陳 峰，黨安坤，蓋小君，趙 亭，李秀喆，蘭鄒然

（1.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022；2.煙臺市動物疫病預(yù)防與控制中心，山東煙臺 264003；3.曹縣畜牧服務(wù)中心，山東曹縣 274400；4.海陽市動物疫病預(yù)防與控制中心，山東海陽 265100）

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR） 是由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）感染小反芻獸引起的一種嚴(yán)重的急性、烈性、接觸性傳染病，以高熱、口炎、胃炎、腹瀉和肺炎等為主要特征。PPR 主要通過直接、間接接觸傳染和呼吸道飛沫傳播，潛伏期為4～5 d。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。山羊感染PPRV 后的癥狀較綿羊明顯[1]。本病一般可分為急性型、亞急性型和慢性型3 種。其中：慢性型癥狀輕微，主要為體溫升高，類似感冒；亞急性型癥狀為體溫升高到40～41 ℃，高熱不退，口腔炎癥明顯，有的出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉等；急性型臨床比較少見，發(fā)病迅速，往往發(fā)病后2 d 內(nèi)死亡[2]。

2007 年P(guān)PR 由境外首次傳入我國西藏阿里地區(qū)，隨后疫情迅速得到控制。2013 年底，PPR 再次傳入我國，并波及多個?。▍^(qū)、市）。為有效控制和根除PPR 疫情，山東省根據(jù)《全國小反芻獸疫消滅計劃（2016—2020 年）》及《山東省小反芻獸疫消滅計劃（2016—2020 年）實施方案》的具體要求，對全?。ㄇ鄭u市除外）羊只采取全覆蓋強(qiáng)制免疫政策。為準(zhǔn)確掌握2018—2019 年山東省境內(nèi)的PPR 免疫效果以及病原感染情況，分別于2018 年11 月和2019 年11 月，在全省開展了PPR專項流行病學(xué)調(diào)查，以期為山東省的PPR 防控提供適用、科學(xué)、有效的防控措施。

1 材料與方法

1.1 相關(guān)定義

免疫合格樣品是指經(jīng)PPR 阻斷ELISA 檢測為抗體合格的血清樣品，反之為免疫不合格樣品；免疫合格群體是指免疫樣品合格率≥70%的群體，反之為不合格群體；病原學(xué)陽性樣品是指經(jīng)PPR熒光RT-PCR 檢測為陽性的樣品，反之為病原學(xué)陰性樣品。

1.2 研究群和抽樣單元

1.2.1 研究群 全省所有羊存欄量≥50 只的規(guī)模飼養(yǎng)場以及有羊散養(yǎng)戶的自然村，其中1 個規(guī)模飼養(yǎng)場或1 個自然村內(nèi)所有散養(yǎng)戶存欄羊作為1 個群體。

1.2.2 抽樣單元 群體層選擇每個規(guī)模場和有羊散養(yǎng)戶的自然村，群體內(nèi)選擇所有免疫PPR 疫苗的羊。

1.3 抗體樣品抽樣量計算

根據(jù)全省養(yǎng)殖情況，采用兩階段抽樣方法。

第1 階段，先計算全省專項流行病學(xué)調(diào)查所需的總抽樣場數(shù)，用估計流行率方法，按 95%的置信水平、90%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)往年的測量結(jié)果確定預(yù)期免疫合格率）、5%的可接受誤差[3]、無窮大場群，利用公式（1）計算出的抽樣場群數(shù)為139 個，根據(jù)各市規(guī)?；蝻曫B(yǎng)場和自然村的群體實際情況，按照比例分配到各地市。

其中p為預(yù)期合格率，z為置信水平，e為可接受誤差。

第2 階段，計算所需的抽樣羊只數(shù)量。仍采用估計流行率方法，按 95%的置信水平、90%的預(yù)期免疫合格率（根據(jù)以往的測量結(jié)果確定預(yù)期免疫合格率）、10%的可接受誤差、群體數(shù)量無窮大，計算得出場群內(nèi)需抽取不少于35 只羊的全血。場內(nèi)隨機(jī)選羊，按系統(tǒng)隨機(jī)方法抽樣，如全群數(shù)量小于35 只，則全部采樣。

1.4 病原樣品抽樣量計算

根據(jù)全省規(guī)模場和自然村的養(yǎng)殖情況，采用兩階段抽樣方法。

第1 階段，計算全省所需的總抽樣場數(shù)，采用證明無疫的方法，按照估計場點流行率1%，置信水平95%，依據(jù)公式（2）計算出調(diào)查的場點數(shù)不少于299 個，根據(jù)各地市規(guī)模化羊飼養(yǎng)場和自然村的群體實際情況，按比例分配。

其中n為抽樣個數(shù)，CL 為置信水平，D為群內(nèi)個體數(shù)與預(yù)定流行率的乘積，即群中的陽性動物數(shù)，N為群內(nèi)個體數(shù)，Se 為檢測方法的敏感性。

第2 階段，計算所需的抽樣羊只數(shù)量。仍用證明無疫的方法，按95%的置信水平、3%的預(yù)期流行率[5]、群體數(shù)量無窮大計算，則場群內(nèi)需抽取不少于99 只羊的鼻拭子。場內(nèi)隨機(jī)選羊，按系統(tǒng)隨機(jī)方法抽樣，如全群數(shù)量小于99 只，則全部采集。

1.5 調(diào)查方式與內(nèi)容

采用現(xiàn)場詢問、查閱檔案記錄、填寫調(diào)查表和采樣檢測等方式，主要調(diào)查養(yǎng)殖場（戶）的基本信息、養(yǎng)殖情況、防疫措施、無害化處理和PPR發(fā)病情況等。

采集樣品按照NY/T 541—2016 標(biāo)準(zhǔn)中的相關(guān)要求，妥善保存和運輸。PPRV 抗體檢測，采用ELISA 方法；病原學(xué)檢測，采用熒光RT-PCR 方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 采樣及現(xiàn)場調(diào)查

2018 年共采樣檢測畜場1 481 個，包括規(guī)模羊場763 個、散養(yǎng)戶716 個、市場2 個，共采集免疫血清樣品30 688 份、病原學(xué)樣品8 703 份；2019年共采樣監(jiān)測畜場2 284 個，包括規(guī)模羊場1 380個、散養(yǎng)戶904 個、市場59 個，共采集血清樣品31 769 份、病原學(xué)樣品13 867 份。2018—2019 年各地市采樣檢測場群數(shù)量見表1。

問卷統(tǒng)計結(jié)果顯示：疫病方面，養(yǎng)羊場以細(xì)菌性疾病為主，沒有發(fā)現(xiàn)PPR 疫情；調(diào)運檢疫方面，飼養(yǎng)場（戶）對外調(diào)羊只基本能做到隔離觀察，確保健康后合群飼養(yǎng)，隔離期一般為3～5 d；衛(wèi)生方面，飼養(yǎng)場（戶）基本能做到定期消毒，規(guī)模場措施更為得當(dāng)，一般能做到每日消毒，散養(yǎng)戶消毒時間間隔稍長。

表1 2018—2019 年采樣檢測場群數(shù)量分布 單位：個

2.2 實驗室檢測

2.2.1 抗體檢測 2018 年共檢測羊免疫血清樣品30 688 份，抗體合格28 826 份，平均抗體合格率為93.09%；2019 年共檢測羊免疫血清樣品31 769 份，抗體合格29 666 份，平均抗體合格率為92.90%（表2）。整體來看，山東省PPR 免疫效果較好，各市免疫抗體合格率基本都在90%以上，遠(yuǎn)超過了國家和省級的最低要求，可以確保免疫動物處于有效保護(hù)狀態(tài)。2018 年與2019 年免疫抗體合格率卡方檢驗顯示無顯著差異（χ2=0.003，P=0.956 32，P＞0.05），表明全省PPR 免疫措施得當(dāng)，抗體水平平穩(wěn)。但個別地市PPR 抗體水平有待提高，比如濟(jì)寧市2018 和2019 年的樣品合格率僅為83.15%和79.19%，需要進(jìn)一步加強(qiáng)免疫。

2.2.2 病原學(xué)檢測 2018—2019 年所有病原學(xué)樣品檢測全部為陰性。

表2 2018—2019 年各地市PPR 抗體檢測結(jié)果

3 討論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)養(yǎng)殖場（戶）比較重視PPR 防控，對PPR 免疫持樂觀態(tài)度，從流行病學(xué)調(diào)查的總體情況看，全省PPR 免疫狀況良好，未檢出病原，也未發(fā)現(xiàn)臨床病例，說明全省PPR防控形勢較好，疫情發(fā)生風(fēng)險較低。但本次調(diào)查中的場內(nèi)抽樣采用證明無疫方式計算樣本量，設(shè)定的預(yù)期流行率為3%，相對較高，導(dǎo)致樣本量稍低，即使未檢測到病原學(xué)陽性，也無法確定全省不存在病原感染。

雖然山東省的PPR 防控形勢較好，但隨著活羊及其產(chǎn)品的全國流通，PPR的傳入風(fēng)險依然存在，因此PPR 防控工作不可松懈，需要增強(qiáng)防控意識，尤其是散養(yǎng)戶，要嚴(yán)防從疫區(qū)引入羊只，從外地引入的羊只要嚴(yán)格隔離、檢疫。今后還需持續(xù)開展PPR 專項流行病學(xué)調(diào)查，以便為PPR 免疫政策的制定和將來PPR 強(qiáng)制免疫退出提供更加有力的數(shù)據(jù)支撐。

4 結(jié)論

調(diào)查認(rèn)為，山東省PPR 強(qiáng)制免疫效果較好，免疫抗體水平遠(yuǎn)超過國家和省級的最低要求，養(yǎng)殖場（戶）防控意識較強(qiáng)，防控形勢比較理想，PPR發(fā)生風(fēng)險較低。但仍需繼續(xù)加強(qiáng)免疫和調(diào)入羊群的隔離檢疫，持續(xù)開展流行病學(xué)調(diào)查，從而為全省盡快消滅PPR 奠定基礎(chǔ)。