令狐永會(huì)

云南省文山州中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南文山 663000

重癥肌無力的發(fā)病機(jī)制主要是由于人體神經(jīng)以及肌肉接頭處出現(xiàn)的傳遞障礙導(dǎo)致的，受到抗乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的細(xì)胞免疫依賴性影響，屬于一種自身免疫性疾病[1]?；颊咴诨疾≈竺黠@感到肌肉無力，特別是在運(yùn)動(dòng)以后，病情發(fā)展會(huì)影響到患者神經(jīng)以及肌肉接頭突觸后膜ACh R[2]。經(jīng)過臨床的相關(guān)研究表明，血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體是影響重癥肌無力疾病的重要因素，所以需要在臨床上進(jìn)行檢測(cè)，這樣也有利于重癥肌無力疾病的診斷[3]。該次研究就針對(duì)2017—2018年期間收治的40例重癥肌無力患者以及40名健康體檢患者的血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)及臨床意義進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究的研究對(duì)象全部是患有重癥肌無力患者以及健康體檢者。前者為觀察組，人數(shù)為40例，后者為對(duì)照組，人數(shù)為40名。所有患者都進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。其中重癥肌無力的納入標(biāo)準(zhǔn)為：①疾病患者具有肌肉無力的癥狀，并且在運(yùn)動(dòng)之后肌無力情況加重；②人體內(nèi)部的血清抗AChR抗體滴度升高。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①合并其他重要臟器疾病以及處于妊娠期的婦女；②不配合該次研究的患者。其中觀察組的男性為17例，女性名為23例，年齡范圍在 18～87 歲之間，中位年齡為（55.52±1.34）歲，對(duì)照組的男性名為16名，女性名為24名，年齡范圍在17～86歲之間，中位年齡為（55.42±1.32）歲，比較以上資料發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），該次研究已經(jīng)經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者家屬知情同意。

1.2 方法

首先對(duì)所有參與該次研究的患者進(jìn)行標(biāo)本采集，護(hù)理人員要通知所有患者在規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行空腹靜脈血4 mL抽取，并且將所有采集標(biāo)本進(jìn)行離心處理，處理之后將血清放在4℃的環(huán)境內(nèi)保存，同時(shí)進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗連接素抗體和抗Ryanodine受體抗體的檢測(cè)。首先進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體檢測(cè)，采取的檢測(cè)方式為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，并且采用ELISA方法向已經(jīng)保存?zhèn)溆玫难逑♂?0倍之后進(jìn)行血清去除，將其放在37℃的水域中進(jìn)行甩板去除，持續(xù)時(shí)間為90 min。隨后再放入pH值為7.4的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗，清洗次數(shù)為4次，保證將一些非特異性結(jié)合的物質(zhì)進(jìn)行清除。隨后再加入氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人Ig G 100 μL進(jìn)行水浴，水溫度保持在37℃，持續(xù)60 min，再放入pH值為7.4的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗，清洗次數(shù)為4次，隨后再加入100 μL三甲氧基苯甲醛顯色物進(jìn)行顯色，時(shí)間為15 min[4]?？惯B接素抗體和抗Ryanodine受體抗體最后通過0.50 mmol/L硫酸溶液終止反應(yīng)，在采用波長(zhǎng)為450 nm進(jìn)行光密度值的測(cè)試。其次再進(jìn)行相關(guān)結(jié)果的判斷，對(duì)所有進(jìn)行檢驗(yàn)的患者進(jìn)行在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率的判斷，保證血清抗乙酰膽堿受體抗體的水平在0.469以上為陽性[5]。另外在進(jìn)行抗Titin抗體檢測(cè)的過程當(dāng)中首先使用ELISA方法將所有患者的血液標(biāo)本進(jìn)行血清稀釋10倍，并且和血清抗乙酰膽堿受體抗體檢測(cè)方式一致。隨后進(jìn)行結(jié)果判斷，當(dāng)抗Titin抗體的水平在0.343以上為陽性。最后進(jìn)行抗Ryanodine受體抗體的檢測(cè)，使用ELISA試劑進(jìn)行檢測(cè)，將血液標(biāo)本進(jìn)行血清稀釋10倍，并且對(duì)抗Ryanodine受體抗體進(jìn)行檢測(cè)，最后進(jìn)行結(jié)果判斷，當(dāng)抗Ryanodine受體抗體水平＞0.25的時(shí)候呈陽性[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組患者的血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率情況，而且還要觀察觀察組中早發(fā)型和晚發(fā)型兩種類型患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗連接素抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

將有關(guān)數(shù)據(jù)全部輸入到SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，資料以（）表示，進(jìn)行 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)應(yīng)用（%）表示，行 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同抗體的陽性率比較

觀察組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率要高于對(duì)照組，見表1。

表1 兩組不同抗體的陽性率比較[n(%)]Table 1 Comparison of the positive rates of different antibodies in the two groups[n(%)]

2.2 早發(fā)型和晚發(fā)型在不同抗體中的陽性率比較

觀察組中早發(fā)型重癥肌無力患者為20例，晚發(fā)型重癥肌無力患者為20例，兩種類型疾病患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率有一定的差異，早發(fā)型疾病的陽性率要低于晚發(fā)型，見表2。

表2 早發(fā)型和晚發(fā)型在不同抗體中的陽性率比較[n(%)]Table 2 Comparison of positive rates of early and late hairstyles in different antibodies[n(%)]

3 討論

經(jīng)過大量的臨床研究表明，重癥肌無力疾病的主要發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，被人們所接受的發(fā)病機(jī)制主要是由于人體神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜的煙堿型乙酰膽堿受體出現(xiàn)下調(diào)情況所導(dǎo)致的重癥肌無力。血清抗乙酰膽堿受體抗體是重癥肌無力疾病最主要的抗體之一，該種抗體能夠和人體的神經(jīng)以及肌肉接頭處突觸后膜乙酰膽堿受體進(jìn)行特異性結(jié)合，進(jìn)一步加快了乙酰膽堿受體的內(nèi)化作用同時(shí)通過乙酰膽堿受體的不斷降解，能夠進(jìn)一步加強(qiáng)乙酰膽堿受體的破壞性，從而導(dǎo)致人體內(nèi)部的乙酰膽堿受體數(shù)量大大減少，對(duì)于人體內(nèi)部各種信號(hào)的傳遞產(chǎn)生了阻礙作用，這就是重癥肌無力的主要發(fā)病原因[7]。根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道表明，在患有胸腺瘤的重癥肌無力患者中出現(xiàn)血清乙酰膽堿受體抗體陽性率為80%，那不具有胸腺瘤的重癥肌無力患者在血清乙酰膽堿受體抗體陽性率方面僅有36.8%，具有全身性重癥肌無力的患者在血清乙酰膽堿受體抗體陽性率方面有85%，具有眼肌型重癥肌無力患者的血清乙酰膽堿受體抗體為50%。另外該次研究所檢測(cè)的Titin主要是一種絲狀型的蛋白，一般都存在于脊椎動(dòng)物的骨骼肌中，經(jīng)過生理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)Titin對(duì)于進(jìn)一步控制肌肉結(jié)構(gòu)組成、穩(wěn)定肌肉纖維以及為積極提供彈性的作用具有較大的意義，所以如果人體內(nèi)Titin功能出現(xiàn)障礙，對(duì)于肌肉正常收縮情況也會(huì)產(chǎn)生巨大的影響?？筎itin抗體的主要生理學(xué)機(jī)制就是能夠通過進(jìn)一步加強(qiáng)肌肉纖維的激活速度，從而對(duì)骨骼肌正常結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞。抗Ryanodine受體抗體主要存在于基質(zhì)網(wǎng)中維持鈣離子釋放的通道，對(duì)于人體的纖維膜基質(zhì)往往會(huì)產(chǎn)生一種連接的作用，另外通過該抗體還能夠進(jìn)一步對(duì)Ryanodine受體以及二氫吡啶受體進(jìn)行促進(jìn)和作用，經(jīng)過相關(guān)研究結(jié)果表明，Ryanodine受體以及二氫吡啶受體二者能夠在興奮收縮耦聯(lián)中相互作用，進(jìn)一步加強(qiáng)抗Ryanodine受體抗體自身的鈣離子以及通道的開放性和釋放程度。

在該次研究中，觀察組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率分別為80.0%、70.0%、77.5%，對(duì)照組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率分別為12.5%、7.5%、5.0%，觀察組的陽性率要顯著高于對(duì)照組。根據(jù)不同類型的觀察組疾病可以分成早發(fā)型和晚發(fā)型兩種，比較早發(fā)型和晚發(fā)型兩種類型患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率，發(fā)現(xiàn)早發(fā)型重癥肌無力患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽性率分別為40%、45%、50%，要低于晚發(fā)型重癥肌無力患者（60%、55%、60%）。在張晨紅等[8]的研究中，其研究結(jié)果為重癥肌無力患者血清抗AChR抗體、抗Titin抗體和抗RyR抗體陽性率分別為68.13%(124/182)、64.29%(117/182)和 67.03%(122/182),高于 OND 組(均 P=0.000)和對(duì)照組(均P=0.000);3種血清學(xué)標(biāo)志物同時(shí)陽性,診斷重癥肌無力的靈敏度為41.21%,特異度達(dá)99.40%。

綜上所述，對(duì)重癥肌無力患者進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于疾病的輔助診斷有著重要的意義，能夠有效提高重癥肌無力疾病的診斷效果，也有利于患者進(jìn)行進(jìn)一步的臨床治療。