蓬青梅，李 敏

(1.西南醫(yī)科大學(xué)，四川 瀘州 646000；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院兒科，四川 成都 610072)

反復(fù)喘息的發(fā)生是兒童常見的呼吸道癥狀，源于呼吸道高反應(yīng)性，甚至有部分患兒反復(fù)喘息的發(fā)作就是哮喘的早期表現(xiàn)[1]。目前認(rèn)為兒童哮喘的發(fā)生與TH1/TH2的失衡、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)的調(diào)節(jié)作用有關(guān)[2]。本研究通過測定反復(fù)喘息患兒血清25羥維生素D3及相關(guān)細(xì)胞因子水平，分析25羥維生素D3與TH1/TH2的平衡變化、Tregs細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及氣道嗜酸性炎癥程度之間的的關(guān)系，探討25羥維生素D3參與反復(fù)喘息的可能發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供一定的方向和依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年4月至2019年4月在四川省人民醫(yī)院兒科就診的6月至5歲齡兒童，納入標(biāo)準(zhǔn)：A組(反復(fù)喘息組)，其中A1組為API指數(shù)陽性組，A2組為API指數(shù)陰性組，A1組：有至少2個項(xiàng)次要危險因素或1項(xiàng)主要危險因素且一年內(nèi)至少喘息發(fā)作4次。主要危險因素：①存在吸入變應(yīng)原過敏；② 有特應(yīng)性皮炎；③父母有哮喘病史；次要危險因素：①發(fā)生與感冒無關(guān)的喘息癥狀；②外周靜脈血EOS比例 ≥4%；③確診為食物過敏[3]。A2組：出生至今發(fā)生喘息次數(shù)≥3而上述預(yù)測指標(biāo)為陰性。B組(肺炎組)：確診為感染性肺炎但無喘息史、過敏史、哮喘家族史的患兒。C 組(健康組)：我院健康體檢兒童，既往無喘息史、過敏史及哮喘家族史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①1月內(nèi)服用過免疫調(diào)節(jié)劑的患兒。②患肺氣管支氣管和血管發(fā)育異常或不良、胃食管反流、原發(fā)性纖毛運(yùn)動障礙、氣道腫瘤、支氣管淋巴結(jié)結(jié)核、異物吸入、先天性喉湍鳴、喉噗等基礎(chǔ)疾病的患兒。③早產(chǎn)、出生有缺氧窒息史、父母吸煙的患兒。本研究所有患兒家屬均知情同意，通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。各組實(shí)驗(yàn)對象均為20例，且性別、年齡及體重等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。見表1。

表1 各組一般資料比較

1.2 檢測方式取入組兒童肘靜脈血2 ml用于流式細(xì)胞學(xué)方式檢測γ干擾素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)濃度，2 ml于普通管室溫下靜置半小時洗滌離心后取血清用于質(zhì)譜法檢測25羥維生素D3濃度及ELISA方式檢測免疫球蛋白E(IgE)濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組25羥維生素D3以及各因子差異比較采用方差分析。使用直線相關(guān)分析各組25羥維生素D3與各因子之間的相關(guān)性。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組25羥維生素D3及各因子水平分析①25羥維生素D3水平：A組(反復(fù)喘息組)低于B組(肺炎組)及C組(健康組)，且API指數(shù)陽性組最低(P< 0.05)，B、C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。②IFN-γ/IL-4及IL-10水平：反復(fù)喘息組低于B組及C組，且API指數(shù)陽性組最低，B組高于C組(P< 0.05)。③IgE水平：反復(fù)喘息組高于B組及C組，且API指數(shù)陽性組最高，B組高于C組(P< 0.05)。見表2。

表2 各組25羥維生素D3及各因子水平分析

a與A2組比較，b與B組比較，c與C組比較，P< 0.05

2.2 各組血清25羥維生素D3與各因子間的相關(guān)性分析反復(fù)喘息組中API陽性組(A1組)和API陰性組(A2組)25羥維生素D3水平與IL-10水平呈正相關(guān)，與IFN-γ/IL-4、IgE水平呈負(fù)相關(guān)。肺炎組(B組)及健康組(C組)無相關(guān)性(P> 0.05)。見表3。

表3 各組血清25羥維生素D3與各因子間的相關(guān)性分析

3 討論

反復(fù)喘息的發(fā)生主要與肺發(fā)育不良、病毒感染以及哮喘發(fā)病等因素相關(guān)，其中有部分反復(fù)喘息患兒實(shí)際就是哮喘患者，早期準(zhǔn)確對這類患兒進(jìn)行病因識別及有效干預(yù)尤其重要。目前廣泛認(rèn)為哮喘的發(fā)生與免疫系統(tǒng)TH1/TH2的失衡以及Tregs的調(diào)節(jié)功能下降有關(guān)，即I型樹突狀細(xì)胞成熟障礙，TH2細(xì)胞分化發(fā)育占優(yōu)勢，其分泌的細(xì)胞因子如IL-4等增多，B細(xì)胞產(chǎn)生IgE的能力增強(qiáng)，同時TH1數(shù)量及功能受抑制，其相關(guān)細(xì)胞因子如IFN-γ分泌減少[4]，Tregs細(xì)胞產(chǎn)生IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β1等細(xì)胞因子抑制TH2的功能減弱，不能維持外周免疫耐受，綜合因素誘發(fā)氣道的變態(tài)反應(yīng)和慢性炎癥[5]。本研究中反復(fù)喘息組IFN-γ/IL-4、IL-10明顯較低，IgE明顯較高，證實(shí)了反復(fù)喘息患兒確實(shí)存在不同程度的TH1/TH2失衡及Tregs細(xì)胞抑制而造成的機(jī)體全身或局部的免疫紊亂。

目前文獻(xiàn)報道，維生素D受體(Vitamin D receptor，VDR)在很多免疫細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，25羥維生素D3可通過與相關(guān)免疫細(xì)胞中的VDR結(jié)合來發(fā)揮其調(diào)節(jié)免疫的功能[6]。研究證實(shí)在IFN-γ基因的啟動子區(qū)域存在負(fù)性調(diào)控的維生素D反應(yīng)原件，當(dāng)25羥維生素D3與VDR特異性結(jié)合，活化的VDR與維甲酸X受體結(jié)合為二聚體，二聚體與維生素D反應(yīng)原件結(jié)合能減少IFN-γ的生成，Th1細(xì)胞的分化成熟受到抑制[7]，同時25羥維生素D3可上調(diào)TH2細(xì)胞發(fā)育的一個轉(zhuǎn)錄因子即GATA結(jié)合蛋白3的表達(dá)，Th2細(xì)胞分化活躍，表明25羥維生素D3會引起或加重反復(fù)喘息的發(fā)生[7]；但也有研究證實(shí)25羥維生素D3可抑制T淋巴細(xì)胞中的NF-λB[8，9]，減少bic基因轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致微小RNA-155的減少和SOCSI蛋白的增加來抑制Toll樣受體4，CD4+T細(xì)胞受到刺激后活化TH1細(xì)胞，抑制TH2細(xì)胞[10]，表明25羥維生素D3對反復(fù)喘息患兒是一個保護(hù)因素，推測25羥維生素D3發(fā)揮不同作用可能與其濃度水平有關(guān)。同時25羥維生素D3還可以活化Tregs細(xì)胞，它通過分泌較多的IL-10及TGF-β來抑制TH2細(xì)胞[11]，其相關(guān)細(xì)胞因子分泌減少，可減緩變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，調(diào)節(jié)機(jī)體對過敏原的耐受及抗原引起的免疫炎癥反應(yīng)，從而改善氣道炎癥，緩解反復(fù)喘息癥狀[12，13]。本研究發(fā)現(xiàn)反復(fù)喘息組25羥維生素D3、IFN-γ/IL-4以及IL-10處于低水平，而IgE水平較高，同時25羥維生素D3水平與IL-10水平正相關(guān)，與IFN-γ/IL-4及IgE水平負(fù)相關(guān)，表明在25羥維生素D3不足或缺乏的狀態(tài)下可以使TH1/TH2失衡從而加重反復(fù)喘息的發(fā)生，但處于較高濃度水平情況下可使TH1處于優(yōu)勢，同時增強(qiáng)Tregs細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用從而糾正反復(fù)喘息的發(fā)生，所以推測較高水平的25羥維生素D3確實(shí)是反復(fù)喘息患兒的保護(hù)因素，但具體分界濃度水平需進(jìn)一步研究。

綜上，25羥維生素D3對TH1/TH2的平衡及Tregs的調(diào)節(jié)作用有作用，其血清水平低下是反復(fù)喘息發(fā)生的危險因素，同時反復(fù)喘息組API指數(shù)陽性患兒與API指數(shù)陰性患兒相比25羥維生素D3、IFN-γ/IL-4及IL-10水平較低，IgE水平較高，提示25羥維生素D3水平與API預(yù)測指數(shù)在評估反復(fù)喘息患兒發(fā)生哮喘的風(fēng)險上有一致性。所以25羥維生素D3可發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫的生物學(xué)功能，期待為反復(fù)喘息患兒的治療提供新思路，為最終降低哮喘發(fā)病率提供新的預(yù)防措施。