王春亮，王運(yùn)土

（1.廣西師范大學(xué)體育學(xué)院，廣西 桂林 541006；2.廣西外國語學(xué)院，廣西 南寧 530222）

由于大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)會(huì)造成人體免疫功能降低，所以常有大學(xué)生在一次大強(qiáng)度跑步后，常會(huì)患感冒、呼吸道感染等疾病。因此，尋找合適的方法提升機(jī)體免疫功能十分必要。黑木耳（Aruicularia auricua）是一種常見的食用菌，從黑木耳中提取的多糖具有多種生物活性。研究表明，黑木耳多糖具有抗氧化、降低血糖、增強(qiáng)腸胃消化等功能[1-2]。最近也有學(xué)者提出，益生菌通過作用于腸道菌群，可較大提升機(jī)體的免疫功能[3]。因此，通過制備黑木耳多糖益生菌咀嚼片，觀察服用黑木耳多糖益生菌咀嚼片的普通大學(xué)生，在一次大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后機(jī)體免疫功能的變化情況，研究旨在為黑木耳多糖聯(lián)合益生菌在運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 試驗(yàn)對(duì)象與方法

1.1 黑木耳多糖益生菌咀嚼片的制備

1.1.1 原料

黑木耳菌株、干黑木耳，均來自濟(jì)南張氏食用菌研究所。葡萄糖、無水型酒精、DEAE-纖維素、苯酚、甘露醇、檸檬酸、預(yù)膠化淀粉、可溶性淀粉、硬脂酸鎂、可壓蔗糖、食用粉沫香精等。

1.1.2 儀器

超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，南京以馬內(nèi)利儀器設(shè)備有限公司；紫外可見分光光度計(jì)，上海元析儀器有限公司；臺(tái)式低速離心機(jī)，由廣州吉迪儀器有限公司；數(shù)顯恒溫水浴加熱鍋，型號(hào)即為HH-M4，常州市金壇友聯(lián)儀器研究所；萬能粉碎機(jī)，型號(hào)即為WN-20，南京科立華儀器儀表有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，型號(hào)即為FRE-52A，上海亞榮生化儀器廠；真空干燥箱，型號(hào)即為DZF-6090，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；酸度計(jì)，型號(hào)即為PHS-3C，上海悅豐儀器有限公司；精密增力電動(dòng)攪拌器（型號(hào)即為JJ-1）、可見光分光光度計(jì)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、高速冷凍離心機(jī)、自動(dòng)部分收集器、壓片機(jī)等，上海一恒科技有限公司。

1.1.3 制作方法

1）提取出黑木耳多糖：干黑木耳粉碎、稱重，石油醚80℃作用回流脫脂。脫脂后90℃熱水進(jìn)行浸泡2次（黑木耳與水的比例為1∶15），接著，進(jìn)行過濾與除雜，搜集濃縮性濾液，借助乙醇進(jìn)行提取與離心采集，進(jìn)行DEAE處理與離心采集，冷凍與干燥，得黑木耳多糖粗品，經(jīng)測定多糖含量88.15%[4]。

2）篩選益生菌活性：對(duì)用于提取黑木耳多糖的培養(yǎng)基進(jìn)行制備，并對(duì)菌株培育進(jìn)行活化，篩選出菌株，對(duì)菌株生長曲線進(jìn)行檢測，檢測黑木耳多糖對(duì)于乳酸桿菌益生菌本身的活性所帶來的影響。為了更為全方位地發(fā)揮出黑木耳多糖的各類優(yōu)勢，獲得具有更高活性的益生菌，借助多糖總含量到了88.15%的中性黑木耳多糖、有益菌乳酸桿菌C88間加以聯(lián)合的方式，做出益生菌咀嚼片[5]。

3）對(duì)咀嚼片進(jìn)行壓制與成型：借助預(yù)膠化淀粉、可壓性蔗糖、噴霧干后加乳糖、硬脂酸鎂、甘露醇、食用粉沫香精等對(duì)益生菌咀嚼片進(jìn)行生產(chǎn)，依據(jù)0.3 g輔料、0.2 g黑木耳多糖和益生菌來進(jìn)行混合，在混合十分充分后，把壓力設(shè)定成200 MPa，所有香菇多糖咀嚼片的總質(zhì)量設(shè)定成0.5 g，最后，把原料、輔料進(jìn)行均勻性混合，處于設(shè)定的壓力下，把其壓制為圓形咀嚼片[6]。

備好過目篩，把所有原料、輔料進(jìn)行預(yù)混，共過篩3次，進(jìn)行壓片與包裝。借助一樣的方式來制備出沒有含有黑木耳多糖與益生菌、剩余成分總含量一樣的咀嚼片。

1.2 試驗(yàn)對(duì)象

選取廣西師范大學(xué)普通專業(yè)男大學(xué)生60名為研究對(duì)象，年齡18歲～20歲。無先天性疾病、無不良嗜好，身體健康。60名大學(xué)生隨機(jī)分為3組：安靜組（A組）、運(yùn)動(dòng)組（B組）、黑木耳多糖益生菌運(yùn)動(dòng)組（C組），每組20人。3組大學(xué)生身高、體重、身體質(zhì)量指數(shù)比較見表1。試驗(yàn)前，詳細(xì)講解試驗(yàn)過程，并要求學(xué)生簽署試驗(yàn)知情書。

表1 3組大學(xué)生身高、體重、身體質(zhì)量指數(shù)的比較Tab.1 Comparison of height,weight and body mass index among 3 groups of college students

從表1可以看出，試驗(yàn)前比較3組大學(xué)生身高、體重、身體質(zhì)量指數(shù)，經(jīng)單因素方差分析后，3組大學(xué)生身高、體重、身體質(zhì)量指數(shù)無顯著性差異。符合試驗(yàn)要求。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 服用方法與訓(xùn)練方法

A組：每天給予劑量為0.5 g的淀粉咀嚼片，共2周。服用最后1 d不運(yùn)動(dòng)。

B組：每天給予劑量為0.5 g的淀粉咀嚼片，共2周。服用最后1 d下午進(jìn)行1 500 m跑（要求心率控制在130次/min～170次/min，9 min內(nèi)跑完）。

C組：每天給予劑量為0.5 g的黑木耳多糖益生菌咀嚼片，共2周。服用最后1 d下午進(jìn)行1 500 m跑（要求心率控制在130次/min～170次/min，9 min內(nèi)跑完）。

在試驗(yàn)完成的5 d中，對(duì)全部大學(xué)學(xué)生的靜脈血液、糞便進(jìn)行采集，共3次。

1.3.2 指標(biāo)測定方法

取材與血清的制備：訓(xùn)練結(jié)束后24 h，3組大學(xué)生肘靜脈脈取血約3 mL，其中2 mL全血肝素抗凝，4℃冰箱保存測T淋巴細(xì)胞亞群；1 mL全血，肝素抗凝，靜止25 min后，離心（4℃、10 min、1 000 r·min-1）后，取上清液，4℃冰箱保存待測免疫球蛋白。

全血T淋巴細(xì)胞亞群的測定：取100 μL抗凝血，加入抗體（CD3+的抗體為CD3-PC5，CD4+的抗體為CD4-FTTC，CD8+的抗體為CD8-PC5），PBS稀釋、25℃室溫培育1 h，置入紅細(xì)胞，恒溫器20 min，1 000 r·min-1冷凍離心，舍去上清液，采用流式細(xì)胞儀測定CD3+、CD4+、CD8+含量。

血清免疫球蛋白的測定：0.3 mL生理鹽水配0.1 mL血清，免疫過散法測定IgG、IgA、IgM含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

2 結(jié)果

2.1 全血T淋巴細(xì)胞亞群的比較結(jié)果

3組大學(xué)生全血T淋巴細(xì)胞亞群的比較結(jié)果見表2。

從表2可以看出，B組、C組CD3+（21.92±7.21）%、（61.62±12.24）%、CD4+（42.23±9.79）%、（58.63±10.11）%、CD8+含量 [（32.11±6.00）%、（39.73±8.98）%]、CD4+/CD8+含量 [（1.21±0.01）%、（1.49±0.02）%]均低于 A 組 CD3+含量 [（71.71±15.32）%]、CD4+含量 [（79.25 ± 11.23）%]、CD8+含量[（47.26±9.12）%]、CD4+/CD8+含量 [（1.67 ± 0.03）%]，差異具有據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C組與B組相比，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+含量均升高，差異具有據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 3組大學(xué)生全血T淋巴細(xì)胞亞群含量的比較結(jié)果Tab.2 Comparison results of whole blood T lymphocyte subsets among 3 groups of college students

2.2 血清免疫球蛋白的比較結(jié)果

3組大學(xué)生血清免疫球蛋白含量比較結(jié)果見表3。

表3 3組大學(xué)生血清免疫球蛋白含量比較結(jié)果Tab.3 Comparison results of serum immunoglobulin content among three groups of college students

從表3可以看出，B組、C組IgA含量 [（3.11±0.41)g·dl-1、（5.02± 0.41)g·dl-1]、IgM 含量 [（3.23±0.34)g·dl-1、（7.63± 0.52)g·dl-1]、IgG 含量 [（1.78 ±0.21)g·dl-1、（3.22±0.48)g·dl-1]均低于 A 組 IgA 含量 [（8.41±0.22)g·dl-1]、IgM 含量 [（9.25±0.21)g·dl-1]、IgG 含量 [（4.26±0.32)g·dl-1]，差異具有據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C組與B組相比，IgA、IgM、IgG含量均升高，差異具有據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 結(jié)論

黑木耳是一種藥食兼用菌，其長時(shí)間以來都是食品有關(guān)分析與研究中的焦點(diǎn)。在食品加工、處理技術(shù)迅猛地發(fā)展的今天，黑木耳多糖提取工藝也獲得了更為全方位地改良、完善，黑木耳獲得了更為廣泛的用途[7]。本研究中，在提取黑木耳多糖的基礎(chǔ)上，研制黑木耳多糖益生菌咀嚼片，并探討其提升免疫力的功能。

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+是機(jī)體細(xì)胞免疫的重要指標(biāo)，CD3+代表成熟T淋巴細(xì)胞數(shù)目，CD4+為輔助性T細(xì)胞，CD8+為毒性T細(xì)胞，CD4+/CD8+的值常用于衡量機(jī)體的免疫功能，當(dāng)其值在1.4～2.0時(shí)，即代表機(jī)體免疫功能正常[8-9]。研究中，跑步1 500 m后，運(yùn)動(dòng)組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+含量均降低，表明大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致大學(xué)生細(xì)胞免疫動(dòng)能降低，而黑木耳多糖益生菌咀嚼片能抑制這種現(xiàn)象，提示黑木耳多糖益生菌咀嚼片能提升機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。

IgG、IgA、IgM是淋巴細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)，常被衡量機(jī)體體液免疫功能[10-11]。有研究表明，高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體體液免疫功能降低[12]，表現(xiàn)為血液中IgG、IgA、IgM含量降低。本研究還發(fā)現(xiàn)，高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致試驗(yàn)組學(xué)生機(jī)體體液免疫功能降低，而黑木耳多糖益生菌咀嚼片能抑制這種現(xiàn)象，提示黑木耳多糖益生菌咀嚼片能提升機(jī)體的體液免疫功能。

綜上，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)能導(dǎo)致大學(xué)生免疫功能降低，而黑木耳多糖聯(lián)合益生菌能抑制上述現(xiàn)象，提升調(diào)控大學(xué)生免疫功能接近正常水平。