新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)指由于圍生期缺氧窒息導(dǎo)致腦組織缺血缺氧性損害，是新生兒的常見(jiàn)疾病，足月兒發(fā)病率較早產(chǎn)兒高，目前發(fā)病機(jī)制尚不清楚。HIE臨床表現(xiàn)主要為意識(shí)障礙、肌張力異常、原始反射消失、顱內(nèi)壓升高及腦干癥狀，根據(jù)嚴(yán)重程度將HIE分為輕度、中度和重度。HIE導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷，部分HIE患兒伴有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，如失神和腦癱[1-3]。新生兒行為神經(jīng)學(xué)評(píng)分(NBNA)可用于全面評(píng)估新生兒神經(jīng)系統(tǒng)，并一定程度反映HIE患兒腦損傷程度[4]。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)是一種活性多肽，在神經(jīng)系統(tǒng)增殖和調(diào)節(jié)中起重要作用[5-6]；血清生長(zhǎng)激素(GH)可影響IGF-1的表達(dá)和分泌，有研究表明，GH可影響新生兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[7-8]；神經(jīng)球蛋白(NGB)可有效地結(jié)合氧分子，提高腦組織的氧利用率[9]。本研究旨在探討HIE患兒IGF-1、GH、NGB水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選自2011年10月—2013年4月在我院新生兒科住院的60例HIE患兒，其中男32例，女28例。根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)將患兒分為輕度組(33例)、中度組(20例)和重度組(7例)，另選擇同期我院20名正常新生兒作為對(duì)照組，其中男10名，女10名。納入標(biāo)準(zhǔn)：孕齡37～42周；所有新生兒出生體重2500～4 000 g；所有HIE患兒均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；母親一般情況好；受試者無(wú)先天性畸形或代謝性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：患兒死亡或父母拒絕配合；代謝性疾病引起的先天性腦部異?；虺榇?；父母有吸毒史或吸煙史；不符合納入標(biāo)準(zhǔn)。所有患兒家長(zhǎng)均簽署知情同意書(shū)，且本研究已通過(guò)我院倫理委員會(huì)認(rèn)證批準(zhǔn)。

1.2 標(biāo)本采集 新生兒出生后第1天(急性期)和第14天(恢復(fù)期)收集清晨空腹靜脈血，取自凝血3 mL送檢，室溫靜置20 min后，以1 000 r/min離心5～10 min，將上層血清儲(chǔ)存于-90 ℃條件下。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清IGF-1、NGB水平 嚴(yán)格按照試劑盒(R&D Systems，USA)實(shí)驗(yàn)步驟操作，將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋?zhuān)谱鳂?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將血清樣本室溫下均勻混合，每個(gè)樣品做3個(gè)復(fù)孔；使用酶標(biāo)儀在490 nm測(cè)定OD值；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算血清IGF-1、NGB含量。

1.4 放射免疫分析法測(cè)定血清GH水平 嚴(yán)格按照試劑盒[Biofuge prime Heraeus(Porton Down，UK)]實(shí)驗(yàn)步驟操作，采用放射免疫測(cè)定法檢測(cè)血清GH水平。將血清樣本室溫下均勻混合后，將130 IGH抗體100 μL和血清100 μL室溫孵育24～30 h；加入500 μL免疫分離劑并均勻混合，室溫孵育20 min；以4 000 r/min離心15 min并收集上清液。所有試管發(fā)射系數(shù)由科亞生物技術(shù)公司計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析并統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

1.5 NBNA NBNA評(píng)分由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)、操作熟練的專(zhuān)業(yè)醫(yī)師完成。測(cè)定要求在安靜、半暗及溫度26 ℃房間，喂奶后1 h進(jìn)行，檢查時(shí)間為10 min，狀態(tài)不佳時(shí)可間隔。評(píng)分包括行為能力、主動(dòng)肌張力、被動(dòng)肌張力、原始反射和一般反應(yīng)5個(gè)部分，共20項(xiàng)，每項(xiàng)按0～2分評(píng)分，總分40分。

2 結(jié) 果

2.1 4組一般資料比較(見(jiàn)表1)

注：4組各項(xiàng)比較，P>0.05。

2.2 4組血清IGF-1、NGB、GH水平比較 患兒血清IGF-1、NGB水平與HIE病情嚴(yán)重程度相關(guān)，患兒病情越重血清IGF-1水平越低，NGB水平越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；患兒血清GH水平與HIE病情嚴(yán)重程度相關(guān)性不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

組別樣本量 IGF-1(ng/mL) 急性期緩解期 NGB(μg/mL) 急性期緩解期 GH(μg/mL) 急性期緩解期對(duì)照組2053.36±26.51 60.14±25.8279.56±23.2126.37±13.7828.81±15.1211.03±13.28輕度組3336.12±22.49①58.26±26.4088.63±44.9129.76±15.4529.16±14.9511.21±13.26中度組2029.22±13.68①41.39±27.02①②182.36±66.22①②95.35±35.36①②19.87±13.4518.37±12.34重度組718.73±13.01①24.15±14.56①②285.32±84.16①②③163.75±56.43①②③18.56±14.4315.76±14.29

與對(duì)照組比較，①P<0.05；與輕度組比較，②P<0.05；與中度組比較，③P<0.05。

2.3 4組NBNA評(píng)分比較(見(jiàn)表3)

表3 4組NBNA評(píng)分比較(±s) 單位：分

與對(duì)照組比較，①P<0.05；與重度組比較，②P<0.05。

2.4 HIE患兒血清IGF-1、GH和NGB水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析 急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清IGF-1水平與NBNA評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.542，P<0.05；r=0.684，P<0.05)；急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清NGB水平與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.650，P<0.05；r=-0.714，P<0.05)；急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清GH水平與NBNA評(píng)分無(wú)相關(guān)性(r=-0.214，P>0.05；r=-0.176，P>0.05)。詳見(jiàn)表4。

表4 HIE患兒血清IGF-1、GH和NGB水平與NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析

3 討 論

HIE是由于圍生期各種因素引起的新生兒腦組織缺氧，常見(jiàn)的原因包括羊水污染、妊娠期高血壓疾病或子癇、胎盤(pán)異常、臍帶異常[10-11]。中度及以上HIE可能引起腦癱和智力發(fā)育障礙，嚴(yán)重影響患兒生存質(zhì)量，甚至危害生命健康。若早期發(fā)現(xiàn)并診斷HIE，采取適當(dāng)?shù)拇胧┲委熀透深A(yù)，可有效減少HIE患兒出生，并降低HIE患兒圍生期死亡率[12-14]。

IGF-1是神經(jīng)系統(tǒng)重要的調(diào)節(jié)因子，直接促進(jìn)新生兒神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，可促進(jìn)血管生成，營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)

系統(tǒng)，間接降低神經(jīng)細(xì)胞死亡率。有研究顯示，新生兒在子宮內(nèi)或出生時(shí)出現(xiàn)缺氧缺血時(shí)，IGF-1可發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)作用。IGF-1通過(guò)不同機(jī)制保護(hù)HIE患兒神經(jīng)系統(tǒng)，包括降低新生兒腦血管壓力和腦細(xì)胞死亡率?；加蠬IE時(shí)，新生兒自身產(chǎn)生反應(yīng)，外周血清IGF-1通過(guò)特定通道轉(zhuǎn)運(yùn)到腦細(xì)胞，從而有效防止病情進(jìn)展[15-17]。NGB是一種在氧運(yùn)輸中起作用的蛋白質(zhì)，有研究表明，NGB可較大程度保護(hù)缺氧缺血性腦細(xì)胞，主要原因是在缺氧缺血情況下，NGB具有高親和力，有效結(jié)合氧，以維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能。HIE發(fā)生時(shí)，身體產(chǎn)生一系列有毒物質(zhì)，如一氧化氮等，NGB可有效去除有毒物質(zhì)并保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)[9]。有研究顯示，GH對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有維持作用，且GH影響IGF-1的合成和分泌[8]，但未表明GH是否與HIE嚴(yán)重程度相關(guān)。

本研究對(duì)輕度、中度、重度HIE患兒與對(duì)照組血清IGF-1、NGB、GH水平進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)患兒血清IGF-1、NGB水平與HIE病情嚴(yán)重程度相關(guān)，病情越重患兒血清IGF-1水平越低，NGB水平越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；患兒血清GH水平與HIE病情嚴(yán)重程度相關(guān)性不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清IGF-1水平與NBNA評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.542，P<0.05；r=0.684，P<0.05)；急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清NGB水平與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.650，P<0.05；r=-0.714，P<0.05)；急性期和恢復(fù)期HIE患兒血清GH水平與NBNA評(píng)分無(wú)相關(guān)性。

HIE是一種復(fù)雜的臨床疾病，不能通過(guò)單一指標(biāo)判斷患兒病情嚴(yán)重程度和估計(jì)預(yù)后，應(yīng)通過(guò)臨床表現(xiàn)、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像檢查，對(duì)患兒進(jìn)行全面評(píng)估和分析[18-20]。本研究發(fā)現(xiàn)HIE與正常新生兒血清IGF-1和NGB水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與NBNA評(píng)分有關(guān)(P<0.05)，提示HIE患兒血清IGF-1和NGB水平可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)，可能預(yù)測(cè)HIE患兒預(yù)后，但其敏感性和特異性仍需進(jìn)一步深入研究。