徐丹洋，張金星，王 舒，武 雯，王春霞

(1.南通市食品藥品監(jiān)督檢驗中心檢驗二室，江蘇 南通226006； 2.南通市中醫(yī)院急診科，江蘇 南通 226001; 3.南通市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 南通 226001)

葛根芩連湯出自張仲景《傷寒論》，由葛根、黃芩、黃連和甘草組成[1]。南通市中醫(yī)院的芩連瀉痛配方顆粒是在此基礎(chǔ)上加醋延胡索、大黃等，功效以清熱燥濕、分利止瀉為主，輔以理氣活血止痛，治療證屬濕熱內(nèi)蘊(yùn)的急性腸胃炎，取得了較好的臨床效果。中藥配方顆粒便于藥房工作者調(diào)配、復(fù)核，可減少工作量，提高工作效率。配方顆粒為單味中藥飲片煎煮后干燥而產(chǎn)生的顆粒，在服用之前再按照醫(yī)師開具的處方配伍。很多患者擔(dān)心其與中藥飲片按照先煎后下或同煎原則煎煮后所得的傳統(tǒng)湯劑存在區(qū)別。也有專家質(zhì)疑顆粒劑無法體現(xiàn)中藥飲片真?zhèn)舞b別和炮制質(zhì)量鑒別的過程[2]。本研究以經(jīng)臨床研究證實與西藥對照組效果相當(dāng)?shù)能诉B瀉痛配方顆粒為研究對象，選擇15個有效成分作為質(zhì)量控制的指標(biāo)成分，采用超高效液相色譜(ultra-high performance liquid chromatography，UPLC)法，以特征圖譜比較配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片湯劑的區(qū)別。高效液相色譜法通過特征圖譜結(jié)合多成分分析，可相對全面體現(xiàn)復(fù)方中所含化學(xué)成分，目前中藥特征圖譜研究多采用該方法作為多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式，已成為被國內(nèi)外研究人員廣泛認(rèn)可的中藥質(zhì)量評價模式[3-4]。

1 材料

1.1 儀器

Waters H-class型超高效液相色譜儀(美國沃特世)；CPA225D型電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器(中國)有限公司]；KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；MT-FE20型pH計(梅特勒-托利多公司)。

1.2 藥品與試劑

中藥配方顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司)：葛根(批號為18081156)，黃芩(批號為18081451)，黃連(批號為18101724)，甘草(批號為18091111)，醋延胡索(批號為18082481)，白芍(批號為18100151)，連翹(批號為18021021)，大黃(批號為18061591)。中藥飲片(南通市三越中藥飲片有限公司)：葛根(批號為180917)，黃芩(批號為181121)，黃連(批號為181016)，甘草(批號為181018)，醋延胡索(批號為180928)，白芍(批號為181004)，連翹(批號為180423)，大黃(批號為180926)。對照品：黃芩苷(批號為110715-201720，含量為93.5%)，葛根素(批號為110752-201615，含量為95.4%)，大豆苷(批號為111738-201302，含量為91.3%)，鹽酸巴馬汀(批號為110732-201611，含量為86.8%)，鹽酸小檗堿(批號為110713-201613，含量為86.8%)，鹽酸藥根堿(批號為110733-201108，含量為90.3%)，芍藥苷(批號為110736-201741，含量為95.7%)，甘草酸銨(批號為110731-201619，含量為93.0%)，甘草苷(批號為 111610-201106，含量為93.7%)，延胡索乙素(批號為110726-201718，含量為99.6%)，漢黃芩素(批號為111514-201706，含量為100%)，大黃素(批號為111595-201808，含量為97.9%)，大黃酚(批號為110796-201520，含量為99.2%)，漢黃芩苷(批號為 112002-201702，含量為98.5%)，黃芩素(批號為111595-201808，含量為97.9%)，上述對照品均購自國家食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，柱溫30 ℃，流動相A為含1%冰醋酸的20 mmol/L醋酸銨溶液，以三乙胺調(diào)節(jié)pH為4.3，流動相B為乙腈，梯度洗脫(洗脫程序見表1)，流速為0.2 ml/min，進(jìn)樣量為1 μl，檢測波長為254 nm[5]。系統(tǒng)適用性考察結(jié)果顯示，各組分之間分離度均符合規(guī)定，理論板數(shù)均>2 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取各對照品，分別用70%甲醇溶解，制成對照品溶液。精密量取各對照品溶液1 ml混合，搖勻，制成含葛根素0.20 mg/ml、大豆苷0.11 mg/ml、芍藥苷0.15 mg/ml、甘草苷0.14 mg/ml、黃芩苷0.05 mg/ml、鹽酸藥根堿0.18 mg/ml、延胡索乙素0.15 mg/ml、漢黃芩苷0.05 mg/ml、鹽酸巴馬汀0.21 mg/ml、鹽酸小檗堿0.28 mg/ml、黃芩素0.20 mg/ml、甘草酸銨0.15 mg/ml、漢黃芩素0.22 mg/ml、大黃素0.05 mg/ml和大黃酚0.03 mg/ml的混合對照品溶液。

表1 梯度洗脫程序

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 配方顆粒供試品溶液：取1劑劑量的配方顆粒，加沸水200 ml沖泡，使完全分散溶解，放冷，繼續(xù)攪拌使混勻，精密量取15 ml置于150 ml錐形瓶中，加甲醇35 ml，混勻，超聲(功率300 W，頻率33 kHz)40 min，過微孔濾膜(0.22 μm)，取續(xù)濾液備用。

2.3.2 中藥飲片供試品溶液：取1劑劑量的中藥飲片，加水400 ml，浸泡30 min，加熱煎煮30 min，過濾，濾渣繼續(xù)加水400 ml，加熱煎煮30 min，過濾，濾液合并濃縮至200 ml，精密量取15 ml置于150 ml錐形瓶中，加甲醇35 ml，混勻，超聲(功率300 W，頻率33 kHz)40 min，過微孔濾膜(0.22 μm)，取續(xù)濾液備用。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察：取芩連瀉痛配方顆粒和傳統(tǒng)飲片供試品溶液，采用UPLC法進(jìn)行專屬性試驗，結(jié)果顯示，該色譜條件專屬性良好。

2.4.2 供試品溶液穩(wěn)定性考察：將芩連瀉痛配方顆粒和傳統(tǒng)飲片供試品溶液于室溫(25 ℃)放置1、2、4、12及24 h分別進(jìn)樣。結(jié)果顯示，芩連瀉痛配方顆粒5次進(jìn)樣標(biāo)識峰峰面積RSD均在2.0%以內(nèi)，傳統(tǒng)飲片5次進(jìn)樣標(biāo)識峰峰面積RSD均在2.0%以內(nèi)，表明芩連瀉痛配方顆粒和傳統(tǒng)飲片供試品溶液均在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，見表2。

表2 方法學(xué)考察結(jié)果

2.4.3 精密度考察：精密吸取上述混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示，各組分的RSD均在2.0%以內(nèi)，表明儀器的精密度良好，見表2。

2.4.4 重復(fù)性考察：取1劑劑量的配方顆粒，共6份，按照“2.3.1”項下方法制備；取1劑劑量的中藥飲片，共6份，按照“2.3.2”項下方法制備；分別進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，芩連瀉痛配方顆粒6份樣品標(biāo)識峰峰面積RSD均在2.0%以內(nèi)，傳統(tǒng)飲片6份樣品標(biāo)識峰峰面積RSD均在2.0%以內(nèi)，表明芩連瀉痛配方顆粒和傳統(tǒng)飲片供試品溶液制備方法重復(fù)性良好，見表2。

2.5 結(jié)果

取6劑芩連瀉痛配方顆粒和6劑芩連瀉痛傳統(tǒng)飲片分別按照“2.3.1”和“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，芩連瀉痛配方顆粒和傳統(tǒng)中藥飲片供試品溶液中共檢出36個共有峰，未檢出共有峰以外的明顯特征峰，36個共有峰中檢出與混合對照品中15個化學(xué)成分相對應(yīng)的色譜峰(見圖1—3)，可通過對已知的指標(biāo)性成分含量控制來控制配方顆粒和傳統(tǒng)中藥飲片的質(zhì)量。通過國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”(2004 A版)對配方顆粒(S1—S6)和傳統(tǒng)飲片(S7—S12)進(jìn)行相似度分析，分別選定上述36個共有峰進(jìn)行譜峰匹配，得到相似度評價結(jié)果(見表3)，表明配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片所制成的湯劑在成分上差異不大。以混合對照品中15個化學(xué)成分為指標(biāo)性成分，對傳統(tǒng)中藥飲片與配方顆粒進(jìn)行有效成分量的比較，6劑配方顆粒各成分的RSD均在20%以內(nèi)，各成分含量無顯著性差異；6劑中藥飲片中各成分含量差異較大，RSD均在20%～50%以內(nèi)，說明經(jīng)過提取、濃縮和干燥制粒后的配方顆粒劑量的準(zhǔn)確性優(yōu)于傳統(tǒng)飲片。

1.葛根素；2.大豆苷；3.芍藥苷；4.甘草苷；5.黃芩苷；6.鹽酸藥根堿；7.延胡索乙素；8.漢黃芩苷；9.鹽酸巴馬?。?0.鹽酸小檗堿；11.黃芩素；12.甘草酸銨；13.漢黃芩素；14.大黃素；15.大黃酚1. puerarin; 2. daidzein; 3. paeoniflorin; 4. liquiritin; 5. baicalin; 6. jatrorrhizine hydrochloride; 7. tetrahydropalmatine; 8. wogonoside; 9. palmatine hydrochloride; 10. berberine hydrochloride; 11. baicalein; 12. ammonium glycyrrhetate; 13. wogonin; 14. emodin; 15. chrysophanol

2.葛根素；5.大豆苷；6.芍藥苷；11.甘草苷；18.黃芩苷；20.鹽酸藥根堿；23.延胡索乙素24.漢黃芩苷25.鹽酸巴馬汀；26.鹽酸小檗堿；31.黃芩素；32.甘草酸銨；34.漢黃芩素；35.大黃素；36.大黃酚2. puerarin; 5. daidzein; 6. paeoniflorin; 11. liquiritin; 18. baicalin; 20. jatrorrhizine hydrochloride; 23. tetrahydropalmatine; 24. wogonoside; 25. palmatine hydrochloride; 26. berberine hydrochloride; 31. baicalein; 32. ammonium glycyrrhetate; 34. wogonin; 35. emodin; 36. chrysophanol

2.葛根素；5.大豆苷；6.芍藥苷；11.甘草苷；18.黃芩苷；20.鹽酸藥根堿；23.延胡索乙素24.漢黃芩苷25.鹽酸巴馬??；26.鹽酸小檗堿；31.黃芩素；32.甘草酸銨；34.漢黃芩素；35.大黃素；36.大黃酚2. puerarin; 5. daidzein; 6. paeoniflorin; 11. liquiritin; 18. baicalin; 20. jatrorrhizine hydrochloride; 23. tetrahydropalmatine; 24. wogonoside; 25. palmatine hydrochloride; 26. berberine hydrochloride; 31. baicalein; 32. ammonium glycyrrhetate; 34. wogonin; 35. emodin; 36. chrysophanol

表3 12批樣品相似度評價

3 討論

自古以來，湯劑一直是中藥服用的主要方式，中藥飲片是湯劑的基礎(chǔ)。但隨著社會發(fā)展和人類生活節(jié)奏加快，湯劑的不方便性也凸顯出來。中藥配方顆粒是中藥飲片煎煮而成湯劑的產(chǎn)物，也是現(xiàn)代科技與傳統(tǒng)醫(yī)藥相結(jié)合的產(chǎn)物[6]。中藥配方顆粒正式研究始于1993年, 江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司和廣東一方制藥有限公司承擔(dān)了國家中醫(yī)藥管理局課題“中藥免煎飲片研究”, 并相繼研制并推出產(chǎn)品[7]。2001年，原國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》，正式定名“中藥配方顆?！保{入中藥飲片管理范疇，實行批準(zhǔn)文號管理。

中藥飲片是中藥材根據(jù)中醫(yī)理論，經(jīng)過炮制后制成的藥物，如今中藥飲片能夠做到小劑量包裝，藥師配伍、患者使用均十分方便，但仍需要煎煮這個過程。而中藥配方顆粒是指按照中藥制劑浸提法、選用適當(dāng)?shù)娜軇┖统绦?，將中藥飲片中的可溶性有效成分浸出，?jīng)濃縮干燥，按一定比例精制成的散劑或顆粒劑，既保持了湯劑吸收快、顯效迅速等優(yōu)點(diǎn)，又克服了湯劑需要臨時煎煮、耗時耗能及時間長易酸敗變質(zhì)的缺點(diǎn)，劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量穩(wěn)定可控且快捷方便，是對傳統(tǒng)中藥湯劑改革的一種嘗試和有效的補(bǔ)充[8]。盛鳳等[9]采用RewMan 5.3軟件進(jìn)行薈萃分析，結(jié)果顯示，顆粒劑的臨床總有效率與傳統(tǒng)湯劑相當(dāng)，而臨床治愈率優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑，可在臨床廣泛應(yīng)用。但很多患者甚至醫(yī)師都對配方顆粒存在質(zhì)疑，擔(dān)心提取不充分，不能達(dá)到藥效，或是沒有飲片湯劑共同煎煮的過程，缺少各藥物相互作用的過程，藥物相互之間不能產(chǎn)生促進(jìn)或抑制作用[10]。南通市中醫(yī)院采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示，芩連痛瀉配方顆粒在臨床上被證實與西藥組治療效果相當(dāng)，且配方顆粒的止腹痛、止吐療效優(yōu)于西藥組，不良反應(yīng)發(fā)生率低于西藥組。傳統(tǒng)的葛根芩連湯治療濕熱蘊(yùn)結(jié)導(dǎo)致的腸胃不適效果顯著[11]。本研究結(jié)果顯示，芩連瀉痛配方顆粒與傳統(tǒng)飲片湯劑化學(xué)組成差異不大。且中藥配方顆粒藥效成分更易均勻，在劑量上較飲片更易把控。中藥配方顆粒采用獨(dú)立鋁箔包裝，封裝嚴(yán)密，不易吸潮，同時可以避免中藥飲片因保管不當(dāng)引起的發(fā)霉、蟲蛀等問題[12]。

中藥飲片多通過水煎煮來提取，而配方顆粒的提取除了傳統(tǒng)的水煎煮，可能更多地融合了現(xiàn)代制藥中的先進(jìn)提取技術(shù)。在試驗過程中發(fā)現(xiàn)白芍、醋延胡索和大黃的配方顆粒存在較多難溶于水的成分，可能是采用了其他提取試劑。改變傳統(tǒng)提取方法在臨床上能很好地提高藥效，但同時也存在殘留溶劑的問題。因此，在以配方顆粒代替?zhèn)鹘y(tǒng)中藥飲片湯劑的過程中，要嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)。制定配方顆粒的特征圖譜來保證基本質(zhì)量的同時，增加對殘留溶劑、非法添加有效成分的嚴(yán)格有效的檢驗檢測程序。在此基礎(chǔ)上，在今后更高速、更快節(jié)奏的生活中，合理使用配方顆粒是保障人們身體健康、克服人們用藥困難的有效途徑。

中藥配方顆粒的出現(xiàn)和應(yīng)用是傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代技術(shù)之間的有效結(jié)合，增加了中藥的臨床應(yīng)用方式，也為人們的服用和疾病治療帶來較大的便利，在實際應(yīng)用中展現(xiàn)出較多的優(yōu)勢。但還要進(jìn)一步加強(qiáng)臨床差異性實驗的研究，將中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片湯劑的治療效果進(jìn)行比較，以明確中藥配方顆粒的臨床治療效果，通過現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)彌補(bǔ)配方顆粒在部分臨床應(yīng)用中的不足。