王 穎 倪健彬

卵巢癌患者的生存周期受到其早期診斷水平的直接而深刻的影響?，F(xiàn)階段，血清糖類抗原125(CA125)、盆腔檢查是臨床診斷卵巢癌過(guò)程中通常采用的常規(guī)方法，但是，由于這些檢查方法具有較低的靈敏度、特異度，因此會(huì)造成患者就診時(shí)已經(jīng)處于TNM分期Ⅲ期或Ⅳ期，這時(shí)即便給予患者根治性手術(shù)、化療等綜合治療，患者仍然有約30%的死亡率[1-3]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[4-5]，在多種腫瘤的診斷及預(yù)后判斷中，循環(huán)miRNAs由于臨床相關(guān)性極高，因此可以作為重要的分子指標(biāo)。很多相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[6-7]，一系列血清miRNA在卵巢癌診斷中應(yīng)用價(jià)值極高。本研究探討了血清miR-17-5p在卵巢癌中的表達(dá)及預(yù)后價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2015年8月至2018年8月我院卵巢癌患者50例，患者年齡40～80歲，平均(60.2±10.5)歲。在組織學(xué)類型方面，26例嚴(yán)重，24例其他；在細(xì)胞核分化程度方面，23例為高分化，27例為中低分化；在TNM分期方面，21例為Ⅰ～Ⅱ期，29例為Ⅲ～Ⅳ期。將卵巢癌患者作為卵巢癌組。另隨機(jī)選取同期我院健康體檢女性50例作為健康對(duì)照組，年齡41～80歲，平均(61.3±10.7)歲。2組人員的一般資料比較差異均不顯著(P>0.05)。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為卵巢癌；②均具有正常的肝腎功能；③均為初診初治患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重內(nèi)科疾?。虎诤喜⑵渌[瘤；③接受過(guò)放化療治療。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 實(shí)驗(yàn)試劑：購(gòu)買上海吉馬科技有限公司生產(chǎn)的miR-17-5p、內(nèi)參U6引物，碧云天科技有限公司生產(chǎn)的TRIzol細(xì)胞裂解液，北京TIANGEN科技有限公司生產(chǎn)的miRcute miRNA提取分離試劑盒，Ambion公司生產(chǎn)的miRNA反轉(zhuǎn)錄引物與試劑盒，TaKaRa公司生產(chǎn)的SYBR Premix試劑盒；實(shí)驗(yàn)儀器：臺(tái)式低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Beckman)、-80 ℃冰箱(Thermo公司)、實(shí)時(shí)定量PCR儀(7500型，美國(guó)ABI公司)。

1.3.2 血清miR-17-5p提取與反轉(zhuǎn)錄 手術(shù)前后分別將2組人員的5 ml空腹血采集下來(lái)，保存在真空干燥管中，進(jìn)行10 min的離心，將速率設(shè)定為1 500 r/min，在-80 ℃冰箱中保存待測(cè)。應(yīng)用miRcute miRNA提取分離試劑盒提取血清miR-17-5p，采用紫外分光儀對(duì)RNA濃度、純度進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，有10 mg RNA模板存在于每個(gè)反轉(zhuǎn)錄體系中。反轉(zhuǎn)錄條件為在16 ℃、42 ℃、85 ℃的溫度下分別反轉(zhuǎn)錄30 min、30 min、5 min。

1.3.3 qRT-PCR 反應(yīng)條件為在95 ℃、95 ℃、60 ℃、72 ℃的溫度下分別反應(yīng)3 min、12 s、35 s、35 s，循環(huán)40次。運(yùn)用相對(duì)定量法將血清miR-17-5p的相對(duì)表達(dá)量(F)計(jì)算出來(lái)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組人員的血清miR-17-5p表達(dá)比較

卵巢癌組患者的血清miR-17-5p表達(dá)水平為(6.14±1.44)%，顯著高于健康對(duì)照組的(2.73±0.30)%(t=4.303，P<0.05)。

2.2 卵巢癌組患者手術(shù)前后的血清miR-17-5p表達(dá)比較

卵巢癌組患者手術(shù)后的血清miR-17-5p表達(dá)水平為(3.20±0.82)%，顯著低于手術(shù)前(t=6.965，P<0.05)。

2.3 卵巢癌組患者血清miR-17-5p表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析

卵巢癌組TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-17-5p高表達(dá)率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，但不同年齡、組織學(xué)類型、細(xì)胞核分化程度患者血清miR-17-5p高表達(dá)率之間的差異均不顯著(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 卵巢癌組患者血清miR-17-5p表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析(例，%)

2.4 卵巢癌組患者血清miR-17-5p表達(dá)與生存情況的相關(guān)性分析

卵巢癌組血清miR-17-5p高表達(dá)患者的1年、2年、3年、5年生存率[88.9%(24/27)、77.8%(21/27)、70.4%(19/27)、55.6%(15/27)均顯著低于低表達(dá)患者95.7%(22/27)、87.0%(20/27)、78.3%(18/27)、69.6%(16/27)](P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 卵巢癌組患者血清miR-17-5p表達(dá)與生存情況的相關(guān)性分析(例，%)

3 討論

miR-17-5p歸屬于miR-17-92家族，在多個(gè)腫瘤中將致癌性miRNA作用發(fā)揮了出來(lái)。在腦膠質(zhì)瘤、胃癌、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌、膀胱癌等多種腫瘤組織、細(xì)胞、血液中，miR-17-5p具有顯著較高的表達(dá)。既往研究表明[8]，在肝癌、胃癌、胰腺癌、肺癌等多種腫瘤的診斷及預(yù)后判斷中，可以將循環(huán)血液中的miR-17-5p作為一項(xiàng)重要的參考指標(biāo)。在多種腫瘤的診斷中，血清中游離miR-17-5p可以作為一項(xiàng)有價(jià)值的檢測(cè)指標(biāo)。同時(shí)，其檢測(cè)穩(wěn)定，能夠?qū)⒛[瘤狀態(tài)反映出來(lái)，作為一種腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用前景極為廣闊。本研究結(jié)果表明，卵巢癌組患者的血清miR-17-5p表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，說(shuō)明在對(duì)卵巢癌患者和健康人群進(jìn)行區(qū)分的過(guò)程中，可以將卵巢癌患者血清miR-17-5p表達(dá)水平顯著升高作為一項(xiàng)分子指標(biāo)。本研究結(jié)果還表明，卵巢癌組患者手術(shù)后的血清miR-17-5p表達(dá)水平顯著低于手術(shù)前，說(shuō)明卵巢癌患者接受根治性切除術(shù)治療情況對(duì)其血清miR-17-5p表達(dá)水平造成了直接而深刻的影響，可能為卵巢癌特異性血清miRNA[9]。

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[10]，miR-17-5p在對(duì)增殖、分化進(jìn)行調(diào)控的miRNA中最具代表性，其將癌基因作用發(fā)揮出來(lái)的潛在機(jī)制為對(duì)E2F1、BIM等腫瘤相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行抑制，為腫瘤細(xì)胞增殖、分化提供良好的前提條件。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[11]，卵巢癌患者的YES1表達(dá)會(huì)在過(guò)表達(dá)miR-17-5p的作用下上調(diào)，為卵巢癌細(xì)胞增殖提供良好的前提條件，對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行抑制。研究表明[12]，和健康人相比，卵巢癌患者具有顯著較高的血清miR-17-5p表達(dá)。從這里我們可以看出，卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展可能和miR-17-5p關(guān)系密切。同時(shí)，卵巢癌的臨床病理特征也可能和miR-17-5p關(guān)系密切。相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者[13]對(duì)卵巢癌患者的臨床分期、術(shù)后5年生存率和miR-17-5p的關(guān)系進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)隨著臨床分期的提升，血清miR-17-5p表達(dá)水平逐漸提升，二者呈顯著的正相關(guān)關(guān)系。而和血清miR-17-5p低表達(dá)患者相比，血清miR-17-5p高表達(dá)患者具有顯著較低的5年生存率。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究也表明[14-15]，和健康人相比，卵巢癌患者具有顯著較高的血清miR-17-5p表達(dá)水平，因此在診斷卵巢癌過(guò)程中，可以將血清miR-17-5p作為有效的分子指標(biāo)。卵巢癌患者的臨床分期和血清miR-17-5p表達(dá)水平呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，但患者年齡、組織學(xué)類型、細(xì)胞核分化程度和血清miR-17-5p表達(dá)水平均無(wú)相關(guān)性。和血清miR-17-5p低表達(dá)患者相比，血清miR-17-5p高表達(dá)患者具有顯著較低的5年生存率。本研究結(jié)果表明，卵巢癌組TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-17-5p高表達(dá)率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，但不同年齡、組織學(xué)類型、細(xì)胞核分化程度患者血清miR-17-5p高表達(dá)率之間的差異均不顯著；卵巢癌組血清miR-17-5p表達(dá)高表達(dá)患者的1年、2年、3年、5年生存率均顯著低于低表達(dá)患者，和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致，說(shuō)明miR-17-5p可能能夠?qū)┗蜃饔冒l(fā)揮出來(lái)，為卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展提供良好的前提條件。

總之，血清miR-17-5p在卵巢癌中的表達(dá)水平顯著升高，降低了患者生存率，可以作為潛在靶點(diǎn)對(duì)卵巢癌進(jìn)行臨床診斷及預(yù)后判斷。