符翔

(廣昌縣人民醫(yī)院，江西 廣昌 344900)

慢性阻塞性肺疾病是常見且多發(fā)的呼吸系統(tǒng)疾病，具有較高的發(fā)病率和病死率，目前已成為全球慢性病第四大死亡病因[1]。細(xì)菌感染是引起慢性阻塞性肺疾病病情加重的重要原因，感染若得不到及時(shí)控制易進(jìn)展為重癥肺炎，患者肺泡、肺間質(zhì)及終末氣道出現(xiàn)嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致急性呼吸窘迫和呼吸衰竭，病情嚴(yán)重者出現(xiàn)全身多器官功能障礙綜合征(MODS)等嚴(yán)重并發(fā)癥[2]，常危及生命。血清前清蛋白(PA)和血清降鈣素原(PCT)是判斷細(xì)菌感染的常用指標(biāo)[3]，在重癥肺炎患者中，上述指標(biāo)水平發(fā)生顯著變化，而在慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者中，應(yīng)用上述指標(biāo)判斷患者預(yù)后鮮有報(bào)道。本研究通過檢測慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者外周血T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性及PCT，PA水平，探討上述指標(biāo)與患者轉(zhuǎn)歸及預(yù)后的關(guān)系。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月—2018年4月收治的54 例慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者作為觀察組，同期選取40 例體檢健康者為對(duì)照組。觀察組男34 例，女20 例，年齡(48.23±8.20) 歲。對(duì)照組男30 例，女24 例，年齡(47.65±6.38) 歲。兩組受試者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。根據(jù)轉(zhuǎn)歸將54 例慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者分為存活組(38 例)和死亡組(16 例)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合2007年修訂版《慢性阻塞性肺疾病診治指南》[4]中關(guān)于慢性阻塞性肺疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；均符合美國感染病學(xué)會(huì)/美國胸科學(xué)會(huì)(IDSA/ATS)[5]中關(guān)于重癥肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；均伴有高熱、氣急及咳膿痰等癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾病及感染性疾??；近1個(gè)月內(nèi)服用免疫抑制劑者。

1.3 方法

健康受試者體檢時(shí)、慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者入院時(shí)、存活者出院時(shí)和死亡者死亡當(dāng)天，在無菌條件下空腹采集2mL外周血，置于0.2%EDTA-K2抗凝管中，取100 μL全血加入CD483混合抗體[鼠抗人CD8-藻紅蛋白(PE)、鼠抗人CD4-異硫氰酸熒光素(CD4-FITC)、鼠抗人CD3-藻紅蛋(PE)-Cy5]和NK細(xì)胞活性測試抗體[鼠抗人CD1+CD56-PE單克隆抗體、鼠抗人CD3-異硫氰酸熒光素(CD3-FITC)]。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照管，避光室溫孵育，向?qū)φ展軆?nèi)加入紅細(xì)胞裂解液，在細(xì)胞儀作用下裂解紅細(xì)胞。采用美國Coulter公司提供的Epocs XL型流式細(xì)胞儀對(duì)表面標(biāo)志CD3+，CD4+，CD8+陽性的細(xì)胞進(jìn)行分離，分析各種細(xì)胞的百分率，計(jì)算CD4+/CD8+，并分析自然殺傷細(xì)胞(NK)的活性值。采集4 mL全血，分離血清待測。采用雙抗體夾心免疫發(fā)光法檢測兩組血清PCT水平，試劑盒由青島漢唐生物科技有限公司提供。采用免疫透射比濁法檢測兩組血清PA水平，試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。采用雙抗體夾心法檢測兩組血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-8(IL-8)，試劑盒由上?？道噬锟萍加邢薰咎峁Ｋ胁僮鞑襟E按試劑盒說明書嚴(yán)格進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 免疫功能指標(biāo)

觀察組CD3+，CD4+，CD4+/CD8+和NK細(xì)胞活性顯著低于對(duì)照組，CD8+顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組受試者免疫功能指標(biāo)比較

2.2 血清PCT和PA水平

觀察組血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8水平顯著高于對(duì)照組，血清PA水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 兩組血清PCT和PA水平比較

2.3 不同轉(zhuǎn)歸患者血清PCT和PA水平比較

存活組患者出院時(shí)檢測的血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8水平顯著低于死亡組患者死亡當(dāng)天所測水平，血清PA水平顯著高于死亡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表3 不同轉(zhuǎn)歸患者血清PCT和PA水平的比較

3 討 論

近年來有研究發(fā)現(xiàn)[6-7]，機(jī)體免疫功能低下及紊亂是導(dǎo)致慢性阻塞性肺疾病患者反復(fù)急性加重的一個(gè)重要因素。T淋巴細(xì)胞是常用于評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，研究表明[8]，CD4+T淋巴細(xì)胞在機(jī)體抗結(jié)核免疫中有著相當(dāng)獨(dú)立的作用，而CD+8細(xì)胞屬于抑制性T細(xì)胞。慢性阻塞性肺疾病患者外周血中CD8+T淋巴細(xì)胞明顯增加，主要作用為溶解感染后失去免疫活性的靶細(xì)胞，促進(jìn)其凋亡，并可促進(jìn)細(xì)菌的暴露及病灶的清除[9]。CD3+細(xì)胞數(shù)量的減少表示機(jī)體整體細(xì)胞免疫水平的下降，而CD4+/CD8+的降低代表機(jī)體T淋巴細(xì)胞亞群比例失衡，即機(jī)體免疫功能異常，會(huì)影響機(jī)體IL-4，IL-6及IL-10的表達(dá)水平[10]，因此CD4+/CD8+常被作為疾病預(yù)后的重要指標(biāo)。相關(guān)研究顯示[11]，重癥感染能夠?qū)е聶C(jī)體T淋巴細(xì)胞凋亡，引發(fā)T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的改變，免疫功能低下與重癥感染形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致患者病情迅速加重。慢性阻塞性肺疾病患者由于呼吸道有細(xì)菌定植、患者熱量攝入不足、呼吸功能受阻、機(jī)體發(fā)熱等因素，若增加其能量消耗，會(huì)引起免疫功能進(jìn)一步下降，從而影響治療效果[12]。PA是機(jī)體處于急性感染時(shí)肝臟細(xì)胞合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一。目前研究顯示[13]，PA是人體非特異性宿主防御物質(zhì)，可清除感染過程中病原體釋放入血液的各種毒性代謝物，同時(shí)能夠被毒性代謝物消耗。在急性感染時(shí)，患者機(jī)體PA雖處于快速合成狀態(tài)，但由于清除毒性代謝物，其外周血PA濃度急劇下降，尤其是細(xì)菌感染時(shí)下降程度更加明顯。國外學(xué)者認(rèn)為[14]，細(xì)菌感染所致的機(jī)體應(yīng)激、發(fā)熱、缺氧會(huì)導(dǎo)致機(jī)體蛋白分解增加，并出現(xiàn)負(fù)氮狀態(tài)，這與PA水平下降有關(guān)。PCT屬于降鈣素(CT)的前肽物質(zhì)，是由116個(gè)氨基酸組成的可溶性多功能免疫調(diào)節(jié)糖蛋白。血清PCT是診斷全身感染的重要標(biāo)志物，同時(shí)在重癥肺炎診斷中有著較高應(yīng)用價(jià)值[15]。TNF-α和IL-6是炎癥反應(yīng)中首先出現(xiàn)的炎性因子，二者水平升高提示機(jī)體已存在初步炎癥反應(yīng)，比常規(guī)C反應(yīng)蛋白靈敏度更高，而IL-8可聚集于炎癥組織，其水平升高也提示出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。TNF-α，IL-6及IL-8等多種炎性因子共同參與調(diào)控機(jī)體炎性病理過程[16]。

本研究觀察組CD3+，CD4+，CD4+/CD8+及NK細(xì)胞活性顯著低于對(duì)照組，CD8+顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者中存在免疫功能抑制，與目前文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]。此外，觀察組血清PCT水平顯著高于對(duì)照組，血清PA水平顯著低于對(duì)照組，存活組血清PCT顯著低于死亡組，血清PA水平顯著高于死亡組，說明在慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者中，血清PCT及PA水平對(duì)于判斷患者預(yù)后具有重要意義。相關(guān)研究證實(shí)[18]，在機(jī)體嚴(yán)重感染初期存在過度炎性反應(yīng)，同時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量促炎因子，起到免疫抑制作用。隨著研究的不斷深入，蔣一雅等[19]指出，嚴(yán)重感染時(shí)免疫抑制與免疫亢進(jìn)并存，二者處于一種復(fù)雜的平衡狀態(tài)下，故Lewis[20]認(rèn)為，在機(jī)體嚴(yán)重感染時(shí)應(yīng)采用免疫刺激聯(lián)合抗炎治療。本研究中，慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者NK細(xì)胞及T細(xì)胞亞群數(shù)量均發(fā)生改變，表明患者存在免疫抑制，而存活組患者血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8顯著低于死亡組，血清PA水平顯著高于死亡組。故在慢性阻塞性肺疾病合并重癥肺炎患者中，抗感染與調(diào)控免疫功能對(duì)于改善預(yù)后具有同等積極作用。