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        4種微生物制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦育苗水質(zhì)及仔蝦存活的影響

        2020-05-25 03:32:34洪居懇寧為民李成聰余文智黃雪敏梁華芳溫崇慶
        水產(chǎn)科學(xué) 2020年3期
        關(guān)鍵詞:幼體對(duì)蝦球菌

        洪居懇,薛 明,寧為民,李成聰,陳 耀,余文智,黃雪敏,梁華芳,溫崇慶

        ( 廣東海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院,廣東 湛江 524088 )

        凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)肉質(zhì)鮮美、產(chǎn)量高,是我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖主要的物種之一。優(yōu)質(zhì)苗種是對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)。對(duì)蝦育苗環(huán)境相對(duì)封閉,育苗期間幼體頻繁變態(tài),體質(zhì)脆弱,代謝物、殘骸及殘餌積累,易造成水質(zhì)惡化和病原滋生,導(dǎo)致幼體患病甚至大量死亡[1-3]。用抗生素等化學(xué)藥物防控對(duì)蝦育苗期病害有諸多負(fù)面影響,因而逐漸少用甚至禁用。近20年來(lái),利用有益微生物或益生菌替代化學(xué)藥物進(jìn)行對(duì)蝦微生態(tài)育苗研究日益增多,商品化微生物制劑或益生菌制劑在對(duì)蝦育苗上也得到廣泛應(yīng)用[4-6]。

        水產(chǎn)微生物制劑主要有芽孢桿菌(Bacillus)、乳酸菌、酵母菌和光合細(xì)菌等,還包括不同菌種組合成的復(fù)合型制劑[5-7]。目前,已有用商品化微生物制劑改善對(duì)蝦養(yǎng)殖水質(zhì)的報(bào)道[5-6],但多為仔蝦或幼蝦養(yǎng)成試驗(yàn),涉及對(duì)蝦幼體培育期水質(zhì)影響的研究相對(duì)較少,作用效果上也有所差異。如劉建勇[8]利用復(fù)合微生物制劑進(jìn)行凡納濱對(duì)蝦育苗試驗(yàn),育苗期間處理組溶解氧、氨氮和化學(xué)需氧量等水質(zhì)指標(biāo)均明顯優(yōu)于對(duì)照組;而Silva等[9]開(kāi)展的復(fù)合芽孢桿菌制劑培育凡納濱對(duì)蝦幼體試驗(yàn)結(jié)果顯示,處理組與對(duì)照組水體溶解氧、氨氮和亞硝態(tài)氮含量等指標(biāo)均無(wú)顯著差異。筆者在檢測(cè)4種微生物制劑菌種的基礎(chǔ)上,在凡納濱對(duì)蝦育苗期間連續(xù)投放4種微生物制劑,研究其對(duì)水質(zhì)和仔蝦存活的影響,為微生物制劑在對(duì)蝦育苗中的應(yīng)用提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 微生物制劑

        兩種芽孢桿菌制劑,分別標(biāo)注為地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)和枯草芽孢桿菌(B.subtilis);兩種乳酸菌制劑,分別標(biāo)注為糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)和植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。均為廣東某公司生產(chǎn)的高密度純菌粉(1 kg/包),其標(biāo)注的菌種組成和菌密度見(jiàn)表1。

        1.2 菌含量檢測(cè)

        采用稀釋涂布平板法測(cè)定活菌含量,分別稱取各制劑5 g于生理鹽水中制成50 mL懸液,再用生理鹽水進(jìn)行10倍梯度稀釋,取不同梯度稀釋液100 μL涂布平板。其中,芽孢桿菌制劑涂布營(yíng)養(yǎng)肉湯(北京陸橋,CM106)瓊脂培養(yǎng)基,乳酸菌制劑同時(shí)涂布營(yíng)養(yǎng)肉湯和MRS瓊脂培養(yǎng)基[10]。每一梯度3塊平板,30 ℃下培養(yǎng)5 d,每日觀察記錄菌落數(shù)。每種制劑重復(fù)檢測(cè)2次,取測(cè)定平均值作為最終計(jì)數(shù)結(jié)果。

        表1 微生物制劑菌密度

        注:*和**分別表示營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂和MRS瓊脂計(jì)數(shù)結(jié)果.

        Note: * and ** represent the counting results from nutritional broth agar and MRS agar, respectively.

        1.3 菌種鑒定

        從每種制劑計(jì)數(shù)平板上各選取2~3個(gè)代表性單菌落,進(jìn)一步純化后保存?zhèn)溆谩⒖嘉墨I(xiàn)[2]方法提取代表菌株基因組DNA,再以細(xì)菌16S rRNA基因引物(27F和1492R)PCR擴(kuò)增基因組DNA。將擴(kuò)增產(chǎn)物委托華大基因廣州分公司通過(guò)ABI 3730XL測(cè)序儀以27F和1492R引物雙向測(cè)序。將測(cè)得序列拼接完整后,提交EzBioCloud數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ezbiocloud.net/),與模式菌株的16S rRNA基因序列比對(duì)分析,以確定其可能種屬信息。調(diào)取代表菌株及其最相似5株模式菌株16S rDNA序列,連同制劑標(biāo)注菌種的模式菌株序列,通過(guò)MEGA 7軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

        1.4 育苗試驗(yàn)

        育苗試驗(yàn)在湛江東海島廣東海洋大學(xué)養(yǎng)殖基地進(jìn)行,采用300 L玻璃鋼桶,每桶加入250 L來(lái)自同一蓄水池并經(jīng)過(guò)濾的海水,放幼體前用體積分?jǐn)?shù)20×10-6的甲醛消毒1 d,再曝氣處理1 d。試驗(yàn)用凡納濱對(duì)蝦幼體取自廣東徐聞某對(duì)蝦種苗場(chǎng),每桶放入無(wú)特定病原的無(wú)節(jié)3期幼體5×104尾。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)制劑處理組和對(duì)照組,每組設(shè)3個(gè)平行。除對(duì)照組始終不投菌劑外,各處理組由溞狀Ⅰ初期至仔蝦Ⅰ期,每日分別投制劑1次。綜合參考以往芽孢桿菌和乳酸菌在對(duì)蝦育苗試驗(yàn)中的投菌量[4,9,11-18],地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌組投菌每次5×108cfu/L,糞腸球菌和植物乳桿菌組投菌每次1×108cfu/L,連續(xù)投菌10 d,常規(guī)投喂和飼養(yǎng)管理。投菌前各制劑加少量無(wú)菌海水于30 ℃下活化,芽孢桿菌制劑活化6 h,乳酸菌制劑活化3 h。試驗(yàn)期間不換水,不用藥,連續(xù)充氣。育苗水溫29.6~33.3 ℃,鹽度26.5~30.0,pH 8.01~8.20,溶解氧7.82~8.05 mg/L。所有試驗(yàn)桶飼喂管理相同,由溞狀Ⅰ期開(kāi)始每隔4 h、每日6次投喂螺旋藻粉和蝦片,糠蝦Ⅰ期開(kāi)始加喂冰凍鹵蟲(chóng)(Artemia),仔蝦期僅投喂蝦片和鹵蟲(chóng)。

        育苗水溫、鹽度、pH和溶解氧分別用便攜式溫度計(jì)、鹽度計(jì)、pH計(jì)和溶氧儀日常監(jiān)測(cè)。幼體發(fā)育到溞狀Ⅰ~Ⅱ、糠蝦Ⅰ~Ⅱ和仔蝦Ⅰ期時(shí),通過(guò)300目濾網(wǎng)隔離幼體采集水樣,參考《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范》方法[19],水樣先經(jīng)過(guò)0.45 μm濾膜抽濾,再分別采用靛酚藍(lán)、鹽酸萘乙二胺和磷鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定水體氨氮、亞硝態(tài)氮和無(wú)機(jī)磷含量;化學(xué)需氧量則直接以現(xiàn)場(chǎng)采集的水樣通過(guò)堿性高錳酸鉀法進(jìn)行測(cè)定。

        參考文獻(xiàn)[20]的方法,觀察幼體和仔蝦生長(zhǎng)存活情況,并統(tǒng)計(jì)各組仔蝦Ⅰ期和仔蝦Ⅲ期存活率。

        1.5 數(shù)據(jù)處理

        數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,在統(tǒng)計(jì)分析組間仔蝦存活率差異時(shí)先進(jìn)行反正弦平方根轉(zhuǎn)換,再采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析,若差異達(dá)顯著水平,則以Duncan′s多重比較分析不同處理間的顯著性,顯著性水平α=0.05。

        2 結(jié) 果

        2.1 微生物制劑活菌密度

        4種制劑活菌密度均≥1.30×1010cfu/g,除地衣芽孢桿菌制劑檢測(cè)值略低于其標(biāo)注密度外,其余3種制劑菌密度均不低于標(biāo)注值。兩種乳酸菌制劑在MRS和營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂平板上計(jì)數(shù)結(jié)果基本一致,以MRS瓊脂計(jì)數(shù)為準(zhǔn)(表1)。

        2.2 菌種鑒定

        4種制劑計(jì)數(shù)平板上均只有一種類型細(xì)菌菌落,幾無(wú)雜菌。從同一制劑分離純化菌株的菌落特征完全一致,從地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌和植物乳桿菌制劑分離菌株中各選1株作為代表菌,編號(hào)分別為DY1、KC1、FC1和ZW1。4株代表菌16S rRNA基因序列在GenBank登錄號(hào)為MK441691~MK441694。通過(guò)EzBioCloud數(shù)據(jù)庫(kù),4株代表菌與模式菌16S rRNA基因序列比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表2。各株代表菌與其最相近5株模式菌序列相似性均超過(guò)或接近99%。其中ZW1與植物乳桿菌植物亞種(L.plantarumplantarum)模式菌株序列完全一致。與KC1最相似的3種菌分別為暹羅芽孢桿菌(B.siamensis)、貝萊斯芽孢桿菌(B.velezensis)和枯草芽孢桿菌枯草亞種(B.subtilissubtilis),與其模式菌株分別有4、4、6個(gè)堿基差異,KC1可能屬于其中某一種。DY1與KC1序列有2個(gè)堿基差異,與兩者最相似的5株模式菌株也一致,僅相似性略有差異。DY1與暹羅芽孢桿菌和貝萊斯芽孢桿菌模式菌株序列有2個(gè)堿基差異,與另外3種模式菌株也有6個(gè)堿基差異,屬于其中一種芽孢桿菌,但DY1與地衣芽孢桿菌模式菌株序列差異達(dá)28個(gè)堿基,相似性98.02%,排除地衣芽孢桿菌的可能。與FC1最相似的兩種菌分別是乳酸腸球菌(E.lactis)和屎腸球菌(E.faecium),與其模式菌株分別有5個(gè)和6個(gè)堿基不同,很可能屬于其中一種,但FC1與糞腸球菌模式菌株序列有58個(gè)堿基差異,相似性不到96%,因而非糞腸球菌(E.faecalis)??梢?jiàn)植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌制劑標(biāo)注菌種與鑒定結(jié)果一致或基本一致,而地衣芽孢桿菌與糞腸球菌制劑標(biāo)注菌種雖屬名無(wú)誤,但種名與實(shí)際鑒定結(jié)果不符。

        系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)(圖1)顯示,菌株KC1和ZW1分別與包含相應(yīng)標(biāo)注菌種在內(nèi)的最相似幾菌株緊密聚為一類,但DY1與其標(biāo)注菌種地衣芽孢桿菌明顯分開(kāi),而與KC1等聚為一類。同樣,F(xiàn)C1與其標(biāo)注菌種糞腸球菌也明顯分開(kāi),而與乳酸腸球菌和屎腸球菌等聚為一類。進(jìn)一步表明地衣芽孢桿菌和糞腸球菌制劑的標(biāo)注菌種與實(shí)際不符,而植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌制劑的菌種標(biāo)注與實(shí)際相符。

        表2 分離代表菌株與模式菌株16S rRNA基因序列相似性

        圖1 微生物制劑分離菌株16S rRNA基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

        2.3 投放微生物制劑對(duì)育苗水質(zhì)影響

        同一階段各組水溫、鹽度、pH和溶解氧均無(wú)顯著差異。水體氨氮含量隨育苗時(shí)間延長(zhǎng)明顯升高,溞狀Ⅰ~Ⅱ期和糠蝦Ⅰ~Ⅱ期,地衣芽孢桿菌組氨氮含量顯著高于其他4組(P<0.05),其他組間差異均不顯著(P>0.05)。仔蝦Ⅰ期,地衣芽孢桿菌組氨氮含量顯著高于除植物乳桿菌組外的其他組(P<0.05);枯草芽孢桿菌組氨氮含量最低,并顯著低于地衣芽孢桿菌和植物乳桿菌組(P<0.05),但枯草芽孢桿菌、糞腸球菌及對(duì)照組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖2)。

        亞硝態(tài)氮含量在3個(gè)階段均相對(duì)穩(wěn)定,并維持在較低水平(圖3),除溞狀Ⅰ~Ⅱ期糞腸球菌和植物乳桿菌組亞硝態(tài)氮含量顯著低于對(duì)照組外,各組間差異均不顯著(P>0.05)。

        與氨氮含量變化趨勢(shì)相似,無(wú)機(jī)磷含量也隨幼體發(fā)育明顯升高(圖4),3個(gè)階段地衣芽孢桿菌組無(wú)機(jī)磷含量均顯著高于其他4個(gè)組(P<0.05),而其他組間差異均不顯著(P>0.05)。

        各組化學(xué)需氧量從溞狀Ⅰ~Ⅱ期到糠蝦Ⅰ~Ⅱ期顯著升高,其后到仔蝦Ⅰ期略有升高(圖5)。溞狀Ⅰ~Ⅱ期,枯草芽孢桿菌組與地衣芽孢桿菌組差異不顯著(P>0.05),但均顯著高于其他3組;糠蝦Ⅰ~Ⅱ期及仔蝦Ⅰ期,地衣芽孢桿菌組化學(xué)需氧量顯著高于其他4組(P<0.05)。其他4組中,除枯草芽孢桿菌組化學(xué)需氧量在溞狀Ⅰ~Ⅱ期和仔蝦Ⅰ期顯著高于對(duì)照組外,各組間差異均不顯著(P>0.05)。

        圖2 4種微生物制劑對(duì)育苗水體氨氮含量影響

        圖3 4種微生物制劑對(duì)育苗水體亞硝態(tài)氮含量影響

        圖4 4種微生物制劑對(duì)育苗水體無(wú)機(jī)磷含量影響

        圖5 4種微生物制劑對(duì)育苗水體化學(xué)需氧量影響

        綜上,育苗水體連續(xù)投放4種制劑后,地衣芽孢桿菌組氨氮、無(wú)機(jī)磷和化學(xué)需氧量顯著增加,對(duì)水質(zhì)表現(xiàn)為負(fù)面影響。其他3種制劑組,除枯草芽孢桿菌組化學(xué)需氧量在溞狀Ⅰ~Ⅱ期和仔蝦Ⅰ期顯著增加,糞腸球菌和植物乳桿菌組在育苗早期亞硝態(tài)氮含量顯著降低外,對(duì)育苗期所測(cè)水質(zhì)指標(biāo)均無(wú)顯著影響。

        2.4 對(duì)蝦生長(zhǎng)和存活情況

        試驗(yàn)期間,枯草芽孢桿菌組幼體活力相對(duì)最佳,趨光性強(qiáng),個(gè)體較大,糞腸球菌和植物乳桿菌組和對(duì)照組次之,而地衣芽孢桿菌組最差。由圖6可見(jiàn),枯草芽孢桿菌組仔蝦存活率最高,但仔蝦Ⅰ期各組間均無(wú)顯著差異(P>0.05);仔蝦Ⅲ期枯草芽孢桿菌組存活率顯著高于地衣芽孢桿菌組(P<0.05),但與其他各組間差異仍不顯著(P>0.05)。

        圖6 4種微生物制劑對(duì)仔蝦存活率影響

        3 討 論

        3.1 水產(chǎn)微生物制劑質(zhì)量

        隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展,抗生素等化學(xué)藥物濫用對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境引發(fā)的負(fù)面問(wèn)題日趨嚴(yán)重,水產(chǎn)益生菌或微生物制劑由于安全環(huán)保、成本低、使用簡(jiǎn)便等諸多優(yōu)點(diǎn)而備受重視[6],市場(chǎng)需求日益旺盛。但由于水產(chǎn)微生物制劑產(chǎn)品生產(chǎn)和市場(chǎng)準(zhǔn)入門檻低,又缺乏有效監(jiān)管,因而魚(yú)龍混雜,一些產(chǎn)品名不副實(shí),給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成不必要的損失[7]。如溫崇慶等[7]對(duì)9種芽孢桿菌制劑檢測(cè)發(fā)現(xiàn),大多數(shù)制劑菌密度低于甚至遠(yuǎn)低于其標(biāo)注密度,有些產(chǎn)品標(biāo)注菌種與實(shí)際鑒定結(jié)果不符。

        本研究檢測(cè)的4種微生物制劑菌種單一,含菌量與其標(biāo)注密度基本一致,或高于標(biāo)注密度。16S rRNA基因測(cè)序分析表明,植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌制劑菌種與其標(biāo)注菌種相符;雖然地衣芽孢桿菌制劑菌種也屬于芽孢桿菌,但非地衣芽孢桿菌;糞腸球菌制劑分離菌雖為腸球菌屬菌種,但不是糞腸球菌,可能是乳酸腸球菌或屎腸球菌。糞腸球菌和屎腸球菌為不同種,無(wú)論是中文名還是拉丁種名均易混淆,常被誤認(rèn)為同一種菌。需強(qiáng)調(diào)的是,16S rDNA序列通常難以在種水平上準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌,但可簡(jiǎn)便有效甄別被鑒定菌株屬于哪幾種菌,或排除是某種菌的可能性。種水平鑒定還需結(jié)合生理生化等特征或借助其他基因特征。微生物制劑含菌量及菌種是其發(fā)揮作用的關(guān)鍵,對(duì)于商品化微生物制劑,條件許可時(shí)使用前應(yīng)予以檢測(cè),以明確其有效含菌量和菌種組成。

        地衣芽孢桿菌和糞腸球菌制劑標(biāo)注菌種與實(shí)際不符,地衣芽孢桿菌制劑最可能菌種為暹羅芽孢桿菌或貝萊斯芽孢桿菌(表2),有報(bào)道顯示,這兩種菌均可抑制水產(chǎn)病原菌并可作為益生菌[21-24];糞腸球菌制劑最可能菌種——屎腸球菌或乳酸腸球菌在畜禽養(yǎng)殖上常用作益生菌,腸球菌也用作水產(chǎn)益生菌[5-6],然而在對(duì)蝦育苗中罕見(jiàn)這幾種菌的報(bào)道,因此本試驗(yàn)也將這兩種制劑用于育苗試驗(yàn),評(píng)估其實(shí)際應(yīng)用效果。

        3.2 芽孢桿菌和乳酸菌對(duì)對(duì)蝦育苗水質(zhì)影響

        芽孢桿菌具有多種胞外酶,可將對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中的有機(jī)物迅速分解而凈化水質(zhì)[5-6],被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖,但其對(duì)凡納濱對(duì)蝦或斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)幼體培育水質(zhì)的影響效果不一。Nimrat等[15]報(bào)道,復(fù)合型芽孢桿菌制劑可顯著降低對(duì)蝦育苗水體的氨氮和亞硝態(tài)氮含量,但多數(shù)研究均顯示,包括枯草芽孢桿菌在內(nèi)的單一芽孢桿菌益生菌對(duì)對(duì)蝦育苗水質(zhì)影響不明顯[9,12-14,16,25]。暹羅芽孢桿菌或貝萊斯芽孢桿菌可抑制水產(chǎn)病原菌,提高水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)或免疫力[21-24],但其對(duì)對(duì)蝦育苗水質(zhì)及幼體生長(zhǎng)影響鮮見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)中,兩種芽孢桿菌制劑與對(duì)照組相比,地衣芽孢桿菌組除對(duì)亞硝態(tài)氮含量無(wú)顯著影響外,在不同階段均顯著增加了水體氨氮、無(wú)機(jī)磷含量和化學(xué)需氧量,對(duì)水質(zhì)表現(xiàn)一定負(fù)面影響,但所測(cè)水質(zhì)指標(biāo)均在安全范圍內(nèi)。與對(duì)照組相比,枯草芽孢桿菌組除增加或顯著增加育苗化學(xué)需氧量外,對(duì)其他水質(zhì)指標(biāo)始終無(wú)顯著影響??莶菅挎邨U菌組化學(xué)需氧量的顯著上升,可能與連續(xù)投菌顯著增加了水體中芽孢桿菌的密度,即與有機(jī)物含量增加有關(guān),也可能是因?yàn)榇罅垦挎邨U菌進(jìn)入幼體腸道后促進(jìn)了幼體消化和排泄,造成化學(xué)需氧量升高。兩種芽孢桿菌制劑在育苗和投菌方式相同情況下,對(duì)水體氨氮和無(wú)機(jī)磷含量影響差異顯著,可能與兩種制劑的菌種或菌株不同有關(guān),另一方面,不同制劑發(fā)酵后菌體以外的其他成分也可能存在明顯差異,進(jìn)而對(duì)水質(zhì)和養(yǎng)殖動(dòng)物造成不同影響[7,16]。

        乳酸菌種類繁多,用作水產(chǎn)益生菌的主要有乳酸桿菌、腸球菌和乳球菌(Lactococcus)等[5-6]。乳酸菌可有效去除養(yǎng)殖水體中亞硝態(tài)氮[26-29]、磷酸鹽[27]和氨氮[28-30],也有報(bào)道乳酸菌可增加氨氮含量[27]。本試驗(yàn)兩種乳酸菌制劑僅在育苗早期顯著降低水體亞硝態(tài)氮含量,一定程度上改善了水質(zhì),與以往報(bào)道乳酸菌可消減水體亞硝態(tài)氮含量[26-27]一致,但兩種制劑對(duì)水體氨氮、無(wú)機(jī)磷含量和密度始終無(wú)顯著影響??赡茉蚴遣煌N或菌株的代謝有所差異,以及應(yīng)用環(huán)境不同,如本試驗(yàn)中兩個(gè)乳酸菌處理組與對(duì)照組所測(cè)水質(zhì)指標(biāo)始終在安全范圍內(nèi),水質(zhì)上無(wú)明顯脅迫壓力。本試驗(yàn)與已有的相關(guān)研究均表明,試驗(yàn)環(huán)境、菌種和制劑差異等均可能影響微生物制劑對(duì)水質(zhì)的作用效果。

        3.3 芽孢桿菌和乳酸菌對(duì)幼體和仔蝦生長(zhǎng)的影響

        除改善水質(zhì)外,益生菌還能提高養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)和存活,其機(jī)制主要包括抑制病原、補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、促進(jìn)消化和提高免疫等[5-6],但不同菌種甚至同種不同菌株的作用方式各有側(cè)重,效果也有所差異。大多數(shù)研究顯示,在對(duì)蝦育苗體系中連續(xù)投入較高密度芽孢桿菌可顯著提高幼體或仔蝦存活率[4-5,9,11-17,31],促進(jìn)生長(zhǎng)或變態(tài)[5,9,11-12,14-15,17],增強(qiáng)蝦苗抗逆性[14,17]。但一些研究也顯示,進(jìn)一步提高用菌量作用效果不再提升[12-13,15-17,31],甚至可能造成幼體存活率下降[16]。乳酸菌對(duì)對(duì)蝦生長(zhǎng)影響的研究多集中于幼蝦或成蝦試驗(yàn)[5-6,32-33],對(duì)幼體影響報(bào)道較少。姜松等[17]研究顯示,每隔一定時(shí)間投放較高密度乳酸菌制劑,可顯著提高凡納濱對(duì)蝦仔蝦存活率和抗逆性;劉建勇等[8,18,31,34]研究顯示,含有乳酸菌的復(fù)合菌劑可顯著提高幼體和(或)仔蝦存活率,但這些報(bào)道中乳酸菌菌種大多未明確,且復(fù)合菌劑包含多種類型微生物,難以界定乳酸菌的作用。

        本試驗(yàn)中,兩種芽孢桿菌制劑對(duì)幼體和仔蝦影響差異明顯。所有試驗(yàn)組中,枯草芽孢桿菌組應(yīng)用效果最佳,幼體和仔蝦不僅存活率高且活力強(qiáng),而地衣芽孢桿菌組不僅幼體活力最差,仔蝦Ⅲ期存活率還顯著低于枯草芽孢桿菌組,這可能與地衣芽孢桿菌組水體氨氮和無(wú)機(jī)磷含量顯著升高有一定關(guān)系。兩種乳酸菌制劑處理組與對(duì)照組相比,幼體活力及仔蝦存活率均無(wú)明顯差異。參考以往對(duì)蝦幼體培育試驗(yàn)中芽孢桿菌投菌量及其作用效果[4,9,11-18],4種制劑均以連續(xù)方式投菌,投菌量適宜,但4個(gè)處理組與對(duì)照組間仔蝦存活率相比均無(wú)顯著差異。Guo等[12]在斑節(jié)對(duì)蝦育苗期間每日投放紡錘芽孢桿菌(B.fusiformis),處理組與對(duì)照組仔蝦Ⅰ期存活率也無(wú)顯著差異,但該菌應(yīng)用于凡納濱對(duì)蝦育苗時(shí),處理組存活率和變態(tài)速度均顯著提高;Nimrat等[15]自凡納濱對(duì)蝦溞狀Ⅲ期幼體開(kāi)始連續(xù)投用復(fù)合芽孢桿菌益生菌,4 d后6個(gè)處理組幼體存活率和生長(zhǎng)均無(wú)顯著提高,但將其用于仔蝦時(shí),所有處理組存活率和生長(zhǎng)均顯著高于對(duì)照組??梢?jiàn),益生菌的作用對(duì)象和環(huán)境對(duì)幼體的生長(zhǎng)和存活具有重要影響。芽孢桿菌和乳酸菌作為水產(chǎn)益生菌均可通過(guò)拮抗病原、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)消化和調(diào)節(jié)腸道菌群等方式發(fā)揮作用,芽孢桿菌通常還具有降解有機(jī)物作用。本研究育苗試驗(yàn)期間幼體無(wú)明顯病原感染,育苗水質(zhì)良好,幼體營(yíng)養(yǎng)也較充分,因此在無(wú)明顯脅迫條件下,與對(duì)照組相比4種制劑的作用效果難以通過(guò)存活率顯著體現(xiàn),但其中的兩種芽孢桿菌制劑可能因菌種或制劑成分差異,作用效果明顯不同。

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