洪莉，董軍，陳令會(huì)，王云冰

(1.臺(tái)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 臺(tái)州 371000； 2.臺(tái)州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺(tái)州 371000)

甜櫻桃砧木吉塞拉12號(hào)(G12)原產(chǎn)于德國(guó)，為酸櫻桃(Prununcerasus)與灰毛葉櫻桃(P.canescens)種間雜交育成的三倍體雜交種，在歐美及澳大利亞、新西蘭等國(guó)應(yīng)用廣泛。20世紀(jì)90年代由山東省果樹(shù)研究所引入，經(jīng)多年的區(qū)域試驗(yàn)和生產(chǎn)觀察認(rèn)為，與大多數(shù)甜櫻桃品種親合性良好。吉塞拉系列甜櫻桃砧木具有明顯的矮化、豐產(chǎn)、早實(shí)、抗病、土壤適應(yīng)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[1-5]。近年來(lái)南方甜櫻桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，G12砧木在南方應(yīng)用前景廣，市場(chǎng)潛力巨大，經(jīng)濟(jì)效益顯著[6-7]。由于該甜櫻桃砧木為三倍體雜種，故結(jié)實(shí)率極低，分蘗少，繁殖速率較慢。為滿足生產(chǎn)上的巨大需求，常采用組培法進(jìn)行快繁[8-9]。相對(duì)于北方冷涼干燥的環(huán)境而言，南方高溫高濕的環(huán)境條件對(duì)吉塞拉系列砧木的組培快繁技術(shù)提出了更高的要求。本研究摸索出G12的組培快繁技術(shù)，旨在為南方地區(qū)甜櫻桃砧木的工廠化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

G12來(lái)源于臺(tái)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院櫻桃種質(zhì)資源圃，取G12莖尖或莖段為外植體。

1.2 方法

1.2.1 初代培養(yǎng)

首先對(duì)外植體材料進(jìn)行預(yù)處理。初代培養(yǎng)前1周，采用800倍多菌靈液處理生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的一年生幼嫩新梢，并套袋。初代培養(yǎng)時(shí)將外植體轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)上，剪去葉片，留下帶柄嫩梢。將莖尖部分剝離至1 cm大小，其余部分切成2 cm左右的莖段(帶芽)，放入已滅菌的三角瓶?jī)?nèi)，再加入幾滴1%吐溫-80和60 mL消毒劑進(jìn)行表面滅菌后，接種到培養(yǎng)基上。

根據(jù)消毒劑種類，試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理：0.1%氯化汞、消毒靈(100 g·L-1二氯異氰尿酸鈉)、84消毒液(11.33～15.33 g·L-1有效氯)、次氯酸鈉溶液(≥1.04%活性氯)。每處理10瓶，重復(fù)3次，試驗(yàn)后7 d統(tǒng)計(jì)污染情況。

1.2.2 增殖培養(yǎng)

待初代外植體分化成苗后，切取嫩芽轉(zhuǎn)移至增殖培養(yǎng)基上。以MS(蔗糖30 g·L-1，瓊脂6.0 g·L-1)為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，設(shè)8個(gè)6-BA和IBA濃度組合。T1～T4處理的6-BA濃度均為0.5 mg·L-1，IBA濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.40 mg·L-1；T5～T8處理的6-BA濃度分別為0、0.30、0.60、0.90 mg·L-1，IBA濃度均為0.10 mg·L-1。每處理接種30瓶，每瓶3個(gè)莖尖。在25 ℃、2 000 lx條件下，每天光照12 h，每7 d調(diào)查記錄1次莖尖萌發(fā)率，接種30 d后調(diào)查記錄莖尖再生芽生長(zhǎng)情況。

1.2.3 生根培養(yǎng)

以1/2MS為生根培養(yǎng)基(蔗糖20 g·L-1；瓊脂糖6 g·L-1)，設(shè)8個(gè)處理，添加不同濃度的IAA、NAA、IBA，將高約2 cm以上的健壯組培苗轉(zhuǎn)入基中培養(yǎng)。其中，X1～X4處理的IAA濃度均為0.50 mg·L-1，IBA濃度分別為0.60、0.90、1.20、1.50 mg·L-1；X5～X8處理的NAA濃度均為0.50 mg·L-1，IBA濃度分別為0.20、0.40、0.80、1.60 mg·L-1。調(diào)節(jié)pH為5.8，光照強(qiáng)度為2 000 lx，光照時(shí)間為12 h·d-1，培養(yǎng)溫度控制在25 ℃左右，空氣相對(duì)濕度為50%。

1.2.4 組培苗移栽

選取生長(zhǎng)健壯并生有3條以上2 cm左右新根的組培苗進(jìn)行煉苗。自然光下馴化煉苗1周，然后揭開(kāi)瓶蓋，每天噴清水5～6次；3 d后取出幼苗，洗凈附著在根上的殘留培養(yǎng)基，移入育苗穴盤，置小拱棚中遮蔭培養(yǎng)，每隔5 h噴水1次，逐漸增加光照，待組培苗長(zhǎng)到10 cm以上時(shí)，移入直徑20 cm的美植袋內(nèi)培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑對(duì)外植體成活率的影響

由表1可知，不同消毒劑中，G12外植體的成活率不同。其中，氯化汞處理的成活率最高，為93.3%，且分化情況最好，不定芽為嫩綠色，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基后增殖速度較快；84消毒液處理后的外植體成活率達(dá)到60%，其成活率顯著的高于消毒靈、次氯酸鈉溶液處理；消毒靈和次氯酸鈉溶液消毒效果明顯低于84消毒液。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)外植體增殖生長(zhǎng)的影響

由表2可知，G12外植體在T1號(hào)培養(yǎng)基上增殖系數(shù)為3.2，組培苗生長(zhǎng)正常，葉片嫩綠，無(wú)玻璃化現(xiàn)象；在T2培養(yǎng)基上增殖能力較強(qiáng)，增殖系數(shù)達(dá)4.1，生長(zhǎng)情況較好，葉片嫩綠；在T3和T4培養(yǎng)基上的增殖能力一般，且隨著IBA濃度的增加，組培苗葉片出現(xiàn)不同程度的皺縮現(xiàn)象。T5培養(yǎng)基增殖能力一般，生長(zhǎng)情況較好，葉片嫩綠舒展，部分植株有生根現(xiàn)象發(fā)生；T6和T7培養(yǎng)基增殖能力相對(duì)較高，生長(zhǎng)狀況良好，葉片嫩綠；T8培養(yǎng)基部分出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，葉片皺縮。綜上認(rèn)為，T2、T6和T7的增殖效果優(yōu)于其他培養(yǎng)基。

表1 不同消毒劑對(duì)外植體消毒效果的影響

表2 不同增殖培養(yǎng)基對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)組培苗生根的影響

G12組培苗生根難，且生根率低。研究結(jié)果表明，X2、X3培養(yǎng)基在10 d左右就可見(jiàn)新根長(zhǎng)出，X1、X4培養(yǎng)基在3周后陸續(xù)有新根產(chǎn)生。表3顯示，X2培養(yǎng)基生根率最高，達(dá)到92.30%，且根多而細(xì)長(zhǎng)；其次是X3培養(yǎng)基，生根率達(dá)88.88%，根多且粗細(xì)適中，根系生長(zhǎng)狀況良好；X8培養(yǎng)基生根率為81.25%，根多且短粗；X5、X6培養(yǎng)基生根率較少，且根細(xì)長(zhǎng)，表現(xiàn)較差。綜合來(lái)看，X2、X3、X8培養(yǎng)基生根效果較其他培養(yǎng)基好。

表3 不同生根培養(yǎng)基對(duì)組培苗根系生長(zhǎng)的影響

2.4 組培苗的移栽與定植

G12組培苗經(jīng)煉苗后移栽于園土∶草炭1∶1的育苗基質(zhì)中，遮陰并定期噴水，1月后植株生長(zhǎng)良好，成活率達(dá)90%以上。隨后將組培苗帶土移栽于直徑20 cm的美植袋內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)6個(gè)月，待植株長(zhǎng)高至80 cm時(shí)可用作砧木種苗。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)表明，G12組培快繁的最佳初代消毒處理為0.1%氯化汞處理10 min；增殖培養(yǎng)基0.50 mg·L-16-BA+0.10 mg·L-1IBA、0.30 mg·L-16-BA+0.10 mg·L-1IBA、0.60 mg·L-16-BA+0.10 mg·L-1IBA效果較好；生根培養(yǎng)基0.50 mg·L-1IAA+0.90 mg·L-1IBA、0.5 mg·L-1IAA+1.20 mg·L-1IBA、0.50 mg·L-1NAA+1.60 mg·L-1IBA效果較好，優(yōu)于其他處理。

不同消毒劑處理結(jié)果顯示，氯化汞消毒效果相對(duì)較好，與徐世彥等[8]研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)，春季相對(duì)夏秋季節(jié)更適合初代培養(yǎng)，夏季南方高溫高濕的環(huán)境對(duì)于G12初代培養(yǎng)影響較大，通過(guò)提前多菌靈預(yù)處理并套袋可增強(qiáng)消毒效果。G12對(duì)激素適應(yīng)性更強(qiáng)，較高濃度的6-BA處理下的組培苗玻璃化程度較低，皺縮程度更低。G12相對(duì)于G5和G6更易生根，在1/2MS+0.90 mg·L-1IBA+0.50 mg·L-1IAA條件下生根率達(dá)90%以上。組培苗移栽與定植過(guò)程中保持適宜的溫度與濕度，可有效提高組培苗移栽成活率。