曹 森 吉 寧 巴良杰 馬 超王 紅 姚秀單 王 瑞

(1. 貴陽學院，貴州 貴陽 550005；2. 貴州省果品加工工程技術研究中心，貴州 貴陽 550005)

藍莓屬于杜鵑花科越橘屬，被譽為“漿果之王”，具有較高的營養(yǎng)價值[1-2]。由于藍莓果實皮薄、易受機械損傷，采后果實易變軟，貯藏期出現霉變及腐爛等問題[3-4]。

納他霉素(Natamycin)可有效降低酵母菌和霉菌的生長速率，是一種廣譜、安全、高效的新型生物防腐劑[5-6]。宋秀香等[7]發(fā)現800 mg/L納他霉素能顯著維持綠蘆筍的貯藏品質。ε-聚賴氨酸(ε-Polylysine)是一種白色鏈球菌的代謝產物，具有安全、抑菌效果好、抑菌譜廣等特點，已廣泛應用于果蔬保鮮方面[8-9]。張鵬等[10]發(fā)現1 000 mg/Lε-聚賴氨酸結合1-MCP能更好地抑制富士蘋果的采后衰老。殼聚糖是一種天然堿性多糖，具有天然、安全、抗菌等特點，可通過降低果蔬的呼吸強度延緩果蔬的生理代謝活動和抑制果蔬營養(yǎng)成分的下降，從而延長果蔬的貯藏期[11]。上官新晨等[12]發(fā)現0.8%殼聚糖能更好地延長金柑貨架期。目前，納他霉素、ε-聚賴氨酸、殼聚糖處理果實的方法主要是采后浸泡，若不能及時晾干會影響果實的貯藏期，而采前噴施不同保鮮劑(納他霉素、ε-聚賴氨酸、殼聚糖)對果蔬保鮮的研究還未見報道。試驗擬以藍莓(粉藍)為試驗材料，研究采前噴施不同保鮮劑對藍莓保鮮效果的影響，為提高藍莓鮮果貯藏品質，延長鮮果貯藏期提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

藍莓(粉藍)：貴州省麻江縣實驗基地；

納他霉素(有效成分含量50%)、ε-聚賴氨酸(有效成分含量≥98%)：浙江新銀象生物工程有限公司；

殼聚糖(相對分子量≥20萬，脫乙酰度≥90%)：上海國藥集團化學試劑有限公司；

質構儀：TA.XT.Plus型，英國SMS公司；

氣相色譜儀：GC-14型，日本Shimazhu公司；

紫外分光光度計：UV-2550型，日本Shimazhu公司；

便攜式殘氧儀：CheckPoint Ⅱ，丹麥Dansensor公司；

迷你數顯折射計：PAL-1型，日本ATAGO公司；

臺式高速冷凍離心機：TGL-16A型，長沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗處理 選擇八九成熟、萼片未倒伏的健康藍莓，分別用800 mg/L納他霉素、1 000 mg/Lε-聚賴氨酸、800 mg/L殼聚糖對藍莓進行采前處理，通過手持噴霧器均勻噴布于果實表面以藍莓表面均著藥液、開始滴液即可，對照組(CK) 噴灑相同量的蒸餾水，自然曬干，6 h后對處理的果實進行采摘，并立刻運回研究室，挑選無機械損傷、無病蟲害、果蒂顏色一致的藍莓分裝于帶孔聚乙烯塑料盒內，用厚度為20 μm的PE保鮮膜進行裝袋(每袋12盒) ，分裝后的藍莓鮮果擺放于(0.5±0.5) ℃冷庫中，預冷24 h后扎袋進行鮮果長期貯藏。貯藏期間，每隔20 d對各組藍莓鮮果進行指標分析檢測，共測80 d。

1.2.2 測定方法

(1) 腐爛率：采用計數法測定。

(2) 硬度：通過P/2探頭的質構儀測定，鮮果穿刺深度6 mm，測前及測后速度均為2 mm/s，測中速度1 mm/s。

(3) 呼吸強度及乙烯生成速率：參照文獻[13]。

(4) 可溶性固形物含量：采用迷你數顯折射儀測定。

(5) 可滴定酸含量：按GB/T 12456—2008執(zhí)行。

(6) 花色苷含量：參照Moyer等[14]的pH示差法。

(7) 果實中過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)、脂氧合酶(LOX)、抗壞血酸過氧化物酶(APX)含量：參照曹建康[15]的方法。

(8) 微生物菌落總數：參照Lacombe等[16]的方法略作修改：每組取20個藍莓果實于250 mL錐形瓶中，加入50 mL無菌生理鹽水，用漩渦儀振蕩2 min制成樣品液，設置5個稀釋度，分別吸取0.1 mL樣品稀釋液于平板計數馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上，涂布均勻，于28 ℃培養(yǎng)5～7 d，計數霉菌及酵母菌菌落總數。

1.3 數據處理

采用OriginPro 2017軟件進行數理統(tǒng)計分析，采用SPSS 19.0軟件的Duncan氏新復極差法進行數據差異顯著性分析(P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著)

2 結果與分析

2.1 藍莓腐爛率的變化

由圖1可知，貯藏40 d內，處理組的腐爛率均<5%；而CK組的腐爛率隨貯藏時間的延長快速上升，貯藏40 d時的腐爛率顯著高于處理組的(P<0.05)。貯藏40～80 d時，納他霉素組的果實腐爛率均低于其他處理組的；第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實腐爛率分別為12.85%，16.46%，19.21%，26.13%，各組間差異顯著(P<0.05)。因此，不同處理組均能更好地延緩藍莓采后貯藏期間腐爛率的上升，其中采前噴施納他霉素組對抑制果實腐爛率上升的效果最好，與納他霉素能抑制草莓的腐爛率作用效果一致[17]。

圖1 不同保鮮劑處理組的藍莓腐爛率變化

Figure 1 Changes of different preservatives on decay rate of blueberry

2.2 藍莓硬度的變化

由圖2可知，剛采收的藍莓硬度沒有顯著差異(P>0.05)。隨著貯藏時間的延長，藍莓硬度均下降。貯藏40～80 d時，藍莓硬度大小關系均為納他霉素組>ε-聚賴氨酸組>殼聚糖組>CK組；第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實硬度分別為128.55，121.54，117.85，109.95 g，各組間差異顯著(P<0.05)。因此，不同處理組均能更好地保持藍莓采后的硬度，其中納他霉素組對果實硬度下降的抑制效果最好，與姜愛麗等[5]的研究結果一致。

圖2 不同保鮮劑處理組的藍莓硬度變化

Figure 2 Changes of different preservatives on firmness of blueberry

2.3 藍莓呼吸強度和乙烯生成速率的變化

由圖3可知，剛采收的果實呼吸強度沒有顯著差異。貯藏期間，果實呼吸強度均呈下降趨勢。貯藏20～80 d時，CK組呼吸強度抑制高于其他組，而納他霉素組呼吸強度一直低于其他組。第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組的呼吸強度分別比CK組低19.62%，10.99%，7.46%。貯藏期間，乙烯生成速率呈先上升后下降趨勢，CK組和殼聚糖組在貯藏40 d時出現高峰，而納他霉素組和ε-聚賴氨酸組在貯藏60 d時出現高峰；當貯藏80 d時，乙烯生成速率大小關系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴氨酸組>納他霉素組。因此，處理組均能延緩采后果實呼吸強度和乙烯生成速率的上升，而納他霉素組作用效果更好，該結論與納他霉素能降低西蘭花呼吸強度作用效果一致[6]。

圖3 不同保鮮劑處理組的藍莓呼吸強度和乙烯生成速率的變化

2.4 藍莓可溶性固形物含量和可滴定酸含量的變化

由圖4可知，貯藏期間，藍莓可溶性固形物含量呈下降趨勢，貯藏20 ～80 d時，納他霉素組及ε-聚賴氨酸組的可溶性固形物含量均高于其他組；第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實可溶性固形物含量分別為11.78%，11.50%，10.90%，10.98%，且納他霉素組及ε-聚賴氨酸組均顯著高于其他兩組(P<0.05)，但納他霉素組和ε-聚賴氨酸組間無顯著差異(P>0.05)。貯藏期間，CK組的可滴定酸含量一直低于其他組，第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組及CK組的果實可滴定酸含量分別為1.16%，1.13%，1.10%，0.96%，且納他霉素組、ε-聚賴氨酸組及殼聚糖組均與CK組差異顯著(P<0.05)，但3組間無顯著差異(P>0.05)。因此，采前噴施不同的保鮮劑均可較好地抑制藍莓鮮果貯藏期的可溶性固形物含量和可滴定酸含量的下降，與藍莓鮮果的腐爛率結果一致。

圖4 不同保鮮劑處理組的藍莓可溶性固形物含量和可滴定酸含量的變化

2.5 藍莓花色苷含量的變化

由圖5可知，貯藏期間，藍莓花色苷含量呈先上升后下降趨勢，貯藏20 d時，花色苷含量大小關系為納他霉素組>ε-聚賴氨酸組>CK組>殼聚糖組，貯藏20 d后，CK組花色苷含量開始快速下降，當貯藏40～80 d時，CK組顯著低于其他組(P<0.05)，且納他霉素組的花色苷含量一直高于其他組。貯藏第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組的果實花色苷含量分別比CK組高3.61%，1.52%，2.20%。因此，采前噴施納他霉素能更好地保持果實的花色苷含量，與藍莓鮮果的可溶性固形物和可滴定酸結果一致。

圖5 不同保鮮劑處理組的藍莓花色苷含量的變化

Figure 5 Changes of different preservatives on anthocyanin content of blueberry

2.6 藍莓CAT和POD活性的變化

由圖6可知，貯藏期間，果實的CAT和POD活性呈先上升后下降趨勢。貯藏初期，各組果實的CAT活性與CK組無顯著差異(P>0.05)；貯藏60～80 d時，CAT活性大小關系為納他霉素組>ε-聚賴氨酸組>殼聚糖組>CK組，第80天各組間均有顯著差異(P<0.05)。貯藏初期，果實的POD活性顯著高于CK組(P<0.05)；貯藏40～80 d時，CK組的POD活性均小于其他組，第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組的POD活性分別比CK組高24.81%，4.91%，17.83%。綜上，納他霉素組對果實的CAT和POD活性下降的抑制效果更好，說明納他霉素處理可提高藍莓鮮果的CAT和POD活性，使更好的保持藍莓鮮果自我防御功能[18]。

圖6 不同保鮮劑處理組的藍莓CAT活性和POD活性的變化

Figure 6 Changes of different preservatives on catalase activity and Peroxidase activity of blueberry

2.7 藍莓LOX和APX活性的變化

由圖7可知，隨著貯藏時間的延長，果實的LOX活性呈上升趨勢。貯藏初期，各組果實的LOX活性無顯著差異(P>0.05)；貯藏40～80 d時，果實LOX活性大小關系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴氨酸組>納他霉素組；第80天ε-聚賴氨酸組與納他霉素組均顯著低于其他組(P<0.05)，但兩組間無顯著差異(P>0.05)。貯藏期間，果實的APX活性呈先上升后下降趨勢，貯藏20～80 d時，ε-聚賴氨酸組及納他霉素組果實的APX活性均顯著低于其他組(P<0.05)。綜上，納他霉素組及ε-聚賴氨酸組均能更好地降低果實的LOX和APX活性，與藍莓鮮果的CAT和POD活性結果一致。

2.8 藍莓霉菌及酵母菌菌落總數的變化

由圖8可知，貯藏期間，藍莓霉菌及酵母菌的菌落總數呈上升趨勢。貯藏初期，各組藍莓霉菌及酵母菌的菌落總數均顯著低于CK組(P<0.05)，說明采前噴施不同保鮮劑均能降低果實表面霉菌及酵母菌的菌落總數；貯藏20～80 d時，藍莓霉菌及酵母菌菌落總數大小關系為CK組>殼聚糖組>ε-聚賴氨酸組>納他霉素組；第80天納他霉素組、ε-聚賴氨酸組、殼聚糖組、CK組的果實表面霉菌及酵母菌的菌落總數分別為1.38，1.78，2.41，3.14 CFU/g，且各組間均有顯著差異(P<0.05)。研究[19]表明，引起藍莓采后腐爛的病原菌菌株種類主要為灰葡萄孢菌(botrytiscinerea)、青霉(Penicillium)和盤多毛孢屬(Pestalotiopsiscoculi)。試驗表明，納他霉素能更好地降低果實霉菌及酵母菌的菌落總數，抑制果實腐爛率的上升，保持果實更好的貯藏品質，與周福慧等[20]研究納他霉素能更好地防治藍莓果實灰霉病(botrytiscinerea)的結果一致。

圖7 不同保鮮劑處理組的藍莓LOX活性和APX活性的變化

Figure 7 Changes of different preservatives on lipoxygenase activity and Ascorbic acid peroxidase activity of blueberry

圖8 不同保鮮劑處理組的藍莓霉菌及酵母菌的菌落總數的變化

Figure 8 Changes of different preservatives on mold and yeast counts of blueberry

3 結論

采前噴施800 mg/L納他霉素能有效地抑制藍莓果實腐爛率的上升，推遲藍莓鮮果的硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量及花色苷含量的下降，并且抑制果實POD和CAT活性的下降，明顯延緩果實的呼吸強度、乙烯生成速率、LOX和APX活性的升高，保持藍莓的貯藏品質。關于采前還是采后使用納他霉素對果蔬保鮮的作用效果還需進一步研究。