史洪濤，喬宏興，劉 松，張 菡，邊傳周,*

（1.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院動物醫(yī)藥學(xué)院，河南鄭州 450046；2.河南省益生菌生物轉(zhuǎn)化工程技術(shù)研究中心，河南鄭州 450046；3.鄭州市益生菌發(fā)酵中藥重點實驗室，河南鄭州 450046）

扶正解毒散是被我國獸藥典收錄的由黃芪、板藍根、淫羊藿按照一定比例組方配制的中藥成方制劑，處方中板藍根清熱解毒、涼血消腫；黃芪益氣升陽、托毒生肌；淫羊藿溫腎補陽，三藥同用，共奏補中益氣、扶正祛邪之功效，扶正解毒散在臨床應(yīng)用中具有抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)機體免疫等作用[1]。已有研究表明，扶正解毒散對治療雞新城疫[2]、傳染性法氏囊病[1]、細菌性腹病[3]有一定的效果。但由于雞的消化道較短，多數(shù)中藥在排出體外之前，有效活性成分得不到充分釋放，利用率大幅度降低。而通過微生物發(fā)酵中藥技術(shù)，可在體外模擬中藥在腸道消化分解過程，進行預(yù)消化分解和轉(zhuǎn)化，充分釋放活性成分，更有利于畜禽吸收利用，增加藥效[4]。本課題組前期已建立高效乳酸菌發(fā)酵扶正解毒口服液制備工藝，并發(fā)現(xiàn)該發(fā)酵扶正解毒口服液可提高肉雞的生長性能，促進免疫器官的發(fā)育[5]。在此基礎(chǔ)上，本試驗旨在研究不同濃度的發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞生產(chǎn)性能、免疫功能、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，為復(fù)合益生菌發(fā)酵扶正解毒口服液在蛋雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 蘇木素、伊紅、酒精、二甲苯、4%多聚甲醛溶液由河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院發(fā)酵中藥實驗室提供；發(fā)酵扶正解毒口服液的配比方法及組成參考史洪濤等[5]方法；過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽過氧化氫酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）檢測試劑盒購自上海源葉生物科技有限公司；全自動酶標儀（SILFTA）購自美國伯騰儀器有限公司；電子天平、圖像采集系統(tǒng)、輪轉(zhuǎn)切片（RM 2135）、CS-VI 型攤片烤片機購自孝感市紅葉醫(yī)用儀器有限公司。

1.2 試驗設(shè)計 本試驗采用單因子試驗法，挑選300 日齡健康的農(nóng)大三號產(chǎn)蛋雞210 只，隨機分為4 組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù) 10 只雞。對照組飲用自來水，試驗組分別飲用自來水稀釋1 000、2 000、3 000 倍的發(fā)酵扶正解毒口服液。

1.3 飼養(yǎng)管理 參照NRC（1994）設(shè)計日糧配方，日糧組成及營養(yǎng)成分如表1。預(yù)試驗3 d，正試期15 d，對雞群自由飲水，每天每只雞喂料80 g，光照15 h，早晚各收蛋1 次。

表1 1～15 d 蛋雞基礎(chǔ)日糧及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 指標測定與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能測定 試驗期間，每天以重復(fù)為單位記錄蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量、產(chǎn)蛋重量以及采食量；計算每組蛋雞的總蛋重、產(chǎn)蛋率、料蛋比和平均蛋重。

料蛋比=總耗料量/總產(chǎn)蛋量

產(chǎn)蛋率=每組產(chǎn)蛋總數(shù)（枚）/（試驗天數(shù)×每組試驗蛋雞數(shù)量）×100%

平均蛋重（g）=總產(chǎn)蛋量/總產(chǎn)蛋數(shù)

1.4.2 抗氧化指標測定 試驗第15 天，每個重復(fù)選取5只蛋雞，心臟采血5 mL，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｑ逯蠱DA、CAT、GSH-Px、SOD、T-AOC 抗氧化指標檢測按酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒說明書進行。

1.4.3 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)測定 試驗結(jié)束后，提前一天禁食，每個重復(fù)選5 只蛋雞，解剖取其小腸腸段（十二指腸中間彎部長度3～5 cm、十二指腸以下8 cm 處長度3～5 cm、卵黃蒂以下8 cm 處長度3～5 cm），用生理鹽水輕輕沖洗腸段內(nèi)容物，并浸于配好的4%甲醛溶液中固定。經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、撈片、烤片、染色、封片過程制作石蠟切片，挑選制作合格的切片，在顯微鏡下觀察，采集圖像并選取6 個典型視野，用 Motic Images Plus 2.0 ML 分析軟件測量腸絨毛高度（VH）、腸隱窩深度（CD），并計算腸絨毛高度/隱窩深度（V/C）值。

1.5 統(tǒng)計分析 用IBM SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，采用LDS 法進行多重比較，結(jié)果以平均值± 標準差來表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 如表2 所示，2 000 倍稀釋組產(chǎn)蛋率最高，比對照組顯著提高了5.34%，各稀釋組料蛋比與對照組相比均有降低（P＞0.05）；1 000、2 000 倍稀釋組平均蛋重與對照組相比均有升高（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞血清抗氧化指標的影響如表3 所示，2 000 倍稀釋組CAT 活性最高，比對照組、1 000 倍稀釋組分別顯著提高了63.45%、44.86%。2 000倍稀釋組SOD 活性最高，比對照組、1 000、3 000 倍稀釋組分別顯著提高了91.92%、65.07%、61.02%；2 000倍稀釋組T-AOC 活性最高，比對照組、1 000、3 000 倍稀釋組分別顯著提高了67.68%、42.35%、44.35%。

2.3 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞腸道組織結(jié)構(gòu)的影響如表4 所示，3 000 倍稀釋組十二指腸VH 值最高，與對照組相比，1 000、2 000、3 000 倍稀釋組分別顯著提高了153.25%、171.82%、178.54%；2 000 倍稀釋組空腸VH 值最高，比對照組顯著提高了43.27%。2 000 倍稀釋組十二指腸CD 值最低，2 000、3 000 倍稀釋組較對照組分別顯著降低了24.95%、14.54%，2 000、3 000倍稀釋組十二指腸的CD 值較1 000 倍稀釋組分別顯著降低了15.04%、3.26%；1 000 倍稀釋組空腸CD 值最低，與對照組、3 000 倍稀釋組相比分別顯著降低了44.14%、22.06%，2 000 倍稀釋組空腸CD 值與對照組、3 000 倍稀釋組相比分別顯著降低了44.04%、21.91%，3 000 倍稀釋組與對照組相比顯著降低了23.59%；1 000 倍稀釋組回腸CD 值最低，與對照組、2 000、3 000 倍稀釋組相比分別顯著降低了37.62%、19.80%、42.11%。2 000 倍稀釋組十二指腸V/C 值最高，與對照組、1 000 倍稀釋組相比分別顯著提高了260.87%、24.47%，1 000、3 000 倍稀釋組十二指腸V/C 值分別比對照組顯著提高了189.93%、228.83%；各組空腸V/C 值以2 000 倍稀釋組最高，分別比對照組、1 000、3 000 倍稀釋組顯著提高了156.70%、30.67%、54.27%，1 000、3 000 倍稀釋組分別比對照組顯著提高了90.45%、66.40%；1 000 倍稀釋組回腸V/C 值最高，與對照組相比，1 000、2 000 倍稀釋組分別顯著提高了87.34%、85.25%。

表3 發(fā)酵扶正制劑對蛋雞血清抗氧化指標的影響

3 討 論

3.1 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 在雞群整個飼養(yǎng)周期，惡劣環(huán)境、疾病、飼料營養(yǎng)失調(diào)、飼養(yǎng)管理水平較差等因素會導(dǎo)致雞群生產(chǎn)性能下降，抗應(yīng)激、抗病毒等免疫功能減弱，已成為當前影響家禽飼養(yǎng)效益的重要因素[6]。扶正解毒散具有防病促生長作用，由黃芪、板藍根和淫羊藿按一定比例配制而成的復(fù)合中藥，具有扶助正氣、增強體質(zhì)、提高機體抗病能力和自然修復(fù)能力的功效，達到防御病邪和戰(zhàn)勝病邪的目的，在臨床研究中充分發(fā)揮著“扶正祛邪”的特性。益生菌發(fā)酵中藥后能產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機酸，促進畜禽消化吸收，改善飼料利用率[7]。其次益生菌能分解中藥中豐富的營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多糖等活性成分，提高中藥的生物價值。發(fā)酵扶正解毒口服液是在益生菌和扶正復(fù)合中藥的基礎(chǔ)上，將兩者有機結(jié)合起來，具有二者的雙重功效。王紅梅等[8]研究扶正對肉仔雞機體的影響發(fā)現(xiàn)，扶正解毒散可提高肉雞的飼料利用率，降低耗料增重比。李建輝[9]研究表明，蛋雞飼喂扶正解毒散后，雛雞的成活率、生長速度、平均體重顯著提高，同時能顯著提高產(chǎn)蛋率、改善蛋品質(zhì)。郭宏偉等[10]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵扶正解毒口服液能顯著提高肉雞的平均日增重，顯著降低料蛋比。本團隊前期將扶正解毒散復(fù)合制劑應(yīng)用于肉雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肉雞的平均日增重、平均日采食量均顯著提高，耗料增重比顯著降低[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，不同稀釋濃度的發(fā)酵扶正解毒口服液均能一定程度提高蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、降低料蛋比，2 000 倍稀釋的發(fā)酵液能顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率，這與前人研究結(jié)果一致。綜合考慮，以2 000 倍稀釋的發(fā)酵扶正解毒口服液效果最適宜。

表4 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞小腸VH、CD、V/C 值的影響

3.2 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞血清抗氧化能力的影響 機體抗氧化能力可通過血清CAT、SOD、MDA 和T-AOC 等指標體現(xiàn)。CAT 具有保護和解毒、電離羥自由基（-OH）、阻止機體衰老的功能，是比較重要的抗氧化酶。SOD 具有抵抗組織衰老、調(diào)節(jié)免疫能力、調(diào)節(jié)血脂含量等功能，并能清除體內(nèi)有害的超氧自由基，在動物體內(nèi)發(fā)揮著非常重要的抗氧化作用。GSH-Px 可協(xié)助機體保持正常的免疫系統(tǒng)功能，具有整合解毒、抗氧化作用。MDA 能引起蛋白質(zhì)、核酸等大分子物質(zhì)聚合，使細胞膜損傷、具有細胞毒性。T-AOC 是測定抗氧化綜合能力的重要標準，主要作用是分解和清除代謝過程中的活性氧，其含量越高表明抗氧化作用越強[11]。因此可通過增強動物的抗氧化能力來提高動物的抗氧化應(yīng)激能力，進而提高動物體的健康狀況[12]。目前已經(jīng)有大量研究表明中藥能提高蛋雞的抗氧化功能，例如黃芪中含有的皂苷活性成分，能夠捕捉機體的自由基，來發(fā)揮抗氧化功能，板藍根中多糖具有抗病毒、增強機體免疫力的作用[13-14]。而通過發(fā)酵技術(shù)對復(fù)合中藥進行發(fā)酵后，一方面中藥能促進益生菌的生長，而益生菌能促進機體產(chǎn)生更多的抗氧化酶，如GSH-Px、SOD 等來防止過氧化反應(yīng)[15]。另一方面經(jīng)過益生菌的轉(zhuǎn)化作用將中藥中大分子物質(zhì)降解為小分子物質(zhì)，或?qū)⑶八庌D(zhuǎn)化為有效成分，提高中藥的吸收率并產(chǎn)生新的功能，從而提高中藥藥效[16]。朱永毅等[17]研究發(fā)現(xiàn)，黃羽肉仔雞日糧中添加0.4%發(fā)酵銀杏葉能顯著提高血清SOD 和GSHPx 活力，顯著降低血清MDA 含量。喬宏興等[18]將發(fā)酵黃芪應(yīng)用于蛋雞，在第21 天與對照組相比，發(fā)酵黃芪組蛋雞血清中CAT、GSH-Px 均顯著提高。本試驗結(jié)果顯示，不同濃度的發(fā)酵扶正解毒口服液均能一定程度提高CAT、SOD、T-AOC、GSH-Px 活性，2 000 倍稀釋的發(fā)酵扶正解毒口服液能顯著提高蛋雞血清CAT、SOD、T-AOC 活性。綜合考慮，以2 000 倍稀釋發(fā)酵扶正解毒口服液效果最為適宜。

3.3 發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞腸道組織結(jié)構(gòu)的影響因蛋雞腸VH、CD 以及腸道V/C 值是衡量腸道吸收功能最重要的標準。當腸絨毛較高時，成熟細胞較多，腸道內(nèi)吸收情況較好。VH 表示細胞生成速度，隱窩深度越淺，細胞生成速率越高，因此小腸的V/C 值可以說明小腸上皮細胞更新代謝的程度[19]。因發(fā)酵中藥是通過模擬腸道微生物對中藥的生物轉(zhuǎn)化而在體外制備的，其活性成分的溶出率和小分子轉(zhuǎn)化程度都很高，更易于腸道對藥物的吸收，同時益生菌群進入腸道后與病原菌競爭附著位點，改善腸道環(huán)境，提高畜禽腸道吸收功能，此外，中藥中的多糖和糖苷等活性成分也能維持菌群的繁殖，促進腸道正常菌群的優(yōu)勢地位，從而維持腸道環(huán)境及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定[20]。張金龍等[21]研究表明在肉雞日糧中添加2%發(fā)酵桑葉粉，能顯著提高空腸和回腸腸絨毛高度，改善畜禽腸道組織結(jié)構(gòu)。本試驗發(fā)現(xiàn)，不同稀釋濃度的發(fā)酵扶正解毒口服液均能顯著提高蛋雞十二指腸VH 及V/C 值，顯著降低CD 值，并以2 000 倍稀釋組V/C 值最高；2 000 倍稀釋組能顯著提高空腸VH 值，不同稀釋濃度的發(fā)酵扶正解毒口服液均能顯著降低空腸CD 值及提高V/C 值，并以2 000 倍稀釋組V/C 值最高；1 000 倍稀釋組能顯著降低回腸CD 值，1 000、2 000 倍稀釋組均能顯著提高V/C 值，且以1 000 倍稀釋組V/C值最高。綜合考慮，以2 000 倍稀釋發(fā)酵扶正解毒口服液效果最為適宜。

4 結(jié) 論

在本試驗條件下，蛋雞飲用1 000、2 000、3 000 倍稀釋的發(fā)酵扶正解毒口服液均能提高產(chǎn)蛋率、提高平均蛋重、降低料蛋比，提高血清CAT、SOD、T-AOC、GSH-Px 活性，改善小腸腸道組織結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果表明，2 000 倍稀釋的發(fā)酵扶正解毒口服液對蛋雞的生產(chǎn)性能、免疫功能及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)效果最適宜。