丁云錄，李馳坤，歐喜燕，李曉兵，成光宇，連樹林

（長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，長春 130021）

清肝降濁顆粒為國家名老中醫(yī)劉鐵軍教授經(jīng)驗方研制而得現(xiàn)代中藥制劑，對防治高脂血脂、脂肪肝及肝損傷有確切療效，本實驗研究清肝降濁顆粒對T2DM 合并NAFLD 大鼠模型脂代謝相關炎癥因子、內(nèi)皮功能等指標的影響，探討其治療非酒精性脂肪肝的作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 SPF 級SD 大鼠，8 周齡，雄性。飼養(yǎng)環(huán)境，室溫（21±2）℃，相對濕度45%～65%，通風良好，室內(nèi)12 h 明暗自動切換。動物購入后，分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。動物合格證號：SCXK-（吉）2018-0007，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。清肝降濁顆粒，以黃芪、五味子、刺五加、決明子、陳皮、竹茹等為處方，采用水煎煮的方法進行提取、濃縮制成顆粒，性狀：深褐色顆粒，批號：20181015，由長春中醫(yī)藥大學實驗研究中心提供。鏈脲佐菌素（STM），規(guī)格：每瓶500 mg，批號：WXBB6772V，美國Sigma 公司產(chǎn)品。血脂康膠囊，規(guī)格：0.3 g×12 粒/盒，批號：20180713，國藥準字Z10950029，北京北大維信生物科技有限公司產(chǎn)品。膽酸鈉（豬），規(guī)格：每瓶500 g，批號：K01N8B47111,上海源葉生物科技有限公司。膽固醇（飼料級），規(guī)格：每瓶500 g，批號：LOT5AF10250，北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司?？偰懝檀迹═C）檢測試劑盒，規(guī)格：10 mL×10 支，批號：190421，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。三酰甘油（TG） 檢測試劑盒，規(guī)格：10 mL×10 支，批號：190517，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）檢測試劑盒，規(guī)格：10 mL×10 支，批號：190413，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。游離脂肪酸（FFAs）測試盒，規(guī)格：100 T/盒，批號：20190528,南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。超敏C-反應蛋白（hs-CRP）試劑盒，規(guī)格：96 T/盒，批號：20190301A，白細胞介素-6（IL-6）試劑盒，規(guī)格：96 T/盒，批號：20190301A，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒，規(guī)格：96 T/盒，批號：20190301A，血內(nèi)皮素（ET-1）試劑盒，規(guī)格：96 T/盒，批號：20190301A，均購自美國RD 公司。酶標儀，型號：BIO680，Japan BIO RAD 公司；全自動分析儀，型號：selectra junior，荷蘭威圖公司；血糖儀，型號：HEA-232，達爾泰（天津）實業(yè)有限公司；高速冷凍離心機，型號：Biofuge Stratos，德國賀利氏公司；電熱恒溫水浴鍋，型號：HH·SY21-Ni，北京長源試驗設備廠。

1.2 方法[1-5]

1.2.1 動物造模與分組 SPF 級健康雄性8 周齡SD 大鼠，體質(zhì)量（220±10）g，60 只，雄性，購入后，分籠飼養(yǎng)，使其適應環(huán)境1 周。隨機分為：正常對照組，高脂模型組，陽性對照藥血脂康膠囊400 mg/kg組，清肝降濁顆粒設800、400、200 mg/kg 3 個給藥劑量組。共6組，每組10 只。參照文獻，高脂飼料配制方法如下：膽固醇2.5%，膽酸鈉0.5%，蔗糖5%，豬油10%，基礎飼料82%。第1組動物飼以常規(guī)飼料，作為正常對照；2～6組動物均飼以高脂飼料。4 周后2～6組以30 mg/kg 劑量給予腹腔一次性注射STZ，用來破壞部分胰島造模；正常對照組腹腔注射相應體積的生理鹽水。建立糖尿病脂肪肝動物模型，檢測血糖，當連續(xù)2 次以上出現(xiàn)FBG ≥7.8 mmol/L，并伴有胰島素抵抗，視為成功建立了T2DM 模型。試驗期間每周稱量動物體質(zhì)量1 次，以調(diào)整給藥劑量。給藥周期為8 周。

1.2.2 標本采集及指標檢測 大鼠空腹血糖（FBG）水平、血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和游離脂肪酸（FFAs）、白細胞介素-6（IL-6）、超敏C-反應蛋白（hs-CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、血內(nèi)皮素（ET-1）。

2 結果

2.1 對糖尿病脂肪肝大鼠血清炎癥細胞因子TNF-α、IL-6 的影響 見表1。

2.2 對糖尿病脂肪肝大鼠血糖、血脂的影響 見表2。

2.3 對糖尿病脂肪肝大鼠血清FFA、hs-CRP 及ET-1的影響 見表3。

表1 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清TNF-α、IL-6 及血糖的影響（，n =10）

表1 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清TNF-α、IL-6 及血糖的影響（，n =10）

注：與模型對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表2 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C 的影響（，n =10）

表2 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C 的影響（，n =10）

注：與模型對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表3 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清FFA、hs-CRP 及ET-1 的影響（，n =10）

表3 清肝降濁顆粒對糖尿病脂肪肝大鼠血清FFA、hs-CRP 及ET-1 的影響（，n =10）

注：與模型對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

3 討論

非酒精性脂肪肝?。╪onalcoholic fatty liver disease,NAFLD）在2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）人群中廣泛流行，胰島素抵抗架起了T2DM和非酒精性脂肪肝病間相互聯(lián)系的病生理橋梁。2 型糖尿病伴有非酒精性脂肪肝病，促使患者病情加重和死亡風險增加，防治T2DM 患者非酒精性脂肪肝病為重中之重[6-8]。非酒精性脂肪肝病是2 型糖尿病較常見的并發(fā)癥之一，近年 T2DM 與非酒精性脂肪肝病患病率急速上升，已嚴重影響人類的健康，二者間的密切關系的研究也得到更多的重視[9-10]。

研究[11-13]認為，機體多因素引起的IR 是脂質(zhì)（游離脂肪酸和三酰甘油）在肝細胞過量蓄積的主要誘因，增加機體對內(nèi)源性損傷因子的敏感性，使肝細胞發(fā)生脂肪變性，進而造成非酒精性脂肪肝病的“第一次打擊”；“第二次打擊”即被活化的內(nèi)源性損傷因子通過氧化應激和脂質(zhì)過氧化反應進一步加劇肝細胞損傷，進而使肝臟發(fā)生炎性反應、纖維化或壞死。FFA 使TG 合成增加，TG 在肝細胞內(nèi)沉積,導致肝臟發(fā)生脂肪變性；同時還對肝細胞產(chǎn)生直接的毒性作用，引起肝細胞損傷。2 型糖尿病是一種遺傳和環(huán)境因素共同作用而形成的多基因遺傳性復雜疾病，與胰島素抵抗、肥胖、脂代謝紊亂、炎癥等因素有關。而非酒精性脂肪肝病的發(fā)生和肥胖、脂質(zhì)代謝紊亂、胰島素抵抗密切相關，肥胖、脂質(zhì)代謝紊亂導致胰島素過多，引起胰島素抵抗。非酒精性脂肪肝病常伴隨腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生，繼而腸源性內(nèi)毒素血癥激活NF-κB 信號傳導系統(tǒng)，刺激炎癥指標CRP 的產(chǎn)生，同時引起胰島素抵抗[14-15]。增加的TNF-α 可使NO 產(chǎn)生下降，而胰島素抵抗可增強內(nèi)皮細胞產(chǎn)生和釋放ET-1，ET-1與NO 的比例失衡，最終引起血管內(nèi)皮功能障礙而促使動脈粥樣硬化發(fā)生[16-17]。

2 型糖尿病伴有非酒精性脂肪肝患者易致濕熱阻滯中焦，水谷無法正?；癁榫?，反而生成痰濁膏脂，阻塞氣機，影響氣血運行，蘊而化熱，導致氣、血、痰、濁相結聚于肝膽，發(fā)而為病[18-20]。清肝降濁顆粒以中醫(yī)理論為指導，以臨床實踐為基礎，以現(xiàn)代科學研究為依據(jù)，以益氣活血，化瘀通絡為治則，用于脂肪肝（氣虛血瘀）的治療。主癥：乏力，活動后尤甚，脅肋刺痛。次癥：腹脹，食少納呆，噯氣，舌質(zhì)淡邊有瘀點，苔薄白，脈細弦或細澀。處方合理，藥味精練，藥效學物質(zhì)基礎清楚，作用機理明確，治療依據(jù)充分。在本實驗中，應用T2DM 合并非酒精性脂肪肝病大鼠動物模型，給予大鼠清肝降濁顆粒800、400、200 mg/kg，3 個給藥劑量混懸液灌胃8 周，血脂水平降低；異常升高的TNF-α、IL-6、FFAs、hs-CRP、ET-1 水平顯著降低。表明清肝降濁顆?？筛纳浦|(zhì)代謝及脂代謝相關炎癥因子及內(nèi)皮功能，對肝細胞具有良好的保護作用，從而減緩大鼠2 型糖尿病非酒精性脂肪肝的病變。對清肝降濁顆粒的開發(fā)進一步提供實驗室依據(jù)，有助于更新非酒精性脂肪肝的治療理念，對非酒精性脂肪肝的防治有積極的影響。