帖 余,肖宇婷,劉 軍,李 麗,*,王景峰,王國(guó)強(qiáng),趙琦鍇

(1.四川輕化工大學(xué)生物工程學(xué)院,四川自貢 643000; 2.樂(lè)山恒峰華邦生物科技有限公司,四川樂(lè)山 614000)

菜籽粕是菜籽經(jīng)榨油后的副產(chǎn)物,其粗蛋白含量為35%～42%,碳水化合物含量為20%～25%,粗纖維含量為12%～13%,且氨基酸組成平衡,是一種優(yōu)質(zhì)的植物蛋白資源[1],近年來(lái)常被作于制備多肽及作為動(dòng)物日糧[2-3]。由于其中含有硫苷、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子,限制了其在食品、動(dòng)物日糧中的應(yīng)用價(jià)值[4-5]。為提高菜籽粕應(yīng)用價(jià)值,國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)其抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解進(jìn)行了大量研究,如物理法、化學(xué)法、酶法、微生物發(fā)酵法等[6-7]。因微生物發(fā)酵法相比于物理、化學(xué)、酶法具有成本低、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失少、發(fā)酵降解抗?fàn)I養(yǎng)因子的同時(shí)能提高蛋白營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛關(guān)注。近年來(lái),大量研究中常用到乳酸菌、曲霉、枯草芽孢桿菌等進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵降解菜籽粕抗?fàn)I養(yǎng)提高小肽含量[8-9]。吳正可等[10]通過(guò)嗜酸乳桿菌發(fā)酵菜籽粕后,將總酸從1.01%提高至3.10%,硫苷從37.48 μmol/g降至28.60 μmol/g,有效改善了其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。Shi等[11]研究結(jié)果表明通過(guò)黑曲霉發(fā)酵菜籽粕72 h后,將菜籽粕中硫苷從41.91 μmol/g降低至23.86 μmol/g,小肽含量從2.57%提高至8.39%,但并不能提高酸度改善風(fēng)味。

雖然將乳酸菌應(yīng)用于菜籽粕發(fā)酵能提高菜籽粕總酸含量和改善其風(fēng)味,但對(duì)于降解硫苷、大分子蛋白的能力有限。鑒于黑曲霉在發(fā)酵的過(guò)程中能產(chǎn)生多種酶系,對(duì)降解抗?fàn)I養(yǎng)因子及分解大分子蛋白效果顯著。因此,在本研究中,將乳酸菌和黑曲霉混菌發(fā)酵同時(shí)結(jié)合兩步法進(jìn)一步降解菜籽粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子和分解大分子蛋白[12],以達(dá)到改善菜籽粕營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的目的,擴(kuò)大菜籽粕的應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黑曲霉 中國(guó)工業(yè)菌種保藏中心(CICC);乳桿菌 泡菜水中分離;泡菜水 三種市售泡菜水;菜籽粕、麩皮 樂(lè)山恒峰華邦科技有限公司;LBS培養(yǎng)基 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;過(guò)氧化氫酶試劑盒 上海源葉生物科技有限公司;細(xì)菌DNA提取試劑盒 杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純 成都市科隆化學(xué)品有限公司。

SW-CJ-2D雙人單面凈化工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司;K9840自動(dòng)凱氏定氮儀 山東海能科學(xué)儀器有限公司;AT-710電位自動(dòng)滴定計(jì) Kyoto Electronics MFG公司;BCD-571WDPF冰箱 海爾集團(tuán)電器產(chǎn)業(yè)有限公司;T-114型分析天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;T6紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司;QYC-2102C型恒溫培養(yǎng)搖床 上海福馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;MF80BSH-2型霉菌培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;LS-75HD立式高壓蒸汽滅菌器 江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配置 MRS液體培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母粉5 g,葡萄糖5 g,乙酸鈉5 g,檸檬酸二銨2 g,Tween-80 1 g,K2HPO42 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,MnSO4·H2O 0.05 g,去離子水1.0 L,pH6.8,121 ℃滅菌15 min。

MRS瓊脂培養(yǎng)基:同MRS液體培養(yǎng)基,向其中添加20 g瓊脂,121 ℃滅菌15 min。

黑曲霉菌麩皮種子培養(yǎng)基:麩皮∶水=2∶1 (W/V),混勻后取30 g裝入500 mL 三角瓶,121 ℃滅菌15 min。

菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基:菜籽粕∶麩皮=72∶28 (W/W),添加含0.12%吐溫溶液,使其水分含量為58%(W/W),混勻后取 60 g 裝入500 mL三角瓶,121 ℃滅菌15 min。

1.2.2 高產(chǎn)酸乳桿菌分離篩選 初篩:將泡菜水中分離得到的76株乳桿菌分別于LBS培養(yǎng)基劃線,并于37 ℃培養(yǎng)3 d,挑取生長(zhǎng)快,單菌落為灰白色,直徑在0.5～0.25 mm的菌株進(jìn)行過(guò)氧化氫酶接觸試驗(yàn),對(duì)酶接觸試驗(yàn)呈陰性的菌株進(jìn)行復(fù)篩。

復(fù)篩:將初篩獲得的菌株接種于MRS培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)18 h。培養(yǎng)后,按1%接種量接種于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基,混勻,裝入自封袋并排出空氣,37 ℃厭氧發(fā)酵24 h,發(fā)酵結(jié)束后測(cè)定總酸,選擇發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸優(yōu)勢(shì)乳桿菌,以接種無(wú)菌MRS培養(yǎng)基替代乳桿菌種子液做空白對(duì)照。

1.2.3 菌株鑒定 通過(guò)細(xì)菌DNA提取試劑盒法提取優(yōu)勢(shì)菌株基因組后,用細(xì)菌16S rDNA通用引物27f(5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′)和1492r(5′-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為:預(yù)變性:98 ℃,5 min;變性:98 ℃,10 s;退火:55 ℃,15 s,延伸:72 ℃,20 s;循環(huán)數(shù):35;終延伸:72 ℃,5 min。將PCR擴(kuò)展產(chǎn)物送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序序列與GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST同源性對(duì)比分析,運(yùn)用Mega 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,確定所選菌株種屬。

1.2.4 菌株生長(zhǎng)曲線 將保藏于斜面的乳桿菌接種于MRS液體培養(yǎng)基中并于37 ℃培養(yǎng)12 h后,按1%接種量(V/V)接種于250 mL MRS培養(yǎng)基中,37 ℃靜置培養(yǎng)36 h,每隔3 h取樣1次,于600 nm 處測(cè)定OD值,確定菌體濃度。

1.2.5 乳桿菌發(fā)酵溫度對(duì)產(chǎn)酸的影響 將篩選得到的乳桿菌按1.2.2中復(fù)篩的方法接種發(fā)酵菜籽粕,探討不同發(fā)酵溫度(35、36、37、38、39、40、41、42和43 ℃)對(duì)乳桿菌發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的影響。

1.2.6 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的影響 黑曲霉麩曲種子:將斜面保藏的黑曲霉用接種環(huán)勾取3環(huán)接種于種子培養(yǎng)基中,30 ℃恒溫培養(yǎng)72 h;乳桿菌發(fā)酵種子液:將復(fù)篩的乳桿菌按1%接種量(V/V)接種于MRS液體培養(yǎng)基中,于37 ℃下,按1.2.4中確定的最佳培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)。

兩步法—發(fā)酵:將黑曲霉麩曲種子按3%(W/W)接種量接種于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基中,混勻,28 ℃發(fā)酵48 h;發(fā)酵結(jié)束后,將發(fā)酵后的菜籽粕裝入自封袋中,按1%接種量(V/W)接種乳桿菌種子液,混勻并排出自封袋空氣后于1.2.5中確定的最佳溫度下發(fā)酵,于不同發(fā)酵時(shí)間下測(cè)得總酸和還原糖含量。

兩步法—酶解:操作與兩步法步驟相同,僅用接種無(wú)菌水替換接種乳桿菌,于1.2.5中確定的最佳溫度下對(duì)發(fā)酵菜籽粕進(jìn)行酶解處理,于不同酶解時(shí)間下測(cè)定總酸和還原糖含量。

乳桿菌發(fā)酵:于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基中接種1%接種乳桿菌種子液(V/W)并于1.2.5中確定的最佳溫度下進(jìn)行發(fā)酵,于不同發(fā)酵時(shí)間下測(cè)定總酸含量。

空白對(duì)照:以未接種黑曲霉和乳桿菌進(jìn)行兩步法處理或未接種乳桿菌、黑曲霉進(jìn)行單菌發(fā)酵的菜籽粕為空白對(duì)照。

1.2.7 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)發(fā)酵菜籽粕過(guò)程中硫苷、酸溶蛋白、氨基酸態(tài)氮含量變化 按1.2.6中兩步發(fā)酵方式對(duì)菜籽粕進(jìn)行發(fā)酵,測(cè)定發(fā)酵過(guò)程中硫苷、酸溶蛋白、氨基酸態(tài)氮含量變化,同時(shí)對(duì)酶解過(guò)程中硫苷含量進(jìn)行測(cè)定,確定兩步發(fā)酵對(duì)硫苷降解的影響。

1.2.8 指標(biāo)的測(cè)定 總酸:根據(jù)GB/T 12456-2008[13]測(cè)定,結(jié)果以乳酸計(jì)。還原糖:參考文獻(xiàn)[14]采用DNS法測(cè)定。酸溶蛋白:參考GB/T 22492-2008[15]測(cè)定。氨基酸態(tài)氮:根據(jù)GB 5009.235-2016[16]測(cè)定。硫苷:根據(jù)文獻(xiàn)[17]方法測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

每次試驗(yàn)設(shè)置三個(gè)平行,試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示,使用SPSS 22.0進(jìn)行單因素方差分析,并采用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較,以P<0.05作為差異性顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 高產(chǎn)酸的乳桿菌初篩與復(fù)篩

通過(guò)LBS乳桿菌選擇培養(yǎng)基篩選出了34株長(zhǎng)勢(shì)良好且過(guò)氧化氫酶接觸試驗(yàn)呈陰性的菌株。通過(guò)固態(tài)發(fā)酵菜籽粕試驗(yàn)對(duì)34株菌進(jìn)行復(fù)篩,結(jié)果如圖1所示。

圖1 發(fā)酵菜籽粕高產(chǎn)有機(jī)酸菌株篩選Fig.1 Screening of strains producing high organicacid during fermentation of rapeseed meal注:*表明實(shí)驗(yàn)組與空白組具有顯著差異(P<0.05);菌株編號(hào)以a,b,c開頭表明篩選自三種不同類型的泡菜水。

結(jié)果表明,相比于未添加乳桿菌發(fā)酵的空白對(duì)照,除a1和a3外,其他32株乳桿菌產(chǎn)酸能力都較好,總酸含量顯著提高(P<0.05)。分別經(jīng)a2,a11,c5,c10,c11,c13發(fā)酵菜籽粕后,總酸含量均從0.31%提高至1%以上,尤其經(jīng)c10發(fā)酵后,總酸含量最高,達(dá)到1.24%,與空白相比提高了300%。說(shuō)明乳桿菌c10在菜籽粕中生長(zhǎng)良好,且能利用菜籽粕中多種糖類發(fā)酵并產(chǎn)生大量酸性物質(zhì),使得總酸含量大幅提高,因此選擇c10用于后續(xù)研究。

2.2 乳桿菌菌株鑒定

通過(guò)PCR對(duì)c10基因組中16S rDNA 擴(kuò)增后送至擎科生物有限公司測(cè)序,將測(cè)序所得序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中已收錄DNA序列進(jìn)行BLAST對(duì)比,并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖2)。結(jié)果表明,c10為乳桿菌屬(Lactobacillus),與類食品乳桿菌(LactobacillusparalimentariusDSM 13238)的相似性達(dá)99.37%,因此確定c10為類食品乳桿菌。

圖2 菌株c10系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Phylogenetic tree of c10 strain

2.3 乳桿菌生長(zhǎng)曲線

圖3為類食品乳桿菌生長(zhǎng)曲線。結(jié)果表明,0～3 h為生長(zhǎng)延滯期,3 h后,進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,菌體濃度迅速增加。到12 h后,可能進(jìn)入對(duì)數(shù)末期,菌體濃度緩慢增加。為保證接種的乳桿菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,在后續(xù)試驗(yàn)中,均選擇培養(yǎng)12 h的處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種活化液作為發(fā)酵菜籽粕種子液。

圖3 類食品乳桿菌生長(zhǎng)曲線Fig.3 The growth curve of Lactobacillus paralimentarius

2.4 溫度對(duì)類食品乳桿菌發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的影響

圖4為類食品乳桿菌于不同溫度下發(fā)酵24 h后菜籽粕中總酸含量變化情況。結(jié)果表明,37～40 ℃為發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的最佳溫度,當(dāng)發(fā)酵溫度低于37 ℃或高于40 ℃時(shí),總酸含量顯著降低(P<0.05)?？赡苡捎跍囟冗^(guò)低或過(guò)高,乳桿菌生長(zhǎng)代謝、胞內(nèi)外酶活性受到抑制,從而影響產(chǎn)酸的相關(guān)代謝途徑,導(dǎo)致發(fā)酵后菜籽粕中總酸含量較低[18]。

圖4 溫度對(duì)類食品乳桿菌發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的影響Fig.4 Effect of temperature on acid production duringfermentation of rapeseed meal by Lactobacillus paralimentarius注:不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),圖5同。

由于黑曲霉在發(fā)酵菜籽粕過(guò)程中能產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶等,發(fā)酵結(jié)束后進(jìn)一步提高溫度進(jìn)行酶解,可將菜籽粕中大分子營(yíng)養(yǎng)物降解為小分子營(yíng)養(yǎng)物。因此在第二步厭氧發(fā)酵(乳桿菌發(fā)酵)過(guò)程中,適當(dāng)提高環(huán)境溫度將有利于提高蛋白酶、纖維素酶活性,為乳桿菌提供大量可發(fā)酵碳氮源,促進(jìn)乳桿菌發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸,同時(shí)利于蛋白酶將菜籽粕中大分子蛋白分解為小肽。由于39 ℃利于乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)酸,且與蛋白酶作用溫度接近,因此將39 ℃作為第二步乳桿菌發(fā)酵溫度。

2.5 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)發(fā)酵菜籽粕總酸含量的影響

如圖5A所示,經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后,總酸含量從0.37%提高至1.05%。由于黑曲霉可利用多種碳源發(fā)酵產(chǎn)生檸檬酸等有機(jī)酸[19-20],因此,在第一步黑曲霉有氧發(fā)酵中,菜籽粕中部分糖類被黑曲霉轉(zhuǎn)化為有機(jī)酸,使得發(fā)酵后菜籽粕總酸含量提高。將黑曲霉發(fā)酵后的菜籽粕接種類食品乳桿菌進(jìn)行厭氧發(fā)酵后,總酸含量進(jìn)一步提高。厭氧發(fā)酵至3 h時(shí),總酸含量變化較小,發(fā)酵3 h后,總酸含量被顯著提高,當(dāng)發(fā)酵至12 h后,總酸含量無(wú)顯著變化(P<0.05)。當(dāng)兩步法發(fā)酵至12 h時(shí),總酸含量達(dá)到2.74%,與黑曲霉單菌發(fā)酵和空白對(duì)照比較可知,其總酸含量分別提高160.95%和640.54%。將黑曲霉發(fā)酵后的菜籽粕進(jìn)行酶解后,總酸含量無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明在酶解過(guò)程中,黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)生的酶不影響總酸含量,且在第二步乳桿菌厭氧發(fā)酵過(guò)程中,總酸含量的變化主要由乳桿菌發(fā)酵糖類產(chǎn)生有機(jī)酸引起。

圖5B為兩步法過(guò)程中的還原糖含量的變化情況。結(jié)果表明,發(fā)酵菜籽粕于39 ℃下進(jìn)行酶解后,還原糖含量明顯增加。當(dāng)酶解至12 h時(shí),菜籽粕中還原糖含量達(dá)到30.09 mg/g,相比于黑曲霉有氧發(fā)酵結(jié)束后,還原糖含量提高了272.86%,延長(zhǎng)酶解時(shí)間,還原糖含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。當(dāng)菜籽粕經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后,仍有大量多糖未被降解,這些物質(zhì)在酶解階段能被黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)生的多糖水解酶水解,因此使得菜籽粕中還原糖含量明顯增加。當(dāng)接種類食品乳桿菌進(jìn)行厭氧發(fā)酵至12 h后,還原糖含量為17.94 mg/g,相比39 ℃酶解12 h,還原糖含量下降了40.38%。在添加乳桿菌進(jìn)行厭氧發(fā)酵過(guò)程中,酶將多糖分解為還原糖的同時(shí),乳桿菌利用這些還原糖發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)酸,因此相比酶解菜籽粕中,還原糖含量大幅下降,并且總酸含量明顯提高。

如圖5C所示,經(jīng)類食品乳桿菌單獨(dú)發(fā)酵菜籽粕24 h,總酸含量提高至1.29%,延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間,總酸含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。兩步法縮短了乳桿菌發(fā)酵菜籽粕達(dá)到最大產(chǎn)酸量的時(shí)間,且相比類食品乳桿菌單獨(dú)發(fā)酵菜籽粕總酸含量提高了112.40%。可能的原因是,在兩步發(fā)酵過(guò)程中,多種酶將菜籽粕中多種大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì),乳桿菌可利用的小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷增多,加快了其生長(zhǎng)代謝速率,因此縮短了產(chǎn)酸時(shí)間,同時(shí)在此過(guò)程中還原糖含量不斷增加,經(jīng)乳桿菌發(fā)酵后,總酸含量進(jìn)一步提高。

圖5 發(fā)酵方式對(duì)菜籽粕總酸及還原糖含量的影響Fig.5 Effect of fermentation mode on total acidand reducing sugar content of rapeseed meal

2.6 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)硫苷含量的影響

黑曲霉在發(fā)酵48 h后進(jìn)入酶解階段,結(jié)果如表1所示,將黑曲霉發(fā)酵后的菜籽粕于39 ℃酶解后,硫苷含量明顯降低,經(jīng)酶解12 h后,硫苷含量降低為13.29 μmol/g,隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),其含量無(wú)顯著變化(P>0.05)。此結(jié)果與黑曲霉一步發(fā)酵后接種乳桿菌于39 ℃發(fā)酵12 h后的硫苷含量無(wú)顯著差異(P>0.05),表明類食品乳桿菌在第二步厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸過(guò)程中的相關(guān)代謝活動(dòng)不會(huì)對(duì)黑曲霉分泌的相關(guān)酶系分解硫苷產(chǎn)生影響。當(dāng)兩步發(fā)酵菜籽粕至12 h后,硫苷、總酸含量均無(wú)顯著變化(P>0.05),因此在后續(xù)試驗(yàn)中僅關(guān)注兩步發(fā)酵12 h后菜籽粕中酸溶蛋白及氨基酸態(tài)氮含量變化,確定兩步發(fā)酵的最佳發(fā)酵時(shí)間。

表1 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)硫苷含量的影響Table 1 Effect of mixed fermentation with two-step method on glucosinolates content

2.7 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)酸溶蛋白和氨基酸態(tài)氮含量的影響

表2為混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)酸溶蛋白和氨基酸態(tài)氮含量的影響。結(jié)果2.5表明,經(jīng)兩步發(fā)酵12 h后,總酸含量不再隨發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)而變化,但酸溶蛋白、氨基酸態(tài)氮含量均隨發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)而增加。當(dāng)發(fā)酵至18 h后,酸溶蛋白及氨基酸態(tài)氮含量分別提高至19.08%和1.23%,且不隨發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)而改變(P>0.05),相比黑曲霉單步發(fā)酵后分別提高78.48%和68.27%。因此確定兩步發(fā)酵的最佳發(fā)酵時(shí)間為18 h。之前的研究表明[21],將黑曲霉發(fā)酵后的菜籽粕進(jìn)一步酶解后,由于菜籽粕中大分子蛋白被黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)生的相關(guān)蛋白酶分解,將大幅度提高菜籽粕中小分子蛋白含量。因此,在本研究中,將發(fā)酵的菜籽粕接種乳桿菌進(jìn)行兩步發(fā)酵后,總酸含量被提高的同時(shí)酸溶蛋白及氨基酸態(tài)氮含量也被大幅提高。

表2 混菌發(fā)酵結(jié)合兩步法對(duì)酸溶蛋白及氨基酸態(tài)氮含量的影響Table 2 Effect of mixed fermentation with two-step method acid-soluble protein,amino acid nitrogen and total acids content

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從泡菜水中篩選出一株高產(chǎn)有機(jī)酸的乳桿菌,經(jīng)16S rDNA測(cè)序鑒定為類食品乳桿菌(Lactobacillusparalimentarius),并確定其發(fā)酵菜籽粕產(chǎn)酸的最佳條件。將乳酸菌與黑曲霉混合發(fā)酵同時(shí)結(jié)合兩步法作用于菜籽粕后,與空白對(duì)照和單菌發(fā)酵相比,其總酸含量分別提高了640.54%、160.95%和112.40%;酸溶蛋白和氨基酸態(tài)氮含量分別從2.87%和0.12%提高到19.08%和1.23%,其提高率達(dá)到了564.81%和925%;硫苷含量從23.09 μmol/g下降到12.65 μmol/g,其降解率為45.21%。以上結(jié)果表明,菜籽粕先經(jīng)黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)酶再接種乳桿菌兩步法處理后,硫苷含量顯著下降,菜籽粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值顯著提高,其品質(zhì)得到了很大的改善,對(duì)擴(kuò)大菜籽粕在食品和飼料中的開發(fā)與利用具有實(shí)際意義。