張欣舒，董金香，孫志遠(yuǎn)，賈艾玲，楊凈堯，田 健

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117）

甘草是豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)、脹果甘草(Glycyrrhiza InflataBat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabraL.)的干燥根及根莖[1]。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，有國(guó)老、甜草、靈通等別名[2-3]，味甘甜，性平和，入心、脾、肺、胃經(jīng)。生用偏涼[4]，可瀉火解毒、緩急止痛；炙用偏溫，能散表寒、補(bǔ)中益氣[5-6]。此外，甘草還善于調(diào)和藥性，解百藥之毒[7]。甘草是一種應(yīng)用歷史很久的傳統(tǒng)常用藥[8]，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、新疆等地，甘草多生長(zhǎng)在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶[9-10]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，甘草具有抗心律失常[11-12]、保肝、抗炎、抗菌、抗病毒、鎮(zhèn)咳、抗氧化、抗癌、免疫調(diào)解和降糖等多種活性[13]。

甘草的炮制從漢代至今多用炙法，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中提及：“采根暴干，十日成”，可視為甘草最原始的炮制方法?！独坠谥苏摗吩唬骸胺彩梗毴ヮ^、尾尖處。其頭、尾吐人[14]。凡修事，每斤皆長(zhǎng)三寸銼，劈破作六、七片，使瓷器中盛，用酒浸蒸，從巳至午，出，曝干，細(xì)銼。使一斤，用酥七兩涂上，炙酥盡為度。又，先炮令內(nèi)外赤黃用良。”不僅有酒蒸、酥炙等炮制方法，也提出了定時(shí)、定量的概念。唐宋時(shí)期在炮制甘草的方法中《日華子諸家本草》一書(shū)提倡：“人藥炙用”，《圖經(jīng)本草》提倡：“去蘆頭及赤皮，今云陰干用”，不僅提出“炙用”與“陰干用”的方法，同時(shí)書(shū)中還講到了去赤皮。明代《炮炙大法》曰；“甘草，須去頭，尾尖處，頭尾吐人。截作三寸長(zhǎng)，劈破作六七片，以瓷器盛之。用浸蒸從巳至午，出曝干；或用清水蘸炙；或切片用蜜水拌炒。如瀉火生用術(shù)、苦參、干漆為之使，惡遠(yuǎn)志，忌豬肉?！爆F(xiàn)代甘草炮制方法的應(yīng)用主要有生甘草、炒甘草、蜜炙甘草[15-16]。本文對(duì)甘草凈制、軟化、切制、干燥四個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)選。采用高效液相法（HPLC）對(duì)甘草中甘草苷、甘草酸進(jìn)行含量測(cè)定，優(yōu)選出甘草的最佳炮制工藝，為甘草的進(jìn)一步炮制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫）、EL-204 型電子分析天平（梅特勒-托利多）、分析天平TG328A（S）（上海精科）、電動(dòng)恒溫水?。ńK常熟）、QY-300 高速裁斷往復(fù)式切藥機(jī)（富陽(yáng)康華制藥機(jī)械）、H4500 水冷磨刀機(jī)（青島信民電動(dòng)工具）。

1.2 試藥 甘草（GJ008-181203-01，吉林省北藥藥材加工）、甘草苷對(duì)照品（CAS：551-15-5）、甘草酸銨對(duì)照品（CAS：1405-86-3）對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院、實(shí)驗(yàn)所用到的液體試劑中，除色譜甲醇和色譜乙腈外均為分析純。

2 方法與結(jié)果

甘草炮制工藝研究過(guò)程中，除了從化學(xué)成分，藥理作用指標(biāo)方面考慮外，環(huán)保、工藝經(jīng)濟(jì)問(wèn)題也應(yīng)該作為綜合考慮的指標(biāo)。最終采用甘草中有效成分甘草苷及甘草酸為指標(biāo)，對(duì)凈制、軟化、切制、干燥溫度四個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)選[17-19]。

2.1 含量測(cè)定 采用2015 版《中國(guó)藥典》中甘草項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定。

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（4.6 mm×250 mm，5-Micron）；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.05%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表1 中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

采用高效液相色譜法測(cè)定甘草中甘草苷、甘草酸成分含量。流動(dòng)相A 選用乙腈，流動(dòng)相B 選用0.05%磷酸水溶液，按照下方所列表格中的規(guī)定數(shù)值進(jìn)行梯度洗脫；設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，進(jìn)樣量10 μL。

表1 甘草含量測(cè)定洗脫條件

2.1.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液制備：取甘草苷、甘草酸對(duì)照品，準(zhǔn)確稱(chēng)量，加入70%乙醇分別制備成1 mL 溶液中含有甘草苷20 μg、甘草酸0.2 mg，即得。供試品溶液制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取甘草粉末（過(guò)3 號(hào)篩）約為0.2 g，置錐形瓶中，量取70%乙醇100 mL 加入到錐形瓶中，密塞，稱(chēng)定重量后超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，取出冷卻至室溫，再稱(chēng)定一次重量，然后用70%乙醇補(bǔ)重，振蕩搖勻，過(guò)濾，即得。

2.1.3 測(cè)定 分別精密吸取10 μL 的對(duì)照品溶液、供試品溶液，注入HPLC 中進(jìn)行測(cè)定，即得。見(jiàn)圖1。

2.2 甘草炮制工藝

2.2.1 甘草的凈制 將甘草置于挑選臺(tái)，除去雜質(zhì)、灰屑及非藥用部分，將外皮損傷嚴(yán)重者用剪刀剪去其破損部位，用刀切去甘草的須根和非藥用部位和爛心部位，搶水洗凈[20-21]。傳統(tǒng)加工方法中有除掉甘草外皮者，并且將除掉外皮的甘草稱(chēng)為粉甘草。說(shuō)明甘草在應(yīng)用的過(guò)程中存在除掉外皮后使用的歷史。但是，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有銷(xiāo)售的甘草飲片，一般都沒(méi)有去除栓皮的甘草。雖然醫(yī)生在開(kāi)具的處方中也會(huì)提及甘草、粉甘草，但是藥房付藥時(shí)也均會(huì)付給生甘草。因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)甘草的凈制過(guò)程中的甘草外皮（栓皮）去皮與不去皮進(jìn)行了考察，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果顯示，甘草在凈制過(guò)程中，去除栓皮會(huì)使甘草中總有效成分甘草酸及甘草苷含量下降。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果可確定甘草在凈制時(shí)不去除栓皮。

2.2.2 甘草的軟化 甘草洗凈后，置于自封袋中，在常溫下將水加入噴壺中，均勻噴在甘草表面，密封自封袋，置于鐵盤(pán)中，放入烘箱中進(jìn)行悶潤(rùn)；若干小時(shí)后用彎曲法檢驗(yàn)，甘草彎曲90°不折斷，內(nèi)外濕度一致；將潤(rùn)后的甘草稱(chēng)重，記錄甘草潤(rùn)后重量。

軟化方法的考察：《中國(guó)藥典》記載甘草軟化方法為潤(rùn)透，內(nèi)外濕度一致，軟硬適度，便于切制。傳統(tǒng)軟化方法有蒸汽潤(rùn)與悶潤(rùn)，此實(shí)驗(yàn)甘草軟化方法是根據(jù)藥材形狀（彎曲法—彎而不折）以及切片后飲片性狀為依據(jù)，對(duì)甘草悶潤(rùn)與蒸汽潤(rùn)進(jìn)行考察。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

含量測(cè)定結(jié)果顯示，經(jīng)悶潤(rùn)法軟化處理的甘草中有效成分含量較蒸汽潤(rùn)高，由于蒸汽潤(rùn)溫度過(guò)高，致使甘草中有效成分流失多。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果可確定甘草的軟化方法為悶潤(rùn)。

悶潤(rùn)溫度的考察：甘草軟化方法確定為悶潤(rùn)，但在室溫下進(jìn)行悶潤(rùn)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，

圖1 甘草HPLC 色譜圖

表2 甘草去皮與不去皮含量考察結(jié)果 %

表3 甘草悶潤(rùn)與蒸汽潤(rùn)含量考察結(jié)果 %

因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合甘草軟化后含量以及生產(chǎn)工藝等因素對(duì)悶潤(rùn)時(shí)的溫度（常溫、40 ℃、50 ℃、60 ℃）進(jìn)行考察，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 甘草悶潤(rùn)時(shí)不同溫度含量考察結(jié)果 %

結(jié)果顯示甘草在60 ℃條件進(jìn)行悶潤(rùn)軟化處理，甘草中有效成分損失最少。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果可確定甘草的悶潤(rùn)溫度是60 ℃。

2.2.3 甘草的切制 取潤(rùn)好的甘草，晾至表面干爽，擠壓不出水，以減少連刀現(xiàn)象。采用高速裁斷往復(fù)式切藥機(jī)對(duì)甘草進(jìn)行切片。切片時(shí)，將甘草擺放在履帶上，擺放時(shí)調(diào)整好甘草之間的距離，厚度為2～4 mm，在切片過(guò)程中務(wù)必將甘草固定，避免轉(zhuǎn)動(dòng)。

2.2.4 甘草的干燥 取切好的甘草飲片鋪料，厚度約30 mm，在常溫下晾干或放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，在不同溫度下進(jìn)行干燥，將干燥后的甘草裝入自封袋稱(chēng)重。在最低限度影響甘草有效成分的情況下對(duì)甘草的最佳干燥溫度進(jìn)行考察，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 甘草不同干燥溫度含量考察結(jié)果 %

結(jié)果顯示，甘草在70 ℃條件下置于電熱鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行干燥時(shí)，甘草飲片中甘草有效成分最高。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果可確定甘草的干燥溫度是70 ℃。

3 結(jié)語(yǔ)

根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)得到，凈制要除去雜質(zhì)以及非藥用部位，在凈制時(shí)不去除栓皮的甘草含有甘草酸及甘草苷成分較高，在軟化時(shí)，要注意用水量，軟化到可以彎曲且不被折斷。在切制過(guò)程中，需要做到藥透水盡；在干燥過(guò)程，需要適宜的溫度。通過(guò)采用高效液相色譜法對(duì)甘草炮制后的樣品中的甘草苷及甘草酸進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)考察結(jié)果，最終確定甘草的最佳炮制工藝，甘草的軟化方法為悶潤(rùn)，悶潤(rùn)溫度為60 ℃，不去皮，切制后飲片在70 ℃條件下干燥。

本實(shí)驗(yàn)主要研究甘草炮制工藝，通過(guò)對(duì)甘草藥材炮制工藝的優(yōu)選，甘草在凈制、軟化、切制、炒制工藝更加簡(jiǎn)便、合理，可以有效大量提取出有效成分，提高甘草在臨床應(yīng)用中的療效。