賈光輝，趙永強(qiáng)

烏蘭察布市中心醫(yī)院普外科，內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000

大腸癌是當(dāng)前人類眾多疾病中非常常見的一種惡性腫瘤之一，在眾多的腫瘤死亡原因中占據(jù)著較高的排名，并且正呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢[1]。其發(fā)生發(fā)展是由于多因素參與作用的過程。當(dāng)前在關(guān)于惡性腫瘤發(fā)生的癌基因眾多的研究中,曾有專家學(xué)者提出多基因協(xié)同作用假說,他認(rèn)為在腫瘤進(jìn)行發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的各個階段,至少會有兩個或者是兩個以上功能不同的異常激活的癌基因在其中發(fā)揮著各自不同的作用[2]。而轉(zhuǎn)化生長因子β是一類多功能的多肽類生長因子，TGF-β1是該家族中重要的一員[3]。TGF-β1在各種腫瘤中的過度表達(dá)以及臨床病理特征與預(yù)后中具有著密切的關(guān)系。Smad 4基因則是定位于18q21染色體,其編碼產(chǎn)物 Smad 4蛋白是 TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中可以發(fā)揮出瓶頸作用的一個關(guān)鍵因子[4]。該研究通過采用免疫組織化學(xué)方法對于2017年1月—2018年12月該院60例大腸癌組織觀察組與同期的正常人的大腸組織60例對照組檢測TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)以及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察組為60例大腸癌組織，均采用該院部分大腸癌手術(shù)切術(shù)組織的石蠟標(biāo)本，該次研究經(jīng)過院倫理委員協(xié)會批準(zhǔn)，患者均同意該次研究，并簽署知情同意書。其中觀察組男性35例，女性25例；年齡最小為32歲，最大為65歲，平均48.5歲。對照組正常人的大腸黏膜組織，同樣具有60例，其中男性32例，女性28例；年齡最小為35歲，最大為71歲，平均53歲。其中結(jié)腸癌 50例,結(jié)腸炎50例,正常結(jié)腸黏膜20例。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)。

1.2 方法

觀察組和對照組同樣經(jīng)常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋,4 μm切片等一系列操作處理,在經(jīng)過切片之后，分別進(jìn)行組織病理學(xué)檢查以及免疫組化染色[5]。采用免疫組織化學(xué)SABC法進(jìn)行免疫組化染色。用已知陽性染色組織切片作為陽性對照,陰性對照則是采用 PBS液代替一抗孵育已知陽性切片。兔抗人TGF-β1多克隆抗體為 Santa Cruz產(chǎn)品。兔抗人 Smad4多克隆抗體、即用型 SABC試劑盒以及DAB染色試劑盒均來自于武漢博士德生物工程有限公司。

具體的操作方法也就是觀察組采用SABC法[6]，切片經(jīng)二甲苯脫蠟以及梯度酒精脫水,在滴加3%過氧化氫溶液之后，將其放置于室溫下孵育10 min滅活內(nèi)源性過氧化物酶,并經(jīng)過 3次3 min的PBS沖洗之后，將其中滴加一抗,并再次進(jìn)行60 min的室溫孵育,以及PBS沖洗3 min 3次,滴加二抗,經(jīng)30 min的室溫孵育之后,3 min 3次的PBS沖洗,滴加SABC進(jìn)行10 min的室溫孵育，并經(jīng)過蒸餾水沖洗、蘇木素復(fù)染之后,對其進(jìn)行脫水，等到其透明后觀察中性樹脂封片。

1.3 結(jié)果判定

TGF-β1以及 Smad4結(jié)果分析分別以文獻(xiàn)[7]進(jìn)行計分,按照分?jǐn)?shù)的高低進(jìn)行分類：0～1分為陰性或無表達(dá)(-)；2～3分則是弱陽性表達(dá)(±);4～8分是陽性表達(dá)(+)。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用（）進(jìn)行表示，采用秩和檢驗，或 t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組中的TGF-β1及Smad4表達(dá)

觀察組中的TGF-β1的陽性率為75.5%（45/60),對照組的TGF-β1的陽性率為3.3%（2/60)。見表1。而觀察組中的Smad4陽性率為93.3%（56/60)，對照組的Smad4陽性率為 50.0%（30/60)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 2。

表1 觀察組與對照組中的TGF-β1的表達(dá)Table 1 Expression of TGF-β1in observation group and control group

表2 觀察組與對照組中的Smad4的表達(dá)Table 2 Smad4 expression in the observation group and the control group

2.2 TGF-β1及Smad4表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系

TGF-β1及Smad4的表達(dá)與大腸癌分化程度不具有關(guān)系差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；與臨床Dukes分期具有明顯的關(guān)系,并且伴隨著病理特征的進(jìn)展，其陽性率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表 3。

表 3 TGF-β1的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]Table 3 Relationship between TGF-β1expression and clinicopathological characteristics of colorectal cancer[n(%)]

2.3 TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中不同的TNM分期的表達(dá)

TGF-β1及Smad4表達(dá)存在著明顯的下降，與腫瘤的腫瘤分期和分化程度具有著直接的關(guān)系，并且TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中的 I期，II期，III期，IV期分期具有明顯的關(guān)系，TGF-β1及Smad 4的缺失程度隨胃腸腫瘤不同的TNM分期的進(jìn)展而更加嚴(yán)重(P＞0.05)，見表4。

表4 TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中不同的TNM分期的表達(dá)Table 4 Expression of TGF-β1and Smad4 in different TNM stages in colorectal cancer tissues

2.4 兩組患者的生存率比較

經(jīng)過1年時間的隨訪調(diào)查，兩組患者的生存曲線見圖1。

圖1 生存時間Figure 1 Time to live

3 討論

TGF-β1是一種具有多種生物學(xué)活性的多肽生長因子,TGF-β共有3種存在的形式，分別為 TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，這三者之間的生物學(xué)作用非常的相似,其中TGF-β1含量最高所以具有最高的代表性。它可以對于細(xì)胞的增殖、形態(tài)、分化形成雙重作用。陳玉紅等[8]專家學(xué)者發(fā)現(xiàn)TGF-β1可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長，其在組織中的表達(dá)表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.491,P＜0.01）,該因子能有效介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

該研究結(jié)果顯示，觀察組中的TGF-β1的陽性率為75.5%（45/60), 對照組的 TGF-β1的陽性率為 3.3%（2/60)。而觀察組中的Smad4陽性率為93.3%（56/60)，對照組的Smad4 陽性率為 50.0%（30/60)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這與袁學(xué)敏與陳玉紅等[8-9]的TGF-β1與 Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)及意義的研究表達(dá)一致：大腸癌組織中Smad4蛋白的陽性表達(dá)率為44.8%,較正常對照組(95.8%)明顯降低 (P＜0.05);TGF-β1Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.521;P＜0.01)。該研究結(jié)果顯示，有轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中的TGF-β1的表達(dá)水平也會比無轉(zhuǎn)移的大腸癌組織明顯要高,這主要是因為TGF-β1的高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移具有直接的關(guān)系。發(fā)生該作用的可能機(jī)制在于：腫瘤組織中高表達(dá)的 TGF-β1會存在基因突變,并且會減弱細(xì)胞增殖、分化的雙重作用,從而導(dǎo)致的形成與發(fā)生腫瘤；而高表達(dá)的 TGF-β1可以起到刺激腫瘤內(nèi)血管形成的作用，并且還會使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫的監(jiān)視,可能是由于其具有促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制。

Smad4基因在最早的時候是由 Hahn等在胰腺癌中發(fā)現(xiàn)的,并且Smad4又稱之為 DPC4基因。經(jīng)過專家研究表明,Smad4屬于抑癌基因,可以有效地抑制患者的腫瘤細(xì)胞的生長。 Smad 4在 TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中同樣有著極為關(guān)鍵的作用,其發(fā)生缺失或者是突變都有可能會導(dǎo)致細(xì)胞對于 TGF-β1的生長抑制產(chǎn)生耐受,從而促進(jìn)腫瘤的生長[8]。TGF-β信號傳導(dǎo)中的唯一公共個體就是Smad4蛋白,經(jīng)過TGF-β1的刺激,Smad4參與誘導(dǎo) P15(Ink4B)轉(zhuǎn)錄,可以有效的抑制腫瘤細(xì)胞增殖[9]。

綜上所述，經(jīng)過對于 TGF-β1及 Smad4進(jìn)行檢測,可以幫助臨床醫(yī)生更加了解腫瘤的生物學(xué)行為,并且還能夠有效地預(yù)測腫瘤的復(fù)發(fā)傾向,可以術(shù)后其他輔助治療提供有用的信息,從而使腫瘤患者的愈后得到改善。