符云 付兵 郭曉奇 吳亞梅 馬志洲 王廣軍

摘 要 在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5 g·kg-1、1.0 g·kg-1和1.5 g·kg-1的自制中草藥制劑，配制成3種試驗(yàn)飼料，以基礎(chǔ)飼料為對(duì)照組飼料，每處理設(shè)3個(gè)平行樣，對(duì)體長(zhǎng)為6～8 cm的凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行為期60 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，每20 d取樣1次，以相對(duì)增重率、成活率為指標(biāo)，探討了中草藥制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)效應(yīng)的影響;以血清中溶菌酶（LZM）、一氧化氮合酶（NOS）、堿性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性為指標(biāo)，探討了中草藥制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫效應(yīng)的影響。結(jié)果表明：在飼料中添加一定量的中草藥制劑，可以顯著提高凡納濱對(duì)蝦的體重增加倍數(shù)并降低飼料系數(shù)（P<0.05）。試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦血清中的LZM、NOS、AKP和SOD等活性均高于對(duì)照組。結(jié)果證實(shí)，試驗(yàn)中的中草藥制劑具有顯著促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和提高凡納濱對(duì)蝦機(jī)體免疫能力的作用，建議在實(shí)際生產(chǎn)中的添加量為1.0 g·kg-1較為合適。

關(guān)鍵詞 中草藥;凡納濱對(duì)蝦;生長(zhǎng);免疫

凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vanamei）又稱(chēng)南美白對(duì)蝦，主要生長(zhǎng)于太平洋西海岸至墨西哥灣中部。1988年我國(guó)引進(jìn)該蝦后，其年產(chǎn)量占全國(guó)蝦類(lèi)年總產(chǎn)量的40%以上，逐漸成為我國(guó)主要的養(yǎng)殖蝦類(lèi)，特別是在該蝦淡化養(yǎng)殖成功后，在內(nèi)陸地區(qū)廣泛開(kāi)展養(yǎng)殖，現(xiàn)階段已經(jīng)發(fā)展到甘肅、青海等地。即使在西藏，目前也有養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的報(bào)道[1]。隨著凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)域的不斷擴(kuò)大，其養(yǎng)殖面積也在逐年增加，對(duì)苗種的需求也進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致一些苗種場(chǎng)對(duì)苗種的培育和選育就變得不夠重視，苗種的近親繁殖現(xiàn)象十分普遍，種質(zhì)退化嚴(yán)重，對(duì)疾病的抵抗力逐漸變?nèi)?。加上近年?lái)環(huán)境污染嚴(yán)重，周邊水環(huán)境惡化，病原菌增多，引起養(yǎng)殖生產(chǎn)中的發(fā)病率增加，對(duì)凡納濱對(duì)蝦的養(yǎng)殖造成了毀滅性打擊，養(yǎng)殖過(guò)程中大量死亡的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中，有盈利的一般不超過(guò)20%。養(yǎng)殖環(huán)境的變化也導(dǎo)致微生物性病原的大量繁殖。傳統(tǒng)的化學(xué)藥物大量應(yīng)用和抗生素的濫用，致使病原菌的耐藥性增強(qiáng)，藥物的效果也越來(lái)越不明顯，其對(duì)環(huán)境的毒副作用也日益受到人們的詬病。此外，隨著社會(huì)發(fā)展，人們對(duì)自身的健康越來(lái)越重視，對(duì)包括水產(chǎn)品在內(nèi)的食品安全要求越來(lái)越高，一些傳統(tǒng)的化學(xué)制劑、抗生素類(lèi)產(chǎn)品在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用必將退出歷史舞臺(tái)。所以，在保證養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦正常生長(zhǎng)的情況下，增強(qiáng)其自身的免疫能力、開(kāi)發(fā)新的免疫增強(qiáng)劑成為凡納濱對(duì)蝦營(yíng)養(yǎng)與飼料研究的重點(diǎn)[2]。

多年來(lái)，中草藥因具有副作用小、價(jià)格低廉、沒(méi)有殘留等特點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，且在水產(chǎn)養(yǎng)殖中逐漸顯露出良好的應(yīng)用效果，如在提高機(jī)體的免疫功能、促進(jìn)生長(zhǎng)、增加養(yǎng)殖效益以及提升水產(chǎn)品的肉質(zhì)等方面，顯示出化學(xué)藥物難以達(dá)到的優(yōu)勢(shì)，符合了目前“綠色、健康、高效、生態(tài)”的綠色養(yǎng)殖發(fā)展理念。中草藥來(lái)源于天然植物，含有多糖類(lèi)、氨基酸、維生素、酶類(lèi)、油脂、蛋白質(zhì)以及生物堿等有利于機(jī)體生長(zhǎng)的物質(zhì)。作為外源性功能飼料成分，具有提供額外營(yíng)養(yǎng)、加快生長(zhǎng)和增強(qiáng)免疫功能的作用[3-7]。

試驗(yàn)探討了在凡納濱對(duì)蝦飼料中加入一種自制的中草藥制劑，評(píng)價(jià)分析了其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、飼料轉(zhuǎn)化率以及免疫效果的影響，探討中草藥制劑的促生長(zhǎng)和提高免疫力的機(jī)制，為中草藥制劑在凡納濱對(duì)蝦無(wú)公害養(yǎng)殖中的大面積使用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中草藥制劑

中草藥制劑由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所自行研發(fā)配制，配方參考相關(guān)文獻(xiàn)，結(jié)合最近幾年的工作基礎(chǔ)，中草藥添加劑主要成分是杜仲15%、黃芪20%、甘草15%、陳皮5%、金銀花15%、黃連5%、魚(yú)腥草10%和白術(shù)10%等。將上述原料依次混合、攪拌、粉碎，最后過(guò)篩（100目）備用。

1.1.2 試驗(yàn)用蝦

試驗(yàn)所需要的對(duì)蝦由廣州金洋水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供，試驗(yàn)凡納濱對(duì)蝦在試驗(yàn)開(kāi)始前先在試驗(yàn)容器內(nèi)暫養(yǎng)一個(gè)星期，觀察無(wú)異常后才用于試驗(yàn)。挑選健康、無(wú)病、健壯、外表無(wú)傷、大小一致的凡納濱對(duì)蝦飼養(yǎng)，所取蝦均長(zhǎng)為（5.92±0.48）cm、均重為（1.01±0.15）g。

1.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)在珠江水產(chǎn)研究所試驗(yàn)基地的車(chē)間內(nèi)開(kāi)展。

1.1.4 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在6 m3的小型塑料桶內(nèi)進(jìn)行，水深為1.1～1.2 m。試驗(yàn)所使用的水來(lái)自附近的池塘，經(jīng)過(guò)濾后用于試驗(yàn)。考慮到凡納濱對(duì)蝦為海水蝦的習(xí)性，加入了一定的粗鹽，使試驗(yàn)水的鹽度為1～2。試驗(yàn)期間溫度為常溫，在21.0～30.0 ℃。整個(gè)試驗(yàn)期間連續(xù)用羅茨鼓風(fēng)機(jī)充氣，使溶解氧維持在5.0 mg·L-1以上。

1.2 試驗(yàn)方法

中草藥復(fù)合制劑的使用量為自變量，設(shè)計(jì)3個(gè)不同的添加水平，分別為A組（每噸飼料500 g）、B組（每噸飼料1 000 g）和C組（每噸飼料1 500 g），以不添加的飼料為對(duì)照組。每組分別設(shè)置3個(gè)重復(fù)。每個(gè)重復(fù)組投放60尾凡納濱對(duì)蝦。飼料基礎(chǔ)配方如表1所示。

1.3 試驗(yàn)期間的管理

整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程飼料的投喂量按照蝦體重的6%～8%投喂，同時(shí)根據(jù)具體的實(shí)際情況酌情調(diào)控。每日3次投喂，分別在8：00—9：00、12：00—13：00和16：00—17：00。在投喂2 h后收集并處理殘餌和糞便，每7 d換1/3的養(yǎng)殖水。

1.4 生長(zhǎng)指標(biāo)

試驗(yàn)周期為60 d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)統(tǒng)計(jì)每個(gè)容器內(nèi)蝦的存活數(shù)并計(jì)數(shù)成活率，并對(duì)每個(gè)容器內(nèi)的蝦全部稱(chēng)重。按照公式1～3分別計(jì)算增重倍數(shù)、餌料系數(shù)和成活率。

1.5 相關(guān)免疫評(píng)價(jià)指標(biāo)的取樣

在試驗(yàn)開(kāi)始后的第20 d、40 d和60 d，每個(gè)試驗(yàn)容器內(nèi)隨機(jī)取3尾蝦，取其尾部肌肉，準(zhǔn)確稱(chēng)量重量后，將樣品放在冰浴中勻漿，加入0.9%的生理鹽水，調(diào)至濃度為0.1 g·mL-1。離心機(jī)溫度調(diào)至4 ℃，將勻漿液在4 000 r·min-1離心10 min后，取上清液備用。

試驗(yàn)選取一氧化氮合酶（NOS）、溶菌酶（LZM）、堿性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）作為免疫評(píng)價(jià)指標(biāo)，以上指標(biāo)均采用南京建成生物公司的試劑盒測(cè)定。

1.8 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Ducans法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 添加中草藥制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)情況的影響

在對(duì)蝦的飼料中添加自制的中草藥制劑投喂凡納濱對(duì)蝦后，對(duì)其生長(zhǎng)和飼料系數(shù)等影響見(jiàn)表2。從表中可知，經(jīng)過(guò)60 d的飼養(yǎng)，各試驗(yàn)組的增重倍數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），而成活率無(wú)顯著差異（P>0.05）。對(duì)于飼料系數(shù)，表現(xiàn)為C組顯著低于與其他各組（P<0.05）。

2.2 飼料中加入中草藥制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫指標(biāo)的影響

超氧化物歧化酶（SOD）是一種抗氧化性金屬蛋白酶，能通過(guò)歧化反應(yīng)清除掉體內(nèi)過(guò)多的自由基，從而對(duì)生物體的健康起到保護(hù)作用。由表3可知，飼喂20 d和40 d，各試驗(yàn)組SOD活性均高于對(duì)照組（P<0.05），其中B組SOD活性最高，而A組和C組之間差異不顯著（P>0.05）;投喂60 d，各試驗(yàn)組之間差異不顯著（P>0.05），但都顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。

一氧化氮合酶（NOS）可催化L-精氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)橐谎趸∟O）。NO具有很好的抗氧化應(yīng)激，能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞吞噬病原體，如一些寄生蟲(chóng)、細(xì)菌和真菌等。從表3可知，投喂20 d，各試驗(yàn)組NOS活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其中A組NOS活性最高;投喂40 d 和60 d，各試驗(yàn)組NOS活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且C組顯著高于A、B兩組（P<0.05），而A組和B組之間差異不顯著（P>0.05）。

堿性磷酸酶（AKP）是機(jī)體中的一個(gè)外酶。研究表明，當(dāng)機(jī)體的排泄系統(tǒng)出現(xiàn)異常時(shí)，有可能會(huì)引起AKP的升高。從表3可知，投喂20 d和40 d，B、C組中AKP活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且兩組之間也存在顯著差異（P<0.05），但A組和對(duì)照組之間沒(méi)有顯著差異;投喂60 d，各試驗(yàn)組和對(duì)照組之間存在顯著差異（P<0.05），但C組顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。

溶菌酶（LZM）的作用機(jī)理主要是可以水解致病菌中的粘多糖，是一種堿性酶。此外，LZM還可以直接同病毒蛋白結(jié)合，因此具有抗菌、消炎與抗病毒的功能。由表3可知，投喂20 d，各試驗(yàn)組中LZM活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）;投喂40 d，各組LZM活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且A組與B、C組之間存在顯著差異（P<0.05）;投喂60 d，各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

3 討論

國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究表明，在飼料中添加一種或者數(shù)種中草藥復(fù)合制劑可以提高凡納濱對(duì)蝦、羅氏沼蝦等蝦類(lèi)的免疫能力，從而提高其對(duì)病原菌的抵抗力[4，7]。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，添加自制的中草藥制劑的試驗(yàn)組，無(wú)論是體重增加倍數(shù)、飼料系數(shù)還是4種與免疫相關(guān)的酶活指標(biāo)都與對(duì)照組存在顯著差異，說(shuō)明試驗(yàn)所配制的中草藥制劑具有良好的促進(jìn)生長(zhǎng)和增強(qiáng)免疫力的作用。

3.1 中草藥與生長(zhǎng)

中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面已有廣泛的應(yīng)用，且很多的研究表明，一些中草藥，如神曲、麥芽、甘草等含有豐富的維生素、微量元素等可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的因子，這些營(yíng)養(yǎng)因子的存在可以協(xié)助增加養(yǎng)殖動(dòng)物的消化功能，促進(jìn)吸收，降低餌料系數(shù)[6]。此次試驗(yàn)的中草藥制劑成分如黃芪等，含有甜菜堿、膽堿、氨基酸、糖類(lèi)、黃烷化合物、蛋白質(zhì)和鐵、鈣、磷、硒、鋅、銅、錳等多種微量元素，可能是促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)的原因之一。中草藥及其混合物應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)越來(lái)越多，中草藥制劑在畜禽中的應(yīng)用表明，其不僅可提高養(yǎng)殖產(chǎn)品的日增重，還能顯著提高飼料轉(zhuǎn)化效率并促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)。中草藥制劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖研究發(fā)現(xiàn)，用0.28%的金銀花、人參等投喂牙鲆，可以提高18.9%的增重率，降低11.2%的飼料系數(shù)[8]。在草魚(yú)養(yǎng)殖中使用1.0 g·kg-1的中草藥制劑，可以在草魚(yú)生長(zhǎng)速度和降低飼料系數(shù)方面得到很高的效果[9]。在飼料中添加0.1%的白術(shù)、甘草等，凡納濱對(duì)蝦的體重比對(duì)照組提高了27%以上[10]。江湧等[11]在凡納濱對(duì)蝦飼料中分別添加1.0 g·kg-1的自制中草藥添加劑，可以明顯提高凡納濱對(duì)蝦的日增質(zhì)量率、相對(duì)增長(zhǎng)率、成活率，降低飼料系數(shù)。這些研究結(jié)果都表明中草藥制劑廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)可提高飼料利用率，促進(jìn)生長(zhǎng)，改善養(yǎng)殖效果。

3.2 中草藥制劑與非特異性免疫

中草藥以植物為主，中草藥的利用實(shí)際上就是植物提取物的利用，大多數(shù)中草藥中含有化學(xué)物質(zhì)元素，如核苷酸、有機(jī)酸、多糖和生物堿等。如茶葉中含有的大蒜素、甘草酸、生物堿和黃芪多糖等具有提升機(jī)體免疫能力的功效。有關(guān)中草藥對(duì)養(yǎng)殖蝦類(lèi)免疫功能提升的研究較多[12-16]。蝦類(lèi)屬于一種較為原始的物種，其在抵抗病原體的入侵時(shí)，主要還是依靠非特異免疫防御系統(tǒng)。該系統(tǒng)一般由血淋巴細(xì)胞和體液因子組成，在多種體液因子中，AKP、LZM、AP、T-SOD等活性大小常被用作衡量凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫活性高低的重要指標(biāo)。

王雷等[13]、劉恒等[14]和劉樹(shù)青等[15]的研究證實(shí)了多種天然免疫多糖可以顯著提高凡納濱對(duì)蝦血淋巴中的免疫因子活力，提升機(jī)體的免疫功能。中草藥制劑或者一些植物提取物在投喂凡納濱對(duì)蝦后，其血清中的溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP能夠得到明顯的增強(qiáng)[16]。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，凡納濱對(duì)蝦攝食一定劑量的中草藥后，肌肉組織中的SOD、NOS、AKP、LZM都有相應(yīng)的提高，表明試驗(yàn)凡納濱對(duì)蝦機(jī)體內(nèi)的非特異性免疫能力得到了提升，建議在實(shí)際生產(chǎn)中的添加量為1.0 g·kg-1。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張井增，馬建軍.南美白對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展及瓶頸綜述[J].河北漁業(yè)，2018（9）：1.

[2] 陳健，李良玉，楊壯志，等.南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖現(xiàn)狀、存在問(wèn)題及發(fā)展對(duì)策[J].漁業(yè)致富指南，2018（16）：16-18.

[3] 唐建勛.水產(chǎn)動(dòng)物疾病防治中的中草藥應(yīng)用[J].金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，4（4）：52-54.

[4] 阮國(guó)良，楊代勤，王金龍.漁用中草藥飼料添加劑的研究[J].飼料研究，2004（4）：9-11.

[5] 王海華.中草藥防治水產(chǎn)動(dòng)物疾病及藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2004（4）：37-41.

[6] 王廣軍，謝駿，胡隱昌，等.中草藥添加劑對(duì)日本鰻鱺生長(zhǎng)和非特異性免疫效應(yīng)的研究[J].淡水漁業(yè)，2008，38（6）：38-41.

[7] 葛長(zhǎng)榮，田允波，段綱，等.中草藥餌料添加劑研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[J].云南畜牧獸醫(yī)，1998（4）：10-16.

[8] 王吉橋，孫永新，張劍誠(chéng)，等.金銀花等復(fù)方草藥對(duì)牙鲆生長(zhǎng)、消化和免疫能力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2006，30（1）：90-96.

[9] 姜志勇，王智勇，李志斐.中草藥制劑對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)和非特異性免疫效應(yīng)的研究[J].黑龍江水產(chǎn)，2016（3）：45-48.

[10] 葉建生，王權(quán)，熊良偉，等.復(fù)合中草藥制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（7）：226-227.

[11] 江湧，王廣軍，余德光.中草藥添加劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeusvannamei）生長(zhǎng)和抗病力影響的研究[J].漁業(yè)現(xiàn)代化，2005（4）：35-37.

[12] 郭永軍，邢克智，陳成勛，等.枳實(shí)對(duì)南美白對(duì)蝦健康的影響[J].水利漁業(yè)，2005，25（4）：99-101.

[13] 王雷，李光友.口服免疫藥物對(duì)養(yǎng)殖中國(guó)對(duì)蝦病害防治作用的研究[J].海洋與湖沼，1994，25（5）：486-491.

[14] 劉恒，李光友.免疫多糖對(duì)養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦作用的研究[J].海洋與湖沼，1998，29（2）：113-117.

[15] 劉樹(shù)青，江曉路，牟海津，等.免疫多糖對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血清溶菌酶、磷酸酶和過(guò)氧化物酶的作用[J].海洋與湖沼，1999，30（3）：278-283.

[16] 王宜艷，孫虎山，李光友.復(fù)合免疫藥物對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血淋巴氧化酶和抗氧化酶活力的影響[J].海洋科學(xué)進(jìn)展，2002，20（3）：79-83.

（責(zé)任編輯：趙中正）