王鶴　李海勝　安婷婷

摘要 [目的]制定黃樟葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的顯微鑒別和薄層鑒別。[方法]通過(guò)顯微鑒別，對(duì)黃樟葉橫切面及其粉末進(jìn)行觀(guān)察，鑒別其組織或結(jié)構(gòu)特征等。對(duì)照藥材法進(jìn)行薄層鑒別，并進(jìn)行方法驗(yàn)證。[結(jié)果]顯微鏡所見(jiàn)細(xì)胞壁、葉肉柵欄組織、主脈維管束、薄壁細(xì)胞和油細(xì)胞。薄層色譜的展開(kāi)條件為乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5），點(diǎn)樣量為5 μL，置于365 nm處檢視。此薄層條件各斑點(diǎn)清晰，分離效果理想，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。[結(jié)論]顯微鑒別和薄層色譜鑒別均可列入黃樟葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 黃樟葉;顯微鑒別;薄層色譜鑒別

中圖分類(lèi)號(hào) R282.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2020）11-0182-04

Abstract [Objective] The research aimed to identify the microscopic identification and TLC of Cinnamomum porrectum leaves.[Method] Through microscopic identification， observed the cross section of Cinnamomum porrectum leaves and its powder to identify its tissue or structural characteristics.The thin layer identification was conducted against the medicinal material method， and the method was verified.[Result]Microscopic observed cell wall， mesophyll palisade tissue， main vein， vascular bundle， parenchyma cell and oil cell.The conditions for the development of TLC were ethyl acetatechloroformformic acid（5∶2∶0.5）， and the sample size was 5 μL， which was examined at 365 nm.This conditions had the advantages of clear spots， ideal separation effect， good repeatability and stability.[Conclusion]Microscopic identification and TLC can be used for the quality standard of Cinnamomum porrectum leaves.

Key words Cinnamomum porrectum leaves;Microscopic identification;TLC

黃樟Cinnamomum porrectum （Roxb.）Kosterm，又名南安、香喉、山椒等，分布于我國(guó)海南、廣東、廣西、福建、江西、湖南、貴州、四川、云南等地，以及巴基斯坦、印度經(jīng)馬來(lái)西亞至印度尼西亞等國(guó)家。黃樟性溫，味辛、微苦，歸肺、脾、肝經(jīng);具祛風(fēng)散寒、溫中止痛、行氣活血的功效，民間用于治療風(fēng)寒感冒、風(fēng)濕痹痛、胃寒腹瀉、泄瀉、痢疾、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)等癥[1]。黃樟葉為黃樟干燥葉，精油率比較高，一般為2%～5%[2-3]。目前《中國(guó)藥典》2015年版一部尚無(wú)黃樟葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此制定黃樟葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有利于醫(yī)藥部門(mén)對(duì)其質(zhì)量的監(jiān)控，確保用藥安全。筆者從黃樟葉的顯微鑒別、薄層色譜鑒別方面進(jìn)行研究，制定藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證藥材的質(zhì)量，保證其應(yīng)用安全有效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器。

中草藥粉碎機(jī)（FW100）;二號(hào)藥典篩（浙江上虞市英超儀器經(jīng)營(yíng)部）;四號(hào)藥典篩（浙江上虞市英超儀器經(jīng)營(yíng)部）;電子天平（島津AUW220D）;光電顯微鏡（50i尼康）;尼康相機(jī)（P7100）;水純化系統(tǒng)（Milli-Q Integral）;數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-4）;硅膠G板（規(guī)格：100 mm×200 mm，20150912）;薄層層析硅膠板si60（HC30863956）;薄層色譜展開(kāi)缸（規(guī)格：100 mm×200 mm）;三用紫外分析儀（WFH-203）。

1.1.2 試劑與藥材。

水合氯醛（批號(hào)30037517，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;甘油（批號(hào)0904102，汕頭市西隴化工廠(chǎng)有限公司）;醋酸（批號(hào)20131002-2，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;鹽酸（批號(hào)20140406-1，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;乙醇（95%）（批號(hào)20150601-2，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;無(wú)水乙醇（批號(hào)20151003-2，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;甲醇（批號(hào)150106 1，西隴化工股份有限公司）;乙酸乙酯（批號(hào)20150901-2，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;三氯甲烷（批號(hào)20130702-2，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）;甲酸（批號(hào)140919 2，西隴化工股份有限公司）;所有試劑均為分析純。黃樟葉對(duì)照藥材（自制）。

1.2 方法

1.2.1 黃樟葉顯微鑒別[2]。

1.2.1.1 橫切面制片。

取黃樟葉干燥藥材在水中浸軟，切片，滴加水合氯醛透化，再滴加幾滴甘油醋酸，蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)切片，對(duì)葉橫切面進(jìn)行顯微觀(guān)察、描述、拍照[4]。

1.2.1.2 粉末制片。

取少量黃樟葉粉末（過(guò)四號(hào)篩）于載玻片上，滴加2～3滴水合氯醛試液，在酒精燈上灼燒透化，重復(fù)滴加幾次試液使粉末充分透化。再滴加幾滴甘油醋酸，蓋上蓋玻片，濾紙擦去蓋玻片以外的殘液，再置于光電顯微鏡下觀(guān)察。

1.2.2 黃樟葉薄層鑒別。

1.2.2.1 薄層鑒別[5]。

精密稱(chēng)取黃樟葉粉末（過(guò)二號(hào)篩）2 g，加20 mL 60%乙醇，加熱回流1 h。過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⒁浦?0 mL容量瓶中，定容，作為供試品溶液。另取黃樟葉對(duì)照藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）2.0 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視[6-7]。

1.2.2.2 方法學(xué)驗(yàn)證。

按表1制備黃樟葉供試品溶液。

專(zhuān)屬性：分別取供試品溶液1、對(duì)照藥材溶液、甲醇各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視[8-10]。

最低檢出限：取供試品溶液1各1、2、4、6、8、10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

穩(wěn)定性：分別取對(duì)照藥材溶液、供試品溶液1、供試品溶液2、供試品溶液3各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

重復(fù)性：分別取供試品溶液1、對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。同一實(shí)驗(yàn)人員重復(fù)上述操作3次，不同實(shí)驗(yàn)人員重復(fù)上述操作2次。

耐用性1（不同提取方法）：取上述供試品溶液4～9、對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

耐用性2（不同展開(kāi)劑）：取供試品溶液1、對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將展開(kāi)劑的比例依次調(diào)節(jié)如下：乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（4∶2∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶1.6∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.4）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（6∶2∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2.4∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.6）。

耐用性3（不同廠(chǎng)家薄層板）：分別取供試品溶液1、對(duì)照品藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

耐用性4（溫濕度的影響）：分別取供試品溶液1、對(duì)照品藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開(kāi)劑，不同溫濕度（20 ℃，30%;25 ℃，50%;25 ℃，60%），取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯微鑒別結(jié)果

2.1.1 葉橫切面。

上下表皮各一列細(xì)胞（圖1），細(xì)胞壁明顯增厚，細(xì)胞內(nèi)含紅色或紅棕色油脂。葉肉柵欄組織為1列細(xì)胞，海綿組織排列疏松，細(xì)胞內(nèi)含黃色油脂。主脈維管束外韌型，呈凹槽狀，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)紅色油脂。

2.1.2 葉粉末。

粉末呈黃綠色，表皮細(xì)胞長(zhǎng)方形或類(lèi)長(zhǎng)方形，薄壁細(xì)胞中含黃色或黃棕色油脂，可見(jiàn)油細(xì)胞（圖2～3）。

2.2 薄層鑒別的試驗(yàn)結(jié)果

從圖4～11可以看出，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。在3種溫濕度條件下的薄層圖譜一致，即此薄層方法不受溫濕度影響。

3 結(jié)論與討論

該研究以黃樟葉為對(duì)象，顯微方法描述了油細(xì)胞、細(xì)胞壁等具有特征性。薄層鑒別的方法各點(diǎn)分離度好、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，不受溫濕度的限制，且簡(jiǎn)單易行、準(zhǔn)確可靠，為黃樟葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立打下基礎(chǔ)。

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