王進，劉健，彭燕

（1.貴州通鑒司法鑒定所，貴州 遵義 563000；2.貴州省公安廳物證鑒定中心，貴州 貴陽 550000；3.貴陽市白云公安司法鑒定中心，貴州 貴陽 550000）

1 案 例

1.1 簡要案情

某年3月5日，某縣發(fā)生一起強奸致孕案，之后受害人姚某在私人診所內非法實施引產手術，診所私自截留胎盤進行干燥、粉碎、加工處理并作為保健品原料販賣。最后警方根據線索追回疑似受害人姚某引產所留部分胎盤粉，為明確該胎盤粉是否為受害人所留，要求對胎盤粉進行檢驗。

1.2 檢驗過程

對送檢的10 g胎盤粉和受害人姚某的血樣進行檢驗。

1.2.1 采用Chelex-100法提取胎盤粉和姚某血樣的DNA

將胎盤粉置于濾紙上，取胎盤粉適量6份及姚某血樣分別置于0.5mL離心管內，加入10%100mg/mL Chelex-100 試劑 170 μL、10 mg/mL 蛋白酶 K 10 μL，置于56℃恒溫金屬浴保溫2 h，100℃保溫8 min，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 采用M48磁珠法提取胎盤粉的DNA

把胎盤粉傾倒在濾紙上，高頻率抖動使粉末分層，用眼科鑷在胎盤粉中挑選出較大呈片狀的單一細屑10份，分別置于1.5 mL離心管中，加入G2裂解液200μL、2mg/mL蛋白酶K 10μL，56℃金屬浴2h。將離心管放入離心機中，以離心半徑5 cm，13 000 r/min離心5min，將上清液轉移至另一個1.5mL離心管中，加入3倍體積的吸附液（MTL）、30 μL磁珠懸浮液，振蕩15 min，置于磁力架上靜置10 s，棄去上清液，加入500 μL洗滌液，將離心管搖勻后置于磁力架上靜置10 s，棄去上清液，加入80%乙醇溶液500 μL，取出離心管搖勻后置于磁力架上靜置10 s，棄去上清液，用80%乙醇溶液重復洗滌1次，再放置于磁力架上棄去上清液。將離心管置于65℃金屬浴中烘干10min，加入65℃去離子水30μL于離心管中洗脫，高速漩渦振蕩2s，置于磁力架上吸出上清液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 PCR擴增與分型

將上述提取的DNA模板采用AmpF?STRTMIdentifilerTMPlus PCR擴增試劑盒（美國AB公司）在9700型PCR儀（美國AB公司）上進行擴增，擴增模板為2μL，擴增體系為10μL，擴增產物經3130xl型基因分析儀（美國AB公司）電泳檢測，采用GeneMapperTMIDv3.2.1進行分型。

1.3 檢驗結果

6份胎盤粉均檢出相似的混合DNA分型結果（圖1），其中主要成分為一女性個體，該混合DNA分型包含姚某的DNA分型，不排除該樣本的主要成分為姚某的胎盤所留。

圖1 胎盤粉采用Chelex-100法提取的DNA的STR分型結果Fig.1 STR typing results of DNA extracted from placenta powder by Chelex-100 method

10份片狀胎盤粉中有6份成功分型，均為相同單一女性基因分型（圖2），且與姚某基因型相同，認定該胎盤粉為姚某所留。另外4份分型結果顯示部分等位基因丟失。

圖2 胎盤粉采用M48磁珠法提取的DNA的STR分型結果Fig.2 STR typing results of DNA extracted from placenta powder by M48 magnetic bead method

通過上述兩種方法提取后對胎盤粉DNA進行STR分型檢驗，結果顯示，經M48磁珠法提取后獲得的DNA比經Chelex-100法提取后獲得的DNA純度高。

2 討論

胎盤主要由羊膜、葉狀絨毛膜以及底蛻膜組成，是孕婦與胎兒溝通的橋梁，是血液、氧氣、營養(yǎng)交換的工具。同時，胎盤還是一味中藥，稱作紫河車，其中含有大量的蛋白質以及各種酶與激素，具有溫腎益精、補氣養(yǎng)血等功效[1]。具體作用[1]有：（1）增強機體抵抗力。（2）抗感染。胎盤γ-球蛋白含有干擾素，可用于預防和控制病毒感染。（3）激素樣作用。胎盤中可能含有絨毛膜促性腺激素、雌激素及孕激素成分，因而具有這些激素的藥理作用，能顯著促進器官發(fā)育。（4）對血凝的影響。胎盤中含有尿激酶抑制物，能抑制尿激酶對纖維蛋白溶酶原的“活化”作用，妊娠時纖溶活性降低與此有關。凝血因子能穩(wěn)定纖維蛋白凝塊，促進創(chuàng)傷愈合，臨床上可用來治療因凝血因子Ⅻ缺乏而引起的出血患者。所以某些醫(yī)療機構工作人員為了利益會私自截留胎盤進行加工處理后販賣，這類案件近年時有發(fā)生[2]，通過本例可為類似案件的檢驗提供參考。

Chelex-100法提取DNA操作簡便、快速，適用范圍廣。該方法是利用溫度變化和蛋白酶K促使細胞核膜破裂釋放DNA，整個提取過程在一個離心管中進行，可避免二次污染，但是Chelex-100不能有效去除雜質和降解的DNA片段，所以獲得的DNA含量和純度會受到一定的影響[3]。M48磁珠法是利用細胞裂解液促使細胞膜、核膜發(fā)生變化，獲得DNA片段后，以磁珠為載體在吸附液（MTL）環(huán)境中結合DNA，而雜質不被磁珠吸附或結合，再利用磁力架聚集磁珠，雜質在80%乙醇溶液的二次洗滌過程中被吸棄，最后通過洗脫程序，將磁珠上吸附的DNA釋放于水中，得到純度較高的DNA模板[4]。本案中，診所工作人員對胎盤進行干燥粉碎加工處理后販賣，在這一過程中胎盤可能被污染并混合雜質，這給胎盤粉中DNA的提取和檢驗增加了難度。通過Chelex-100法提取胎盤粉DNA后經STR分型得到的結果為混合基因型，可能在制作胎盤粉及運輸包裝過程中被污染并可能含有雜質，同時，常規(guī)Chelex-100法所得的DNA純度較低[5]。采用M48磁珠法提取胎盤粉DNA經STR分型后得到6份圖譜出峰單一、完全；另外4份分型結果顯示部分等位基因丟失，可能是選取粉末量少或在實驗操作過程中存在失誤導致所提取的DNA含量不足，同時，在提取過程中可能存在DNA的損耗[6]。與Chelex-100法相比，M48磁珠法在提取DNA時可以有效去除輕度污染和部分雜質[3]，故通過M48磁珠法獲得的DNA比Chelex-100法獲得的DNA純度要高，STR分型效果更好，并據此最終確定該胎盤粉為受害人姚某所留。

建議此類檢材在進行DNA提取時選用磁珠法，可有效去除雜質，獲得純度較高的模板DNA。在提取微量DNA時，要注意避免檢材的二次污染，在檢材量足夠的情況下，同時多提取幾份檢材的DNA并進行梯度擴增，可對得到的STR分型進行有效對比。總之，在日常檢驗工作中，我們應該根據案件實際情況選取合適的提取方法和試劑以及相應的擴增體系，方能達到理想的效果，為案件偵破提供有力支持。