曹 森 吉 寧 巴良杰 馬 超王 紅 姚秀單 王 瑞

(1. 貴陽(yáng)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550005；2. 貴州省果品加工工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽(yáng) 550005)

藍(lán)莓屬于杜鵑花科越橘屬，被譽(yù)為“漿果之王”，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[1-2]。由于藍(lán)莓果實(shí)皮薄、易受機(jī)械損傷，采后果實(shí)易變軟，貯藏期出現(xiàn)霉變及腐爛等問(wèn)題[3-4]。

納他霉素(Natamycin)可有效降低酵母菌和霉菌的生長(zhǎng)速率，是一種廣譜、安全、高效的新型生物防腐劑[5-6]。宋秀香等[7]發(fā)現(xiàn)800 mg/L納他霉素能顯著維持綠蘆筍的貯藏品質(zhì)。ε-聚賴(lài)氨酸(ε-Polylysine)是一種白色鏈球菌的代謝產(chǎn)物，具有安全、抑菌效果好、抑菌譜廣等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于果蔬保鮮方面[8-9]。張鵬等[10]發(fā)現(xiàn)1 000 mg/Lε-聚賴(lài)氨酸結(jié)合1-MCP能更好地抑制富士蘋(píng)果的采后衰老。殼聚糖是一種天然堿性多糖，具有天然、安全、抗菌等特點(diǎn)，可通過(guò)降低果蔬的呼吸強(qiáng)度延緩果蔬的生理代謝活動(dòng)和抑制果蔬營(yíng)養(yǎng)成分的下降，從而延長(zhǎng)果蔬的貯藏期[11]。上官新晨等[12]發(fā)現(xiàn)0.8%殼聚糖能更好地延長(zhǎng)金柑貨架期。目前，納他霉素、ε-聚賴(lài)氨酸、殼聚糖處理果實(shí)的方法主要是采后浸泡，若不能及時(shí)晾干會(huì)影響果實(shí)的貯藏期，而采前噴施不同保鮮劑(納他霉素、ε-聚賴(lài)氨酸、殼聚糖)對(duì)果蔬保鮮的研究還未見(jiàn)報(bào)道。試驗(yàn)擬以藍(lán)莓(粉藍(lán))為試驗(yàn)材料，研究采前噴施不同保鮮劑對(duì)藍(lán)莓保鮮效果的影響，為提高藍(lán)莓鮮果貯藏品質(zhì)，延長(zhǎng)鮮果貯藏期提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

藍(lán)莓(粉藍(lán))：貴州省麻江縣實(shí)驗(yàn)基地；

納他霉素(有效成分含量50%)、ε-聚賴(lài)氨酸(有效成分含量≥98%)：浙江新銀象生物工程有限公司；

殼聚糖(相對(duì)分子量≥20萬(wàn)，脫乙酰度≥90%)：上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

質(zhì)構(gòu)儀：TA.XT.Plus型，英國(guó)SMS公司；

氣相色譜儀：GC-14型，日本Shimazhu公司；

紫外分光光度計(jì)：UV-2550型，日本Shimazhu公司；

便攜式殘氧儀：CheckPoint Ⅱ，丹麥Dansensor公司；

迷你數(shù)顯折射計(jì)：PAL-1型，日本ATAGO公司；

臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：TGL-16A型，長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)處理 選擇八九成熟、萼片未倒伏的健康藍(lán)莓，分別用800 mg/L納他霉素、1 000 mg/Lε-聚賴(lài)氨酸、800 mg/L殼聚糖對(duì)藍(lán)莓進(jìn)行采前處理，通過(guò)手持噴霧器均勻噴布于果實(shí)表面以藍(lán)莓表面均著藥液、開(kāi)始滴液即可，對(duì)照組(CK) 噴灑相同量的蒸餾水，自然曬干，6 h后對(duì)處理的果實(shí)進(jìn)行采摘，并立刻運(yùn)回研究室，挑選無(wú)機(jī)械損傷、無(wú)病蟲(chóng)害、果蒂顏色一致的藍(lán)莓分裝于帶孔聚乙烯塑料盒內(nèi)，用厚度為20 μm的PE保鮮膜進(jìn)行裝袋(每袋12盒) ，分裝后的藍(lán)莓鮮果擺放于(0.5±0.5) ℃冷庫(kù)中，預(yù)冷24 h后扎袋進(jìn)行鮮果長(zhǎng)期貯藏。貯藏期間，每隔20 d對(duì)各組藍(lán)莓鮮果進(jìn)行指標(biāo)分析檢測(cè)，共測(cè)80 d。

1.2.2 測(cè)定方法

(1) 腐爛率：采用計(jì)數(shù)法測(cè)定。

(2) 硬度：通過(guò)P/2探頭的質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定，鮮果穿刺深度6 mm，測(cè)前及測(cè)后速度均為2 mm/s，測(cè)中速度1 mm/s。

(3) 呼吸強(qiáng)度及乙烯生成速率：參照文獻(xiàn)[13]。

(4) 可溶性固形物含量：采用迷你數(shù)顯折射儀測(cè)定。

(5) 可滴定酸含量：按GB/T 12456—2008執(zhí)行。

(6) 花色苷含量：參照Moyer等[14]的pH示差法。

(7) 果實(shí)中過(guò)氧化氫酶(CAT)、過(guò)氧化物酶(POD)、脂氧合酶(LOX)、抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)含量：參照曹建康[15]的方法。

(8) 微生物菌落總數(shù)：參照Lacombe等[16]的方法略作修改：每組取20個(gè)藍(lán)莓果實(shí)于250 mL錐形瓶中，加入50 mL無(wú)菌生理鹽水，用漩渦儀振蕩2 min制成樣品液，設(shè)置5個(gè)稀釋度，分別吸取0.1 mL樣品稀釋液于平板計(jì)數(shù)馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上，涂布均勻，于28 ℃培養(yǎng)5～7 d，計(jì)數(shù)霉菌及酵母菌菌落總數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用OriginPro 2017軟件進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析，采用SPSS 19.0軟件的Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性分析(P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著)

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)莓腐爛率的變化

由圖1可知，貯藏40 d內(nèi)，處理組的腐爛率均<5%；而CK組的腐爛率隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)快速上升，貯藏40 d時(shí)的腐爛率顯著高于處理組的(P<0.05)。貯藏40～80 d時(shí)，納他霉素組的果實(shí)腐爛率均低于其他處理組的；第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實(shí)腐爛率分別為12.85%，16.46%，19.21%，26.13%，各組間差異顯著(P<0.05)。因此，不同處理組均能更好地延緩藍(lán)莓采后貯藏期間腐爛率的上升，其中采前噴施納他霉素組對(duì)抑制果實(shí)腐爛率上升的效果最好，與納他霉素能抑制草莓的腐爛率作用效果一致[17]。

圖1 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓腐爛率變化

Figure 1 Changes of different preservatives on decay rate of blueberry

2.2 藍(lán)莓硬度的變化

由圖2可知，剛采收的藍(lán)莓硬度沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，藍(lán)莓硬度均下降。貯藏40～80 d時(shí)，藍(lán)莓硬度大小關(guān)系均為納他霉素組>ε-聚賴(lài)氨酸組>殼聚糖組>CK組；第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實(shí)硬度分別為128.55，121.54，117.85，109.95 g，各組間差異顯著(P<0.05)。因此，不同處理組均能更好地保持藍(lán)莓采后的硬度，其中納他霉素組對(duì)果實(shí)硬度下降的抑制效果最好，與姜愛(ài)麗等[5]的研究結(jié)果一致。

圖2 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓硬度變化

Figure 2 Changes of different preservatives on firmness of blueberry

2.3 藍(lán)莓呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的變化

由圖3可知，剛采收的果實(shí)呼吸強(qiáng)度沒(méi)有顯著差異。貯藏期間，果實(shí)呼吸強(qiáng)度均呈下降趨勢(shì)。貯藏20～80 d時(shí)，CK組呼吸強(qiáng)度抑制高于其他組，而納他霉素組呼吸強(qiáng)度一直低于其他組。第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組的呼吸強(qiáng)度分別比CK組低19.62%，10.99%，7.46%。貯藏期間，乙烯生成速率呈先上升后下降趨勢(shì)，CK組和殼聚糖組在貯藏40 d時(shí)出現(xiàn)高峰，而納他霉素組和ε-聚賴(lài)氨酸組在貯藏60 d時(shí)出現(xiàn)高峰；當(dāng)貯藏80 d時(shí)，乙烯生成速率大小關(guān)系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴(lài)氨酸組>納他霉素組。因此，處理組均能延緩采后果實(shí)呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的上升，而納他霉素組作用效果更好，該結(jié)論與納他霉素能降低西蘭花呼吸強(qiáng)度作用效果一致[6]。

圖3 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓呼吸強(qiáng)度和乙烯生成速率的變化

2.4 藍(lán)莓可溶性固形物含量和可滴定酸含量的變化

由圖4可知，貯藏期間，藍(lán)莓可溶性固形物含量呈下降趨勢(shì)，貯藏20 ～80 d時(shí)，納他霉素組及ε-聚賴(lài)氨酸組的可溶性固形物含量均高于其他組；第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實(shí)可溶性固形物含量分別為11.78%，11.50%，10.90%，10.98%，且納他霉素組及ε-聚賴(lài)氨酸組均顯著高于其他兩組(P<0.05)，但納他霉素組和ε-聚賴(lài)氨酸組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。貯藏期間，CK組的可滴定酸含量一直低于其他組，第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實(shí)可滴定酸含量分別為1.16%，1.13%，1.10%，0.96%，且納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組及殼聚糖組均與CK組差異顯著(P<0.05)，但3組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。因此，采前噴施不同的保鮮劑均可較好地抑制藍(lán)莓鮮果貯藏期的可溶性固形物含量和可滴定酸含量的下降，與藍(lán)莓鮮果的腐爛率結(jié)果一致。

圖4 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓可溶性固形物含量和可滴定酸含量的變化

2.5 藍(lán)莓花色苷含量的變化

由圖5可知，貯藏期間，藍(lán)莓花色苷含量呈先上升后下降趨勢(shì)，貯藏20 d時(shí)，花色苷含量大小關(guān)系為納他霉素組>ε-聚賴(lài)氨酸組>CK組>殼聚糖組，貯藏20 d后，CK組花色苷含量開(kāi)始快速下降，當(dāng)貯藏40～80 d時(shí)，CK組顯著低于其他組(P<0.05)，且納他霉素組的花色苷含量一直高于其他組。貯藏第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組的果實(shí)花色苷含量分別比CK組高3.61%，1.52%，2.20%。因此，采前噴施納他霉素能更好地保持果實(shí)的花色苷含量，與藍(lán)莓鮮果的可溶性固形物和可滴定酸結(jié)果一致。

圖5 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓花色苷含量的變化

Figure 5 Changes of different preservatives on anthocyanin content of blueberry

2.6 藍(lán)莓CAT和POD活性的變化

由圖6可知，貯藏期間，果實(shí)的CAT和POD活性呈先上升后下降趨勢(shì)。貯藏初期，各組果實(shí)的CAT活性與CK組無(wú)顯著差異(P>0.05)；貯藏60～80 d時(shí)，CAT活性大小關(guān)系為納他霉素組>ε-聚賴(lài)氨酸組>殼聚糖組>CK組，第80天各組間均有顯著差異(P<0.05)。貯藏初期，果實(shí)的POD活性顯著高于CK組(P<0.05)；貯藏40～80 d時(shí)，CK組的POD活性均小于其他組，第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組的POD活性分別比CK組高24.81%，4.91%，17.83%。綜上，納他霉素組對(duì)果實(shí)的CAT和POD活性下降的抑制效果更好，說(shuō)明納他霉素處理可提高藍(lán)莓鮮果的CAT和POD活性，使更好的保持藍(lán)莓鮮果自我防御功能[18]。

圖6 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓CAT活性和POD活性的變化

Figure 6 Changes of different preservatives on catalase activity and Peroxidase activity of blueberry

2.7 藍(lán)莓LOX和APX活性的變化

由圖7可知，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)的LOX活性呈上升趨勢(shì)。貯藏初期，各組果實(shí)的LOX活性無(wú)顯著差異(P>0.05)；貯藏40～80 d時(shí)，果實(shí)LOX活性大小關(guān)系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴(lài)氨酸組>納他霉素組；第80天ε-聚賴(lài)氨酸組與納他霉素組均顯著低于其他組(P<0.05)，但兩組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。貯藏期間，果實(shí)的APX活性呈先上升后下降趨勢(shì)，貯藏20～80 d時(shí)，ε-聚賴(lài)氨酸組及納他霉素組果實(shí)的APX活性均顯著低于其他組(P<0.05)。綜上，納他霉素組及ε-聚賴(lài)氨酸組均能更好地降低果實(shí)的LOX和APX活性，與藍(lán)莓鮮果的CAT和POD活性結(jié)果一致。

2.8 藍(lán)莓霉菌及酵母菌菌落總數(shù)的變化

由圖8可知，貯藏期間，藍(lán)莓霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)呈上升趨勢(shì)。貯藏初期，各組藍(lán)莓霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)均顯著低于CK組(P<0.05)，說(shuō)明采前噴施不同保鮮劑均能降低果實(shí)表面霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)；貯藏20～80 d時(shí)，藍(lán)莓霉菌及酵母菌菌落總數(shù)大小關(guān)系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴(lài)氨酸組>納他霉素組；第80天納他霉素組、ε-聚賴(lài)氨酸組、殼聚糖組、CK組的果實(shí)表面霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)分別為1.38，1.78，2.41，3.14 CFU/g，且各組間均有顯著差異(P<0.05)。研究[19]表明，引起藍(lán)莓采后腐爛的病原菌菌株種類(lèi)主要為灰葡萄孢菌(botrytiscinerea)、青霉(Penicillium)和盤(pán)多毛孢屬(Pestalotiopsiscoculi)。試驗(yàn)表明，納他霉素能更好地降低果實(shí)霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)，抑制果實(shí)腐爛率的上升，保持果實(shí)更好的貯藏品質(zhì)，與周?；鄣萚20]研究納他霉素能更好地防治藍(lán)莓果實(shí)灰霉病(botrytiscinerea)的結(jié)果一致。

圖7 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓LOX活性和APX活性的變化

Figure 7 Changes of different preservatives on lipoxygenase activity and Ascorbic acid peroxidase activity of blueberry

圖8 不同保鮮劑處理組的藍(lán)莓霉菌及酵母菌的菌落總數(shù)的變化

Figure 8 Changes of different preservatives on mold and yeast counts of blueberry

3 結(jié)論

采前噴施800 mg/L納他霉素能有效地抑制藍(lán)莓果實(shí)腐爛率的上升，推遲藍(lán)莓鮮果的硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量及花色苷含量的下降，并且抑制果實(shí)POD和CAT活性的下降，明顯延緩果實(shí)的呼吸強(qiáng)度、乙烯生成速率、LOX和APX活性的升高，保持藍(lán)莓的貯藏品質(zhì)。關(guān)于采前還是采后使用納他霉素對(duì)果蔬保鮮的作用效果還需進(jìn)一步研究。