黃嫻，李彤彤，種靖慧，解金輝(天津市血液中心免疫血液學(xué)研究室，天津300110)

為保證輸血安全和有效，輸血前需要篩查患者的不規(guī)則抗體，以使患者輸注配合的血液。漏檢低效價(jià)的弱抗體會(huì)導(dǎo)致血液輸注無效，甚至導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)[1]。本實(shí)驗(yàn)室遇到1例因多次輸血致產(chǎn)生弱的不規(guī)則抗體的病例，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象及資料 患兒，女，9歲，既往無輸血史，懷疑藥物導(dǎo)致貧血，血型鑒定為A型，RhD陽性。2017年5月11日入院，15 d內(nèi)輸血12次，輸血效果不佳。本實(shí)驗(yàn)室全程受醫(yī)院委托進(jìn)行交叉配血，第12次輸血前檢出抗E抗體，回顧性檢測(cè)該抗體的產(chǎn)生過程，分析其對(duì)輸血效果的影響。

1.2主要試劑和儀器 篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞購自荷蘭Sanquin公司，抗人球蛋白卡購自美國(guó)Bio-Rad公司，凝聚胺、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)試劑購自長(zhǎng)春博德公司，酸放散試劑購自珠海貝索生物技術(shù)公司，木瓜酶粉劑、抗E、抗e、抗C、抗c均購自上海血液生物醫(yī)藥公司，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。KA-2200型離心機(jī)(日本久保田公司)，試劑卡孵育箱和離心機(jī)、數(shù)字顯示式恒溫水浴箱、可調(diào)移液器(美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.3不規(guī)則抗體鑒定 鹽水法、凝聚胺法、微柱凝集法(microcolumn gel test，MGT)3種常用血型血清學(xué)試驗(yàn)方法和酸放散試驗(yàn)均按試劑說明書操作，直接抗人球蛋白試驗(yàn)采用MGT。

1.4PEG-MGT 在試管中加入100 μL患者血漿、200 μL PEG試劑和50 μL 2%～5%紅細(xì)胞，37 ℃溫育15 min后用鹽水洗滌4次，配制成合適濃度的懸液。由于本試驗(yàn)中試管抗人球蛋白法檢測(cè)PEG處理后的細(xì)胞凝集強(qiáng)度很弱，為便于判讀，將處理后的細(xì)胞配成合適濃度的懸液，加入IgG單抗的凝膠卡并離心，記錄凝集強(qiáng)度。

1.5酶-MGT 采用2步酶法，將篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞用鹽水洗滌3次后配成2%～3%濃度，加入等量的木瓜蛋白酶，37 ℃溫育10 min后用鹽水洗滌3次。由于試管抗人球法檢測(cè)木瓜酶處理后的紅細(xì)胞與患者血漿凝集強(qiáng)度太弱無法判讀，將酶處理紅細(xì)胞配制成1%濃度的低離子懸液，加入抗IgG+C3d的凝膠卡，再加入患者血漿，37 ℃溫育后離心，記錄凝集強(qiáng)度。

2 結(jié)果

2.1直接抗人球蛋白試驗(yàn) 見表1。第1次輸血前患者紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)呈2+，第2次呈1+，第3次和第4次呈w+，第5次至第12次輸血前樣本直接抗人球蛋白試驗(yàn)全為陰性。

2.2抗體篩查 第1至4次輸血前抗篩鹽水法、凝聚胺法、MGT均為陰性，由于此時(shí)患者直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，為避免自身抗體干擾未進(jìn)行PEG-MGT和酶-MGT試驗(yàn)。第5至8次輸血前抗篩鹽水法、凝聚胺法、MGT、PEG-MGT和酶-MGT均為陰性。第9次輸血前酶-MGT檢出不規(guī)則抗體，第12次輸血前酶-MGT與PEG-MGT均檢出不規(guī)則抗體，譜細(xì)胞格局符合抗E抗體(篇幅所限未列出譜細(xì)胞格局表)，患者Rh分型為CCDee。歷次抗篩結(jié)果見表1。另外，第1次和第12次輸血前抗篩鹽水法室溫下為陰性，2次的血清4 ℃溫育10 min后抗篩細(xì)胞和自身對(duì)照均凝集且強(qiáng)度均為3+，均含有自身冷抗體。

表1 患者歷次抗篩結(jié)果和供者RhE抗原

注：抗篩凝集強(qiáng)度為患者血漿與EE純合子細(xì)胞的凝集強(qiáng)度。

2.3抗體性質(zhì) 第12次輸血前的患者血清經(jīng)2-Me處理30 min后，酶-MGT法檢測(cè)抗篩變?yōu)殛幮裕C實(shí)抗E抗體為IgM性質(zhì)。

2.4酸放散試驗(yàn) 第1次和第12次輸血前的患者樣本分別進(jìn)行酸放散試驗(yàn)，第1次的紅細(xì)胞放散液未檢出特異性抗體，第12次的紅細(xì)胞放散液采用酶-MGT法檢出抗E抗體。

2.5抗體對(duì)輸血有效性的影響 血紅蛋白量隨天數(shù)變化的曲線見圖1。結(jié)合圖1和表1結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從第13天開始檢測(cè)到抗E抗體，第6天、12天、15天輸注不含E抗原的血液，均使血紅蛋白提高。而第5天、9天、10天、14天僅輸注含有E抗原的血液，均未能提高血紅蛋白水平。

圖1 患者血紅蛋白變化曲線

3 討論

鹽水法、凝聚胺法、MGT、酶法是常見的不規(guī)則抗體篩查方法，凝聚胺法、MGT、酶法對(duì)于檢測(cè)Rh系統(tǒng)的常見IgG類抗體，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[2]；而IgM類抗體通常采用鹽水法篩查，部分IgM抗體可由MGT檢測(cè)到[3]。本例弱IgM抗E抗體伴隨自身冷抗體，室溫鹽水法陰性，4 ℃鹽水法由于冷抗體無法鑒定特異性抗體，PEG-試管抗人球蛋白法(PEG-IAT)和酶-試管抗人球蛋白法(酶-IAT)亦因凝集強(qiáng)度太弱而不易判讀。采用酶-MGT，患者直抗陰性，37 ℃溫育排除冷抗體的干擾，使用含有多種抗人球蛋白的凝膠卡檢測(cè)血漿，具有更高的靈敏度且結(jié)果直觀，為鑒定弱IgM型不規(guī)則抗體提供了可選方法。為避免補(bǔ)體C3結(jié)合自身抗體的干擾，PEG-MGT使用IgG單抗卡，該方法在本例弱抗體檢測(cè)過程中的靈敏度不及酶-MGT。本研究中患者輸注不含相應(yīng)抗原的血液，血紅蛋白水平得到提升，而含有相應(yīng)抗原的血液不能提高血紅蛋白水平，證明該抗體具有臨床意義。

受血者產(chǎn)生不規(guī)則抗體與輸血次數(shù)密切相關(guān)，當(dāng)輸血次數(shù)大于6次，不規(guī)則抗體的發(fā)生頻率可達(dá)89.7%[4]。在我國(guó)最常見的不規(guī)則抗體是抗E抗體[5]，本研究中患者15 d輸血12次，出現(xiàn)輸注無效，經(jīng)鑒定產(chǎn)生抗E抗體。對(duì)于多次受血者可檢測(cè)E抗原，輸注E同型或相容的血液，降低多次受血者產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率，減少其輸注無效和發(fā)生輸血反應(yīng)的頻率，從而提升輸血的安全性和有效性。