張 浩 張柱琦 關(guān)文怡 曹金元 周珍輝

北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京102442

福爾馬林熏蒸消毒是孵化廳消毒種蛋最常用的方法，福爾馬林熏蒸法可以殺死蛋殼表面絕大多數(shù)病原體[1]，消毒效果好，但福爾馬林熏蒸消毒存在諸多問題，對(duì)人呼吸道及眼的刺激性大，對(duì)孵化廳的工人造成傷害。據(jù)孫成浩等[2]報(bào)道，種蛋入孵前用28 mL/m3福爾馬林電磁爐加熱0.5 h，種蛋平均消毒合格率僅為80%左右，另外還存在冬季液體福爾馬林受凍凝固、熏蒸后殘?jiān)灰滋幚?、成本較高等問題。戊二醛是近年來常用于種蛋消毒的一種消毒劑[3]，它刺激性小，在國內(nèi)許多孵化廳替代福爾馬林熏蒸消毒，為確定戊二醛的消毒效果，并篩選合適的消毒濃度，本試驗(yàn)選用1%、2%和5% 3 種濃度的戊二醛進(jìn)行種蛋的消毒效果對(duì)比試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1）試劑。戊二醛溶液：規(guī)格20%（g/g），產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥字(2014)162821278；培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)20190305），購于北京天壇生物制品股份有限公司，其制備按廠家提供的說明方法進(jìn)行。

2）試驗(yàn)儀器。生物安全柜（BSC-1360IIA2，北京東聯(lián)哈爾濱制造有限公司）、恒溫鼓風(fēng)干燥箱（2XFD-B5140，上海智聯(lián)分析儀器制造有限公司）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（2XDP-2160，上海智聯(lián)分析儀器制造有限公司）、立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器（LXB35L，合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司）、一次性使用培養(yǎng)皿（90 mm，泰州市順飛醫(yī)療器械有限公司）等。

3）被測(cè)種蛋。來自北京農(nóng)效禽業(yè)有限公司父母代種雞場(chǎng)280日齡羅曼褐種雞。

1.2 方法

1）雞蛋分組編號(hào)。從孵化廳取大小基本一致的200 枚雞蛋，從中隨機(jī)選取40 枚，隨機(jī)分成4 組，1%、2%、5%濃度組和對(duì)照組，每組10 枚，4 個(gè)組的雞蛋分別放置于消毒的塑料袋內(nèi)密封，常溫保存。

2）消毒液配制。將20%濃戊二醛溶液分別配制成濃度為1%、2%和5%的3 種溶液。

3）制作規(guī)板。規(guī)板用適當(dāng)硬度的鐵絲圈制成，具有2 個(gè)圓環(huán)的夾子，圓環(huán)直徑3.5 cm。

4）培養(yǎng)基制備。按照營養(yǎng)瓊脂的配比制備平板培養(yǎng)基。

5）物品滅菌。準(zhǔn)備40 個(gè)潔凈試管、包扎好的棉簽，121 ℃高壓滅菌30 min，滅菌的物品放置在紫外消毒后的生物安全柜。

6）雞蛋浸泡消毒。試驗(yàn)組的雞蛋分別用1%、2%和5%戊二醛浸泡消毒1 min，使雞蛋完全浸濕，取出后放置于超凈工作臺(tái)中自然干燥，然后放入消毒的塑料袋內(nèi)密封。

7）取樣。將被測(cè)種蛋夾在特制的規(guī)板內(nèi)，在裝有滅菌生理鹽水的試管中浸濕滅菌棉簽，在試管壁上擠去多余的鹽水，然后在規(guī)板范圍內(nèi)的雞蛋表面來回滾動(dòng)擦拭20 次，剪下棉簽頭，浸入裝有9 mL滅菌生理鹽水的試管中，每個(gè)雞蛋做3 次重復(fù)，分別涂擦不同的區(qū)域。

8）細(xì)菌培養(yǎng)。用滅菌的吸管吸取1 mL 細(xì)菌液，注入滅菌的空平皿內(nèi)，然后傾注熔化并冷卻到45～50 ℃的普通瓊脂，充分混合。

9）菌落記數(shù)。待普通瓊脂凝固后，置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，平板菌落記數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。

10）數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 軟件進(jìn)行處理，并進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

11）計(jì)算殺菌率。根據(jù)每個(gè)雞蛋3 次平行試驗(yàn)菌落數(shù)，計(jì)算平行樣菌落平均數(shù)，再計(jì)算10 個(gè)雞蛋的平均菌落數(shù)，求出殺菌率。殺菌率=（消毒前菌落數(shù)－消毒后菌落數(shù)）÷消毒前菌落數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

由表1 可知，1%、2%和5% 3 種濃度的戊二醛消毒液浸泡消毒雞蛋的殺菌率分別為86.70%、95.61%和96.95%，其中1%戊二醛與2%戊二醛和5%戊二醛以及對(duì)照組消毒效果差異顯著（P＜0.01），而2%戊二醛組和5%戊二醛組差異不顯著（P＞0.05）。從經(jīng)濟(jì)成本考慮，得出結(jié)論：消毒種蛋最合適的戊二醛濃度是2%。

表1 3 種不同濃度戊二醛對(duì)雞蛋表面消毒效果的比較

3 討論

本試驗(yàn)選用的戊二醛推薦使用濃度是2%或5%，從試驗(yàn)結(jié)果看，1%戊二醛殺菌率只有86.70%，不能滿足種蛋消毒95%以上殺菌率要求[4]，而2%戊二醛和5%戊二醛殺菌率分別為95.61%、96.95%，達(dá)到了要求，可以做為種蛋消毒藥。2%戊二醛和5%戊二醛殺菌率差異不顯著（P＞0.05），說明戊二醛濃度達(dá)到2%以后，隨濃度的增加，殺菌率并沒有明顯增加，所以戊二醛消毒種蛋最合適的濃度為2%。本次試驗(yàn)只做了種蛋表面殺菌效果試驗(yàn)，沒有涉及對(duì)種蛋孵化率、出雛率及對(duì)雛雞的影響等試驗(yàn)，有一定的局限性[5]。