馮永巍，鄒 鳳

無錫市食品安全檢驗檢測中心 (無錫 214142)

薏苡仁，又名薏仁、米仁, 具有具健脾滲濕，除痹止瀉，清熱排膿之功效[1]。

薏苡仁也是一種藥食同源的食品，深受消費者的喜愛。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明薏苡仁中的甘油三油酸酯等甘油三酯成分具有抗腫瘤活性，并把甘油三油酸酯含量作為評價薏苡仁質(zhì)量的重要指標(biāo)[2]。甘油三酯是一類非極性化合物且紫外吸收較弱，其含量檢測以高效液相色譜-蒸發(fā)光散射(HPLC-ELSD)技術(shù)為主[3-7]。但蒸發(fā)光檢測器存在響應(yīng)與物質(zhì)濃度線性關(guān)系較差、易受環(huán)境溫度影響等缺陷[8]。電霧檢測器(Charged aerosol detector ,CAD)是近年來發(fā)展的一種新型通用檢測器,具有靈敏度高、線性關(guān)系好的特點，適用于皂苷類、糖類、生物堿類、脂類等無紫外吸收或弱紫外吸收成分的分析與檢測[9-12]。王莉等分別用ELSD檢測器和CAD檢測器分析了人參中三萜類皂苷化合物，結(jié)果表明CAD檢測器的靈敏度和重現(xiàn)性都優(yōu)于ELSD檢測器[13]。白長財?shù)冗\用HPLC-CAD建立了三七藥材的指紋圖譜，并與ELSD和UVD兩種檢測器進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示CAD檢測器具有較為平穩(wěn)的基線和較高的靈敏度，更加適用于含有較弱或無紫外吸收成分藥材的指紋圖譜分析[14]。應(yīng)用HPLC-CAD技術(shù)檢測甘油三酯類物質(zhì)的研究尚處于起步階段，相關(guān)報道還很少。本研究旨在以甘油三油酸酯為目標(biāo)物，建立薏苡仁中甘油三酯類物質(zhì)的高效液相色譜電噴霧檢測器測定方法，為薏苡仁的功效成分分析和質(zhì)量控制提供有效的技術(shù)手段。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Ultimate 3000型高效液相色譜儀，美國賽默飛世爾公司；Corona VEO RS型CAD檢測器，美國賽默飛世爾公司； ME204E型電子天平，瑞士梅特勒公司；乙腈、二氯甲烷均為色譜純，購于上海安譜實驗科技股份有限公司；甘油三油酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，純度98%，購于上海安譜實驗科技股份有限公司；薏苡仁樣品，均購自本地超市；中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件 (2.0版)，國家藥典委員會。

1.2 方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Acclaim 120 C18(250×4.6 mm，5 μm)；流動相∶乙腈-二氯甲烷(70∶30，v/v)；柱溫30 ℃；流速0.6 mL/min；檢測器采集頻率10 Hz；檢測器霧化溫度35 ℃；進(jìn)樣量5 μL；洗脫時間30 min。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備

將20 mg甘油三油酸酯標(biāo)準(zhǔn)品至于25 mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，得到濃度0.8 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.2.3樣品的制備

薏苡仁樣品10 g，粉碎，過40目篩。準(zhǔn)確稱取粉碎樣品0.6 g，置于磨口圓底燒瓶中, 加入流動相50 mL，稱定重量，回流提取30 min。冷卻至室溫，稱重，用流動相補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾紙過濾。收集濾液過微孔濾膜(0.45 μm)，待上機(jī)。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用流動相配制成濃度為0.06、0.16、0.20、0.30和0.40 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，上機(jī)測定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5精密度試驗

將薏苡仁樣品按照1.2.3的方法進(jìn)行制備，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積的響應(yīng)值，計算精密度。

1.2.6樣品檢測和相似度評價

從超市購買6個不同品牌的薏苡仁樣品，分別編號S1、S2、S3、S4、S5、S6。按照上述方法制備、上機(jī)。測定不同樣品中甘油三油酸酯的含量。將6個樣品的色譜圖導(dǎo)入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) (2.0版) ”軟件, 對不同品牌薏苡仁的甘油三酯圖譜進(jìn)行相似度評價。

2 結(jié)果與討論

2.1 定量檢測結(jié)果

圖1為高效液相色譜-電噴霧檢測器法檢測甘油三油酸酯標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖(濃度0.1 mg/mL)。圖1所示，甘油三油酸酯在16.4左右出峰，峰型左右對稱、基線平滑。

圖1 甘油三油酸酯高效液相色譜電噴霧檢測器色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

甘油三油酸酯在0.06～0.4 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R = 0.998 6，校準(zhǔn)曲線方程為 y=0.782 6x +2.571 6。

2.3 精密度

HPLC-CAD法檢測甘油三油酸酯精密度測試結(jié)果見表1。如表1所示，峰面積響應(yīng)值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.26%。

表1 精密度測定結(jié)果

2.4 實際樣品的檢測

圖2為薏苡仁樣品色譜圖。由圖2可見，薏苡仁樣品中含有個甘油三酯組分。在試驗條件下，各組分實現(xiàn)了基線分離，甘油三油酸酯的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品的保留試驗吻合，鄰近無重疊峰的干擾，易于定性、定量。S1～S6號樣品的甘油三油酸酯含量檢測結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，6種薏苡仁樣品的甘油三油酸酯含量范圍在0.824%～0.995%之間。

圖2 樣品中甘油三酯的色譜圖

表2 實際樣品含量測定結(jié)果

2.5 指紋圖譜相似度比較結(jié)果

將樣品編號S1～S6的HPLC圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) (2.0版)軟件，軟件根據(jù)各圖譜的共有峰，生成了對照指紋圖譜R(見圖3)。再將S1～S6號樣品與對照指紋圖譜匹配進(jìn)行相似度比較，比較結(jié)果見表3。如表3所示，S1～S6號樣品與對照指紋圖譜的相似度分別為0.999、0.995、0.993、0.999、0.999、0.999，與對照圖譜的相似度均≥0.99，說明各樣品質(zhì)量具有較好一致性。

圖3 6種薏苡仁樣品指紋圖譜

表3 薏苡仁指紋圖譜相似度評價

3 結(jié)論

建立了高效液相色譜-電噴霧檢測器(HPLC-CAD)檢測薏苡仁樣品中甘油三油酸酯的方法。方法簡便、高效，重現(xiàn)性好。將該方法應(yīng)用于薏苡仁中甘油三酯成分指紋圖譜的相似性分析，可有效識別不同樣品間的質(zhì)量差異。