?qū)φ战M活菌數(shù)；Nt：為消毒后或?qū)嶒?yàn)組活菌數(shù)

2.2.1.2 稀釋倍數(shù)400 結(jié)果

結(jié)果：經(jīng)計(jì)數(shù)細(xì)菌個(gè)數(shù)分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數(shù)：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前或?qū)φ战M活菌數(shù)；Nt：為消毒后或?qū)嶒?yàn)組活菌數(shù)

2.2.1.3 稀釋倍數(shù)800 結(jié)果

結(jié)果：經(jīng)計(jì)數(shù)細(xì)菌個(gè)數(shù)分別為0、0、0。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-0）/8.15×106]×100%

=100%

滅菌指數(shù)：KI= N0/ Nt

= 106

N0：為消毒前活菌數(shù)；Nt：為消毒后活菌數(shù)

2.2.1.4 稀釋倍數(shù)1600 結(jié)果

結(jié)果：經(jīng)計(jì)數(shù)細(xì)菌個(gè)數(shù)分別為1、2、5。

殺菌率：Pt=[（N0-Nt）/N0]×100%

=[（8.15×106-2.66*102）/8.15×106×100%

=100%

滅菌指數(shù)：KI= N0/ Nt

= 104

N0：為消毒前活菌數(shù)；Nt：為消毒后活菌數(shù)

3 結(jié)論

根據(jù)消毒劑判斷標(biāo)準(zhǔn)， 殺滅指數(shù)達(dá)到103或殺菌率達(dá)99.9%的深度，才評(píng)為該消毒液有效消毒濃度。 從以上試驗(yàn)可以看出，復(fù)合酚稀釋400 倍無(wú)論對(duì)大腸桿菌8099、金黃色葡萄球菌ATCC6538、某公司F-5 棟車(chē)間常在菌，都100%殺滅，稀釋400倍為有效消毒深度。