王超萃 戚基萍

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)是人體神經(jīng)系統(tǒng)的主要部分，包括腦和脊髓兩部分。CNS負(fù)責(zé)全身各處信息的接收、整合、加工及傳出。神經(jīng)細(xì)胞凋亡壞死、氧化損傷、炎癥反應(yīng)、缺血、脫髓鞘、星形膠質(zhì)細(xì)胞與少突膠質(zhì)細(xì)胞的興奮性毒性作用，軸突和基因的改變等多種病理生理學(xué)機(jī)制參與CNS疾病的發(fā)生發(fā)展過程〔1，2〕。CNS的這些改變通常會(huì)引起意識(shí)、認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)、感覺及平衡障礙等多種臨床表現(xiàn)，甚至出現(xiàn)死亡。神經(jīng)元細(xì)胞無法再生，這給CNS損傷的患者留下了局限的治療方案〔3，4〕。Hippo信號(hào)通路是1995年首次在果蠅體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)〔5〕，在組織修復(fù)、調(diào)控組織器官大小、調(diào)節(jié)干細(xì)胞、調(diào)節(jié)細(xì)胞極化、黏附、增殖和凋亡等方面具有重要作用的高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路〔6〕。哺乳動(dòng)物不育系20樣激酶(MST)1，又稱絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(STK)4，作為一個(gè)效應(yīng)因子，MST1是Hippo信號(hào)通路的核心組件。近年來，越來越多的證據(jù)表明MST1通過磷酸化、二聚化及核內(nèi)外定位等方式，在細(xì)胞分化、控制穩(wěn)態(tài)、促進(jìn)細(xì)胞黏附和遷移、抑制自噬、促進(jìn)凋亡等多種方式參與了CNS生理功能的調(diào)節(jié)，該激酶異常將導(dǎo)致CNS疾病的發(fā)生，如膠質(zhì)瘤、腦缺血和肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)等。因此，探討MST1在CNS中所起的作用，將很大程度上拓寬治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病潛在靶點(diǎn)的視野。本文就MST1激酶在CNS疾病中的相關(guān)機(jī)制及最新進(jìn)展作一綜述。

1 MST1結(jié)構(gòu)及生理功能

在哺乳動(dòng)物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，通常存在5種MST激酶，包括MST1(STK4)、MST2 (STK3)、MST3 (STK24)、MST4 (STK26)和YSK1 (STK25)〔7〕。MST1和MST2被認(rèn)為是生發(fā)中心激酶(GCK)Ⅱ亞家族成員，其中MST1是通過淋巴細(xì)胞 cDNA 文庫克隆篩選獲得。MST3、MST4、YSK1屬于GCKⅢ亞家族〔8〕。GCKⅡ亞家族主要在應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用。MST1基因是果蠅Hippo基因在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的同源子，位于20q11染色體，基因長度113 kb，含有外顯子和內(nèi)含子分別為11個(gè)和10個(gè)，其cDNA序列含有一個(gè)由1 461個(gè)核苷酸組成的開放閱讀框，mRNA全長6 344 bp。MST1廣泛表達(dá)于人體內(nèi)細(xì)胞系，主要分布于細(xì)胞質(zhì)。MST1蛋白含有487個(gè)氨基酸殘基，主要由N端330個(gè)氨基酸殘基的催化區(qū)和C端157個(gè)氨基酸殘基的非催化區(qū)構(gòu)成，其中非催化區(qū)含有3個(gè)部分，即2個(gè)功能性核輸出信號(hào)肽、1個(gè)56個(gè)氨基酸殘基組成的二聚化區(qū)域和1個(gè)63個(gè)氨基酸殘基組成的抑制性區(qū)域〔9，10〕(圖1)。

圖1 MST1結(jié)構(gòu)域

MST1/2在輔因子WW45的幫助下通過其SARAH域產(chǎn)生的相互作用結(jié)合并磷酸化下游NDR家族激酶和Lats1/2〔11〕。同時(shí)，通過MST1/2磷酸化Mob1a/b，促進(jìn)Mob1a/b與Lats1/2結(jié)合，激活Lats1/2〔12〕。在Lats1/2的誘導(dǎo)下，兩個(gè)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子YAP、TAZ與14-3-3蛋白相互作用，導(dǎo)致其在細(xì)胞質(zhì)中功能喪失，這種途徑通過yes相關(guān)蛋白(YAP)/轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)失去與其靶基因之間的相互作用而負(fù)向減弱轉(zhuǎn)錄活性〔13〕。核內(nèi)YAP與轉(zhuǎn)錄因子TEAD1-4相互作用，促進(jìn)細(xì)胞增殖來對(duì)抗細(xì)胞死亡。因此，Hippo信號(hào)通路避免了干細(xì)胞的過度增殖和器官的過度生長〔2，14〕。最近的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，MST1和MST2信號(hào)也通過抑制GABP的轉(zhuǎn)錄活性抑制YAP的功能〔15〕。此外，Hippo信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞和邊緣細(xì)胞中F-actin細(xì)胞骨架的極化，這一過程是在果蠅體內(nèi)通過抑制Ena/Capping蛋白體系而不是Yki因子得到證實(shí)的〔16，17〕。

MST1/2在神經(jīng)細(xì)胞死亡調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用，在氧化應(yīng)激壓力環(huán)境下，MST1/2可被激活，磷酸化人叉頭框蛋白O(FOXO)，上調(diào)促凋亡基因Bim表達(dá)〔18〕。這一過程通過在神經(jīng)元中磷酸化位于Ser212位點(diǎn)的FOXO1或位于Ser207位點(diǎn)的FOXO3來調(diào)控細(xì)胞死亡〔19〕。同時(shí)，MST1/2可以磷酸化AKT，抑制其在FOXO3上的活化，間接阻斷FOXO3和14-3-3蛋白的相互作用，導(dǎo)致FOXO3可以自由轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核，激活促凋亡基因促進(jìn)細(xì)胞凋亡。MST1還可以通過FOXO1促進(jìn)促凋亡介質(zhì)NOXA的轉(zhuǎn)錄，該信號(hào)通路主要作用于癌細(xì)胞凋亡控制〔20〕。上游蛋白激酶c-Abl在氧化應(yīng)激反應(yīng)過程中通過在Tyr433位點(diǎn)磷酸化調(diào)控MST1并且促進(jìn)其與FOXO3相互作用來介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡〔21〕。有研究表明，位于MST1-FOXO3信號(hào)通路上游的c-Abl加速了大鼠海馬神經(jīng)元和原代培養(yǎng)神經(jīng)元的細(xì)胞死亡過程〔22〕。然而，另一個(gè)研究表明，在星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激條件下，MST1與c-Abl之間存在相互調(diào)控的動(dòng)態(tài)機(jī)制〔23〕。MST1的活化在細(xì)胞凋亡過程中誘導(dǎo)激活下游蛋白C-Jun氨基末端激酶(JNK)，過度表達(dá)的MST1對(duì)染色質(zhì)凝聚和DNA斷裂起重要作用〔24〕。此外，最近的研究表明，MST1/2是如何磷酸化及穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄因子FOXA2的，F(xiàn)OXA2在調(diào)節(jié)肺細(xì)胞成熟和表面活性物質(zhì)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要作用〔25〕。并且，MST1-FOXO信號(hào)通路有利于免疫系統(tǒng)維持T細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)〔26〕(圖2)。

圖2 MST1信號(hào)通路

2 MST1與CNS疾病的研究

2.1MST1與腫瘤 神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性CNS腫瘤，也是目前臨床較難治療腫瘤之一，具有高復(fù)發(fā)率和死亡率。研究表明，在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌〔27，28〕、膀胱癌〔29〕、淋巴瘤、白血病〔30〕、甲狀腺癌〔31〕、肺癌〔32〕、軟組織肉瘤〔33〕、肝癌〔34〕、乳腺癌〔35〕、胃癌〔36〕、宮頸癌〔37〕、大腸癌〔38〕、子宮內(nèi)膜癌〔39〕和胰腺癌〔40〕等多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)MST1表達(dá)異常下降，提示細(xì)胞質(zhì)內(nèi)異常表達(dá)的MST1可以作為腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的分子標(biāo)志物，通過以上腫瘤與MST1之間的關(guān)系推斷，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)的MST1基因也存在異常表達(dá)。通過Western印跡檢測(cè)膠質(zhì)瘤及正常腦組織的MST1蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示MST1在各個(gè)正常腦組織中表達(dá)相似，但在膠質(zhì)瘤中表達(dá)存在顯著差異，或表達(dá)增高或表達(dá)降低。同時(shí)膠質(zhì)瘤U251和U87細(xì)胞中敲除MST1能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲，MST1過表達(dá)可有效抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲與增殖，提示MST1可抑制膠質(zhì)瘤的增殖并促進(jìn)膠質(zhì)瘤的凋亡，MST1可作為膠質(zhì)瘤治療的新靶點(diǎn)〔41〕。然而，另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明，采用Western印跡和定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MST1的蛋白和mRNA相對(duì)于正常腦組織在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，與其他腫瘤中MST1普遍表達(dá)下降相反〔42〕。對(duì)膠質(zhì)瘤患者的組織樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色分析，可以發(fā)現(xiàn)MST1蛋白在近1/2樣本的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，而在正常腦組織樣本中100%表達(dá)。同時(shí)，MST1蛋白的表達(dá)與腫瘤的病理級(jí)別有關(guān)，高級(jí)別膠質(zhì)瘤(Ⅲ、Ⅳ級(jí))陽性表達(dá)率顯著低于低級(jí)別膠質(zhì)瘤(Ⅰ、Ⅱ級(jí))〔41〕。MST1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)高低均存在，可能說明MST1參與多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，受到多種調(diào)控機(jī)制的調(diào)節(jié)，但具體機(jī)制尚不明確。微小RNA(miRNAs)是人類腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要組成部分，miRNA與靶基因通過3′端非編碼區(qū)相互結(jié)合來抑制靶基因的表達(dá)。研究表明，miR-130b在人類膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長過程中明顯過表達(dá)，上調(diào)的miR-130b直接抑制Hippo信號(hào)通路中的MST1和SAV1兩個(gè)基因從而導(dǎo)致癌基因YAP/TAZ的表達(dá)〔43〕。此外，有實(shí)驗(yàn)證明，MST1能通過調(diào)控蛋白激酶B(AKT)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號(hào)通路來調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長，MST1與AKT結(jié)合后負(fù)向調(diào)控AKT和mTOR的活性，AKT能夠逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的過程〔41〕。同時(shí)，MST1可以通過FOXO3a正向調(diào)控去乙?；?SIRT)6的表達(dá)。敲除SIRT6后，MST1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用顯著逆轉(zhuǎn)〔44〕。

2.2MST1與腦血管疾病 腦血管疾病包括短暫性腦缺血發(fā)作、腦卒中、椎-基底動(dòng)脈供血不足、腦血管性癡呆、高血壓腦病、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤、顱內(nèi)血管畸形、腦動(dòng)脈炎、其他動(dòng)脈疾病與顱內(nèi)靜脈病、靜脈竇及腦部靜脈血栓形成。作為最常見的腦血管疾病，腦卒中大致可分為缺血性腦卒中及出血性腦卒中。近年來，腦卒中已超過惡性腫瘤成為中國第一致死病因。腦缺血是腦卒中最常見類型，占70%～80%。研究表明，在氧化應(yīng)激介導(dǎo)的腦缺血后神經(jīng)元細(xì)胞死亡的病變過程，MST1信號(hào)通過激活小膠質(zhì)細(xì)胞參與。小膠質(zhì)細(xì)胞的激活是腦缺血引起免疫微環(huán)境改變的重要步驟，是氧化應(yīng)激誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞死亡的重要機(jī)制〔45～47〕。在大腦中動(dòng)脈阻塞誘導(dǎo)的腦缺血小鼠中，當(dāng)條件性敲除小膠質(zhì)細(xì)胞的MST1，可顯著緩解和改善腦缺血導(dǎo)致的腦損傷。MST1可通過激活核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB與磷酸化IκBα來介導(dǎo)腦缺血相關(guān)的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。在小膠質(zhì)細(xì)胞激活的病變過程中，上游Src激酶采用調(diào)節(jié)MST1-IκB信號(hào)通路參與，因而MST1有望成為缺血性腦卒中新的有效治療靶點(diǎn)〔45〕。相關(guān)研究還表明，源自坡壘樹葉的Malibatol A可以通過c-Abl-MST1信號(hào)通路阻止氧糖剝奪導(dǎo)致的BV2細(xì)胞損傷〔48〕。BV2細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、表型和功能等方面均與原代小膠質(zhì)細(xì)胞相似，是小膠質(zhì)細(xì)胞常見的替代細(xì)胞〔49〕。Malibatol A對(duì)損傷后的BV2細(xì)胞具有保護(hù)作用，抑制M1型小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，促進(jìn)M2型小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)。P-MST1和c-Abl在氧糖剝奪損傷后的BV2細(xì)胞中表達(dá)增加，c-Abl抑制劑SPT157可以使p-MST1-Y433的表達(dá)下降〔48〕。

蛛網(wǎng)膜下腔出血是臨床上較為常見的神經(jīng)外科急危重癥，包含外傷性和自發(fā)性兩種情況，自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者50%～80%是由顱內(nèi)動(dòng)脈瘤破裂所致。研究表明，蛛網(wǎng)膜下腔出血后大量活性氧產(chǎn)生引起蛋白L-異天冬氨酰甲基轉(zhuǎn)移酶(PCMT)1表達(dá)下降，磷酸化激活MST1，引發(fā)蛛網(wǎng)膜下腔出血后神經(jīng)元凋亡。外源性PCMT1激動(dòng)劑CGP 3466B能夠緩解神經(jīng)元凋亡〔50〕。此外，MST1通過下游NF-κB/基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9信號(hào)通路參與蛛網(wǎng)膜下腔出血誘導(dǎo)的血腦屏障破壞和白質(zhì)纖維損傷過程，這為切斷MST1上游下游信號(hào)通路提供了新思路〔41〕。MST1通過MST1-FOXO3信號(hào)通路參與血管性癡呆的發(fā)生〔51〕。血管性癡呆是一種常見的與年齡相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，多在60歲以后發(fā)病，有腦卒中史。MST1-FOXO3信號(hào)通路能夠介導(dǎo)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞死亡〔20〕。最近的一項(xiàng)研究表明，丹參，一種常用于治療血管疾病的中藥，可以通過減弱血管性癡呆大鼠模型中的MST1-FOXO3信號(hào)傳導(dǎo)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，如白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α等，保護(hù)海馬體，從而預(yù)防學(xué)習(xí)和記憶障礙〔51〕。

2.3MST1與神經(jīng)退行性疾病 MST1參與神經(jīng)退行性疾病，包括肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)和朊蛋白病。ALS是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病中最多見的類型，也稱為經(jīng)典型。ALS多在中年以后發(fā)病，其特征為運(yùn)動(dòng)皮層、腦干和脊髓中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的進(jìn)行性加重?fù)p害。銅(鋅)超氧化物歧化酶(SOD)-1基因，通常會(huì)引起運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元氧化損傷和細(xì)胞凋亡，是ALS最常見的發(fā)病機(jī)制〔52，53〕。有研究發(fā)現(xiàn)，MST1基因敲除可以延緩人SOD-1(G93A)基因突變導(dǎo)致的小鼠ALS的發(fā)生，改善其預(yù)后。硫氧化還原蛋白(Trx)1可以抑制MST1在氧化還原反應(yīng)誘導(dǎo)后產(chǎn)生的同二聚體和自身磷酸化，SOD-1(G93A)能逆轉(zhuǎn)這一過程，并且促進(jìn)了MST1的激活。此外，SOD-1(G93A)可誘導(dǎo)p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)和caspases通路活化，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞自噬發(fā)生異常，從而參與ALS的發(fā)病過程〔54〕。

朊蛋白病也是一種與MST1相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病，是一類由具有傳染性的朊蛋白(PrP)所致的人畜共患、中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性非炎癥性致死性疾病。PrP106-126或PrPsc模型是研究朊蛋白引起神經(jīng)退行性變的常用模型系統(tǒng)，系統(tǒng)表明氧化誘導(dǎo)是朊蛋白致病的主要原因〔55〕。PrP106-126激活c-Abl后上調(diào)MST1和促凋亡基因BIM，通過線粒體功能紊亂導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡〔56〕。鑒于MST1在多種細(xì)胞中發(fā)揮抑制自噬的功能，有望針對(duì) MST1靶點(diǎn)開發(fā)新藥，治療包括如腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病、腦血管疾病。但 MST1 可以抑制炎癥，炎癥是誘導(dǎo)動(dòng)腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等疾病的重要因素，因此，針對(duì) MST1進(jìn)行靶向治療時(shí)，需要考慮此靶向藥物是否可同期加重炎癥反應(yīng)，否則也可引發(fā)炎癥而促進(jìn)腦血管疾病和神經(jīng)退行性疾病發(fā)生發(fā)展。

3 展 望

Hippo信號(hào)通路是一條調(diào)節(jié)器官生長發(fā)育、調(diào)控細(xì)胞增殖凋亡的生長控制信號(hào)通路，MST激酶是該信號(hào)通路的重要組成部分。MST激酶的調(diào)控是復(fù)雜的，其在機(jī)體不同系統(tǒng)中均發(fā)揮重要作用。在神經(jīng)系統(tǒng)方面，MST1激酶參與了氧化應(yīng)激導(dǎo)致的CNS疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。增加對(duì)Hippo-MST1信號(hào)通路的研究和了解，包括MST1及其上下游因子在CNS中的病理生理學(xué)機(jī)制，將有助于相關(guān)腫瘤預(yù)后預(yù)測(cè)及尋找新的靶點(diǎn)用于治療，如將MST1作為靶點(diǎn)，研發(fā)的靶向藥物還需考慮是否同期加重炎癥反應(yīng)。