徐克耐，王國(guó)成，王征，李德馨，李宏玲

（1 天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津300072；2 天士力控股集團(tuán)有限公司天士力研究院，天津300400）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位[1]。我國(guó)年新發(fā)卵巢癌5.2 萬(wàn)余例，死亡2.25 萬(wàn)例；發(fā)病率年增加6.3%，死亡率年增加21.6%，呈顯著上升趨勢(shì)[2]。腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合化療是卵巢癌患者初始治療選擇之一，但晚期患者即使經(jīng)治療獲得完全緩解，仍有70%～80%出現(xiàn)復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)性卵巢癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期逐次縮短，且患者多次復(fù)發(fā)后對(duì)鉑類(lèi)藥物的耐藥性增加，治療的難度和治療方案的選擇越來(lái)越困難，嚴(yán)重影響患者的生存和生活質(zhì)量。近年來(lái)，大量的研究致力于開(kāi)發(fā)新的、有潛力的卵巢癌靶向治療藥物，以期達(dá)到目標(biāo)[3]。

聚二磷酸腺苷核糖多聚酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP）抑制劑是一類(lèi)新型的卵巢上皮癌靶向治療藥物，大量研究證明，PARP 抑制劑對(duì)復(fù)發(fā)性卵巢癌患者具有較好的療效和安全性，可顯著延長(zhǎng)其無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）。PARP抑制劑的使用使卵巢癌治療從原來(lái)的化療期間等待，復(fù)發(fā)后再化療，轉(zhuǎn)變?yōu)閮纱位熤g加入維持治療的新模式，有效延長(zhǎng)PFS達(dá)3年以上，并降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。PARP 抑制劑在全球的獲批及各國(guó)治療指南[4]的推薦下，已經(jīng)成為復(fù)發(fā)性卵巢癌患者的有效治療選擇之一。

HD199 是化學(xué)合成的全新結(jié)構(gòu)的PARP 抑制劑，水溶性好，口服生物利用度高，在腫瘤動(dòng)物模型上顯示了很好的抑瘤效果。同靶點(diǎn)藥物已有四個(gè)獲得FDA 批準(zhǔn)上市，用于卵巢癌術(shù)后的維持治療和晚期三陰性乳腺癌的治療。已上市的PARP抑制劑均為口服固體制劑，分子量在500左右，化學(xué)結(jié)構(gòu)中含內(nèi)酰胺的雙環(huán)或類(lèi)似雙環(huán)的結(jié)構(gòu)，酰胺鍵旁邊有疏水性小取代基，或者含有雙環(huán)中的疏水性大基團(tuán)[5]，因此往往溶解性不高，生物利用度不理想，需要通過(guò)制劑手段加以彌補(bǔ)。資料[6-9]顯示，奧拉帕利（Olaparib）為難溶性藥物，處方中通過(guò)加入增溶劑和乳化劑達(dá)到促進(jìn)吸收、改善口服生物利用度的目的；瑞卡帕利（Rucaparib）、尼拉帕利（Niraparib）和他拉唑帕利（Talazoparib）為提高溶解度，分別采用右旋樟腦磺酸鹽和甲苯磺酸鹽，他拉唑帕利還需通過(guò)控制原料粒徑達(dá)到所要求的釋放度。

HD199 的臨床研究擬采用便于劑量調(diào)整的硬膠囊劑。與同類(lèi)藥物相比，HD199 具有良好的溶解性；但美中不足，處方前研究表明，HD199 原料藥略有引濕性，外觀呈絮狀、質(zhì)輕（松密度0.295 g/cm3）易結(jié)塊，流動(dòng)性差（休止角為55.5°、壓縮度為44.4%）；同時(shí)，高溫會(huì)導(dǎo)致HD199 一定程度的化學(xué)降解。本文在了解和分析HD199 理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，從選擇合適的輔料入手，采用適宜的制備工藝，目標(biāo)是解決HD199流動(dòng)性差的問(wèn)題，同時(shí)避免主成分的降解，研制出符合質(zhì)量要求的HD199 膠囊。在臨床研究確定了合適的給藥劑量后，本文將從改善制劑屬性著手，研究更合適HD199 的新型口服制劑。例如將藥物包封到微膠囊，能避開(kāi)水分、空氣及光線的影響，又能增加藥物的穩(wěn)定性、提高藥物利用率和安全性[10-11]；再者親水小分子藥物的緩釋微球可以延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，改善藥物的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征，具有制備操作簡(jiǎn)單，智能靶向等特點(diǎn)[12-13]。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 試劑與儀器

HD199原料藥，純度99.2%（批號(hào)20160107），自制（天士力控股集團(tuán)有限公司）；乳糖，藥用輔料級(jí)，德國(guó)美劑樂(lè)集團(tuán)；二氧化硅，藥用輔料級(jí)，安徽山河藥用輔料股份有限公司；硬脂酸鎂，藥用輔料級(jí)，浙江中維藥業(yè)有限公司；2號(hào)不透明白色明膠空心膠囊，藥用輔料級(jí)，蘇州膠囊有限公司。

BT-1000粉體綜合特性測(cè)試儀，丹東市百特儀器有限公司；MS2000 馬爾文激光粒度測(cè)定儀，美國(guó)麥奇克有限公司；Cary 60紫外可見(jiàn)分光光度儀，安捷倫科技有限公司；RC806D溶出儀，天津市天大天發(fā)科技有限公司；JJ-1000 型電子天平：常熟市雙杰測(cè)試儀器廠；高效液相色譜儀1260，安捷倫科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 粉體學(xué)性質(zhì)測(cè)定

休止角、松密度和振實(shí)密度：采用BT-1000粉體綜合特性測(cè)試儀，按說(shuō)明書(shū)操作，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，取平均值。

粒徑及粒徑分布：采用MS2000 馬爾文激光粒度測(cè)定儀(干法進(jìn)樣檢測(cè))。

引濕性：按照《中國(guó)藥典》2015 年版第四部通則，（9103）藥物引濕性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則，與恒溫干燥器溫度25℃±1℃，相對(duì)濕度80%±2%（硫酸銨飽和溶液）下，將裝有厚度約1mm 的供試品的稱(chēng)量瓶敞口放置，分別于2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h取出，精確稱(chēng)量，計(jì)算吸濕增重百分比。

1.2.2 HD199膠囊的制備

首先將處方量的HD199與二氧化硅（SiO2）按照等量遞加法初步混合，混合粉過(guò)60 目篩，再過(guò)100目篩；再加入處方量的稀釋劑，置于自封袋內(nèi)混合20min，再加入處方量的硬脂酸鎂混合10min，即得中間體混粉。根據(jù)混粉中主藥HD199 的含量計(jì)算理論囊重；按照理論囊重用膠囊板進(jìn)行膠囊的手工灌裝，即得HD199膠囊。

1.2.3 HD199膠囊含量檢測(cè)方法

色譜柱為Zorbax SB-C18（250×4.6nm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)299nm；柱溫40℃；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量20μL；流動(dòng)相中A 為0.01mol/L 磷酸氫二銨緩沖液（pH5.5），B為甲醇，A、B體積比為80∶20。

1.2.4 HD199膠囊有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的HPLC條件

色譜柱為Zorbax SB-C18（250×4.6nm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)299nm；柱溫40℃；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量20μL；流動(dòng)相中A 為0.01mol/L 磷酸氫二銨緩沖液（pH 5.5），B為甲醇。按照峰面積歸一化法計(jì)算樣品中各雜質(zhì)的百分含量和雜質(zhì)總量。

表1 有關(guān)物質(zhì)色譜梯度洗脫方法

1.2.5 HD199膠囊溶出曲線的測(cè)定

照溶出度測(cè)定法（2015 年版《中國(guó)藥典》四部通則0931第一法），轉(zhuǎn)速為75r/min，溶出介質(zhì)為pH6.8 磷酸鹽緩沖液，分別于5min、10min、15min、30min 和45min 取樣，取溶出液8mL，經(jīng)0.45μm 纖維濾膜濾過(guò)，同時(shí)補(bǔ)加等量同溫溶劑。取續(xù)濾液5mL 置10mL 量瓶中，并用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取HD199 對(duì)照品適量，加溶出介質(zhì)溶解制成每1mL 中含HD199 約25μg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液及對(duì)照品溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（中國(guó)藥典2015 年版四部通則0401)，在299nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算溶出度并繪制累積溶出曲線。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 助流劑的篩選

HD199 流動(dòng)性差，為了獲得填充所需要的流動(dòng)性，首先考慮加入助流劑改善物料粉體學(xué)性質(zhì)。微粉硅膠又稱(chēng)膠體SiO2因?yàn)榱叫?，是常用助流劑?dāng)中效果最好的，同時(shí)還能夠改善吸濕和粘連[14]。作為助流劑微粉硅膠用量一般為處方總量的0.1%～5%，首先研究了微粉硅膠用量對(duì)HD199 粉體學(xué)性質(zhì)的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。用量在API質(zhì)量的0～7.5%的范圍內(nèi)，隨著用量的增加，HD199 的粉體性質(zhì)有明顯的改善：休止角由55.5°降低到45.6°，壓縮度由44.4%下降到30.7%，表明物料的流動(dòng)性明顯增加；當(dāng)繼續(xù)增加SiO2用量到API 質(zhì)量的10%，并不能進(jìn)一步增加API的流動(dòng)性。這與文獻(xiàn)[15]的報(bào)道相一致，即達(dá)到最好的流動(dòng)性標(biāo)準(zhǔn)的助流劑通常會(huì)有一個(gè)最佳的濃度值。因此，對(duì)于HD199，助流劑微粉硅膠的最佳用量為API的7.5%。

2.2 稀釋劑的篩選

固體口服制劑中常用的稀釋劑（填充劑）主要有微晶纖維素、一水乳糖、預(yù)膠化淀粉等。三種稀釋劑各具特點(diǎn)，都具有良好的流動(dòng)性和可壓性。分別選擇三種稀釋劑中流動(dòng)性較好的型號(hào)（表3）進(jìn)行研究。

2.2.1 稀釋劑粒徑的考察

表2 SiO2助流劑比例對(duì)HD199粉體學(xué)性質(zhì)的影響

硬膠囊填充工藝研究時(shí)，除了滿(mǎn)足物料流動(dòng)性的要求，保證原輔料混合的均一性，避免在膠囊填充過(guò)程中混合物料發(fā)生分層現(xiàn)象至關(guān)重要，這決定了膠囊的重量和藥物含量的均一性。顆粒的流動(dòng)性大體上與粒徑呈正相關(guān)，如果組成粉體混合物的顆粒間有較大的粒徑差異，在混合過(guò)程中就會(huì)表現(xiàn)出不同的運(yùn)動(dòng)特征，進(jìn)而導(dǎo)致混合不均勻，甚至分層[16]。因此，按照1.2.1 節(jié)方法分別測(cè)定HD199、微晶纖維素、一水乳糖、預(yù)膠化淀粉的粒徑及粒徑分布，結(jié)果列于表3中。對(duì)比各稀釋劑與HD199原料藥的粒徑分布特征，其中乳糖粒徑及粒徑分布與HD199更為接近，可作為處方的首選。

表3 三種稀釋劑粒徑分布特征值測(cè)定結(jié)果

2.2.2 稀釋劑對(duì)處方流動(dòng)性的影響

固體口服制劑中稀釋劑的用量一般占到25%～85%，考慮到HD199臨床擬用劑量和膠囊殼填充量的限制，初步確定稀釋劑用量為HD199 的1.5 倍，微粉硅膠用量為HD199 的7.5%，潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂為處方總量的1%。按照1.2.2 節(jié)的方法分別以乳糖、微晶纖維素和預(yù)膠化淀粉為稀釋劑制備三批HD199膠囊，分別稱(chēng)為處方1（乳糖）、處方2（微晶纖維素）、處方3（預(yù)膠化淀粉）。取各處方的混粉，分別測(cè)定休止角、松密度、振實(shí)密度、壓縮度、引濕性等粉體學(xué)性質(zhì)，進(jìn)行比較分析，結(jié)果見(jiàn)表4和圖1；并進(jìn)一步對(duì)比川北方程指導(dǎo)處方篩選，結(jié)果見(jiàn)表5。

研究結(jié)果顯示三個(gè)處方混合粉的休止角和壓縮度相對(duì)原料藥粉末均有很大改善，但處方1的休止角和壓縮度均最小，流動(dòng)性最好，明顯優(yōu)于處方2和處方3。川北方程的計(jì)算結(jié)果也給出了同樣的結(jié)果，即處方1的a值和1/b值最小，表明處方1的流動(dòng)性和充填性最佳。在引濕性上（圖1），三個(gè)處方均在可接受的范圍。

表4 各處方的粉體學(xué)性質(zhì)(n=3)

表5 各處方樣品的川北方程

圖1 三種稀釋劑及各處方吸濕增重比變化趨勢(shì)

2.2.3 稀釋劑對(duì)膠囊釋放行為的影響

稀釋劑的選擇要求兼顧填充過(guò)程順利和藥物溶出，在某些情況下，滿(mǎn)足了填充條件就會(huì)阻礙藥物的釋放，因此需要綜合考慮。分別取2.2.2 節(jié)制備的三批膠囊，按照1.2.5 節(jié)的方法繪制三種膠囊的溶出曲線，如圖2所示。處方3的5 min 溶出偏低，分析可能與預(yù)膠化淀粉遇水產(chǎn)生一定的黏性有關(guān)，10 min 溶出度比較3 個(gè)處方?jīng)]有顯著差異，15 min都能夠達(dá)到藥物全溶出，因此從溶出度方面考慮，3個(gè)處方?jīng)]有顯著區(qū)別。

圖2 三種處方的溶出曲線

對(duì)于水溶性藥物，當(dāng)處方中含有的乳糖達(dá)到50%時(shí)溶解度幾乎沒(méi)有變化；當(dāng)乳糖的含量增加到80%時(shí)，藥物從膠囊中的溶出速率明顯遲緩，這可能是由于溶解競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制造成的[17]。因此，選擇乳糖用量為HD199 的1.5 倍(約處方總量的60%)也較為合適。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定HD199 膠囊的處方組成為HD199/微粉硅膠/乳糖/硬脂酸鎂（質(zhì)量比為1∶0.075∶1.5∶0.025）。

2.3 原輔料相容性考察

將乳糖、二氧化硅、硬脂酸鎂和膠囊殼（剪成碎片使用）分別與主藥按一定比例混合均勻后，分別置于強(qiáng)光照射（總照度不低于1.2×106Lux·h）、高溫（60℃）、高濕（92.5%RH，25℃）條件下放置，于第0天、5天、10天、30天取樣，按照1.2.3節(jié)方法測(cè)定HD199 的含量，并計(jì)算相對(duì)于0 天HD199含量的相對(duì)含量，結(jié)果見(jiàn)表6；按照1.2.4節(jié)方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的總量，結(jié)果見(jiàn)表7。

2.4 工藝重現(xiàn)性

按照處方1 和1.2.2 節(jié)描述制備3 批HD199 膠囊，批號(hào)分別為201610181，201610182，201610183。制備的三批膠囊以1.2.5 節(jié)方法繪制溶出曲線，如圖3所示，三批膠囊的溶出曲線一致，表明工藝重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)論

PARP 抑制劑HD199 是全新結(jié)構(gòu)的化藥1 類(lèi)腫瘤靶向藥物。本研究在不改變晶型的前提下，通過(guò)篩選合適的助流劑、稀釋劑解決了原料藥流動(dòng)性差的問(wèn)題；采用粉末直接填充膠囊工藝，避免制粒過(guò)程中藥物暴露在高溫下而導(dǎo)致的主成分的降解。采用常規(guī)輔料制備的臨床研究用HD199 膠囊劑，劑量便于靈活調(diào)整；處方合理，藥物溶出快速、完全、批間一致性好；制備工藝簡(jiǎn)單易行，適于工業(yè)放大生產(chǎn)。

圖3 3批HD199膠囊的溶出曲線

表6 HD199與輔料的相容性（HD199的相對(duì)含量）

表7 HD199與輔料的相容性（總雜質(zhì)含量）