馮崴，張俊，武文君，高蘭蘭

目前心血管疾病是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡的重要原因，而高血壓則是心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)高血壓患病人數(shù)激增。作為一種常見(jiàn)的慢性病，高血壓以動(dòng)脈血壓持續(xù)升高為主要特征，長(zhǎng)期發(fā)病會(huì)使心臟結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變，左心室肥厚及其舒張功能減退是高血壓的早期表現(xiàn)，隨著病情進(jìn)展則會(huì)出現(xiàn)心室收縮功能減退及心腔擴(kuò)大，最終導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生[1]。左心室肥厚(LVH)是高血壓導(dǎo)致的一種常見(jiàn)的靶器官損害，以心肌纖維增多為主要表現(xiàn)，目前其病理生理機(jī)制尚未完全闡明，但最新文獻(xiàn)報(bào)道，微小RNA(miRNAs)參與了心臟發(fā)育和重構(gòu)、心律失常、心肌肥厚等心血管生理病理過(guò)程[2]。循環(huán)miRNAs即血清和血漿中的miRNAs，在高溫、酸堿性、RNA酶等惡劣條件下均能保持極高的穩(wěn)定性[3]。關(guān)于循環(huán)微小RNA-26(miR-26b)水平變化與老年高血壓患者左心室肥厚及心功能的關(guān)系報(bào)道較為少見(jiàn)，現(xiàn)檢測(cè)老年高血壓患者循環(huán)miR-26b水平變化及超聲心動(dòng)圖參數(shù)并分析其相關(guān)性，以期為高血壓左心室肥厚的早期發(fā)現(xiàn)及診斷提供一定指導(dǎo)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月—2019年10月蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科診治老年高血壓患者132例，男80例，女52例，年齡62～85歲，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署同意書(shū)。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)診斷標(biāo)準(zhǔn)：高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2018年修訂版“中國(guó)高血壓防治指南”[4]，不使用降壓藥物，非同日 3次測(cè)量診室血壓，舒張壓≥90 mmHg和/或收縮壓≥140 mmHg。(2)納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡在60歲以上；符合以上高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)；均為原發(fā)性高血壓患者；未接受降血壓藥物治療；對(duì)本研究積極配合者。(3)排除標(biāo)準(zhǔn)：原發(fā)性醛固酮增多癥、嗜鉻細(xì)胞瘤、腎性高血壓等繼發(fā)性高血壓患者；先天性心臟畸形；合并肥厚性心肌病、心臟瓣膜病、收縮性心力衰竭等心臟?。荒承?duì)心率有影響的疾病或已服用影響心率的藥物；有吸煙、飲酒及糖尿病史的患者；合并嚴(yán)重的肝、脾、肺、腎等系統(tǒng)疾??；代謝性疾病和腫瘤患者；接受瓣膜置換術(shù)、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)、起搏器植入術(shù)及近1年有外科手術(shù)史的患者。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 臨床資料：收集患者的基本資料，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、病程、入院時(shí)舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)、誘因等。

1.3.2 循環(huán)miR-26b水平檢測(cè)：患者入院次日清晨空腹采取肘靜脈血5 ml，離心獲取血漿并移入無(wú)RNA酶滅菌管中，用Trizol法提取血漿總RNA并用分光光度計(jì)進(jìn)行定量，對(duì)miRNAs 3'末端加Poly (A)處理后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將合成的cDNA為模板采用SYBR Green Ⅰ法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)。miR-26b上游引物: 5'-ACACTCCAGCTGGGTTTGGTCCCCTTCAAC-3'，下游引物: 5'-GGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3'；同時(shí)以U6作為內(nèi)參基因，上游引物: 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物: 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。以2-ΔΔCt公式計(jì)算miR-26b的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.3 生化指標(biāo)檢測(cè)：取空腹肘靜脈血5 ml，離心后獲得血清，采用奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)空腹血糖(FPG)、三酰甘油 (TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST)、血肌酐(SCr)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。

1.3.4 超聲心動(dòng)圖檢查： 采用美國(guó) GEVivid7型彩色超聲儀，探頭頻率2.5～3.5 MHz，測(cè)量左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、室間隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及二尖瓣舒張?jiān)缙谘毫魉俜逯?E峰)及舒張晚期流速峰值(A峰)，并計(jì)算E/A值。取測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期的平均值。左心室心肌質(zhì)量(LVM) 采用Devereux公式計(jì)算，LVM =1.04[(LVEDD+IVST +LVPWT)3-LVEDD3]-13.6)，左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI) 再根據(jù)體表面積(BSA)計(jì)算，LVMI=LVM/BSA。根據(jù)美國(guó)超聲心動(dòng)圖協(xié)會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)[5]，男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2即診斷為L(zhǎng)VH。

2 結(jié) 果

2.1 2組臨床資料比較 根據(jù)循環(huán)miR-26b水平檢測(cè)結(jié)果，132例患者miR-26b的相對(duì)表達(dá)量為4.56～16.93，以中位數(shù)7.62為分組界值，<7.62納入miR-26b低水平組(對(duì)照組)76例，≥7.62納入miR-26b高水平組(觀察組)56例。2組患者的性別、年齡、BMI、病程、DBP、SBP、高血壓分級(jí)、誘因及生化指標(biāo)FPG、TG、TC、LDL-C、HDL-C、HbA1c、ALT、AST、SCr、CK、CK-MB、LDH、hs-CRP、BUN、UA比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組患者臨床特征比較

2.2 2組超聲心動(dòng)圖參數(shù)比較 與對(duì)照組比較，觀察組IVST、LVPWT、LVMI水平及LVH病例數(shù)均減少，E/A值升高(P<0.01)。2組患者LVEDD、LVEF比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，見(jiàn)表2 。

表2 2組患者超聲心動(dòng)圖參數(shù)比較

2.3 循環(huán)miR-26b水平與IVST、LVPWT、LVMI及E/A的相關(guān)性 循環(huán)miR-26b水平與IVST、LVPWT和LVMI均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.493、-0.526、-0.789，P均<0.001)，與E /A 值呈正相關(guān)(r=0.421,P<0.001)。

2.4 2組NYHA心功能分級(jí)比較 根據(jù)NYHA標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估結(jié)果，對(duì)照組心功能減退患者72例(94.74%)，高于觀察組26例(41.08%) (χ2=42.861，P=0.000)，見(jiàn)表3。

表3 2組患者NYHA心功能分級(jí)比較 [例(%)]

2.5 老年高血壓患者左心室肥厚的影響因素分析 Logistic多因素分析結(jié)果顯示，年齡、IVST、LVPWT及LVMI增加是導(dǎo)致老年高血壓患者左心室肥厚發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)； miR-26b水平升高則是保護(hù)因素(P<0.01)，見(jiàn)表4。

表4 老年高血壓患者左心室肥厚影響多因素Logistic分析

注：自變量賦值，年齡>75歲=1，≤75歲=0；IVST增加=1，未增加=0；LVPWT增加=1，未增加=0；LVMI男性>125 g/m2、女性>110 g/m2=1，男性≤125 g/m2、女性≤110 g/m2=0； miR-26b≥7.62=1，<7.62=0

2.6 循環(huán)miR-26b水平對(duì)老年高血壓患者左心室肥厚的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，miR-26b曲線下面積為0.836，95%CI為0.757～0.916(P<0.05) ，最佳臨界值為8.83， 敏感度為81.4%，特異度為78.9%，約登指數(shù)為0.603。miR-26b對(duì)老年高血壓患者LVH有較高的診斷價(jià)值，見(jiàn)圖1。

圖1 miR-26b診斷老年高血壓患者LVH的ROC曲線圖

3 討 論

LVH 是高血壓的常見(jiàn)并發(fā)癥之一，長(zhǎng)期高血壓可增加心臟左心室后負(fù)荷，因而導(dǎo)致慢性適應(yīng)性改變，即LVH的發(fā)生[6-7]。心肌重塑及質(zhì)量增加、心室壁增厚是LVH的重要特征。研究顯示高血壓患者合并LVH 時(shí)發(fā)生心律失常的比率顯著高于單純高血壓患者[8]。有文獻(xiàn)報(bào)道[9]，高血壓合并LVH 患者冠狀動(dòng)脈儲(chǔ)備能力顯著下降，導(dǎo)致急性心肌缺血事件極易發(fā)生從而使死亡風(fēng)險(xiǎn)增加。高血壓伴發(fā)LVH是心腦血管事件和死亡發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此及早準(zhǔn)確地診斷LVH臨床意義重大。目前常用的心電圖、磁共振成像及超聲心動(dòng)圖等診斷方法均有一定的弊端或局限性[10]，臨床上急需找到一種簡(jiǎn)單并且特異度和敏感度高的診斷方法。

miRNAs為一類在生物進(jìn)化過(guò)程中高度保守的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平具有調(diào)控基因表達(dá)的作用[11]。在細(xì)胞的分化、增殖、遷移、凋亡等多種病理生理過(guò)程中均有miRNAs參與。以往文獻(xiàn)報(bào)道[12]，miRNAs在消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)等疾病中均取得了較大的研究進(jìn)展。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)[13]，miRNAs參與了心臟發(fā)育和重構(gòu)，并且與心肌纖維化、心肌肥大及心力衰竭等多種心血管疾病密切相關(guān)。早期研究發(fā)現(xiàn)[14]，冠心病患者血漿中miR-26b的表達(dá)水平顯著低于健康人，miR-26b有望成為輔助診斷冠心病的標(biāo)志物。趙欣等[15]報(bào)道，在建立的小鼠心房纖維化—房顫模型中，miR-26通過(guò)抑制心房組織中血管緊張素Ⅱ/Kruppel樣因子4/轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (angiotensin / Kruppel like factor 4/transforming growth factor-β,Ang Ⅱ/KLF 4/TGF-β)信號(hào)通路的激活，從而起到抗房顫、心房纖維化的效應(yīng)。本研究檢測(cè)了132例老年高血壓患者靜脈血miR-26b水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其相對(duì)表達(dá)量在4.56～16.93之間，中位數(shù)為7.62。

為探討miR-26b水平與LVH發(fā)生的關(guān)系，本研究分析顯示，與對(duì)照組相比，觀察組室間隔厚度、左心室后壁厚度、左心室質(zhì)量指數(shù)及左心室肥厚病例數(shù)均顯著減少 (P<0.01)。室間隔厚度和左心室后壁厚度決定了左心室質(zhì)量指數(shù)，而左心室質(zhì)量指數(shù)可直接作為衡量左心室肥厚的重要臨床指標(biāo)，左心室質(zhì)量指數(shù)值越大則左心室肥厚越嚴(yán)重[16]。該結(jié)果提示循環(huán)miR-26b水平越低，越容易發(fā)生左心室肥厚，且與伍崇海[17]報(bào)道相符。二尖瓣舒張?jiān)缙谘毫魉俜逯迪陆?，舒張晚期流速峰值升高，則兩者比值(E/A值)下降，E/A值<1，說(shuō)明左心室舒張功能下降[18]。文獻(xiàn)報(bào)道[19]，老年高血壓伴發(fā)左心室肥厚患者常出現(xiàn)左心室舒張功能下降。本研究顯示，2組患者E/A值均<1，且對(duì)照組顯著低于觀察組 (P<0.01)。提示2組患者均出現(xiàn)左心室舒張功能不全，且miR-26b水平越低越嚴(yán)重。最新研究表明，抑制miR-26b后可使脂肪細(xì)胞分化被有效抑制，抑制miR-26b對(duì)細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。推測(cè)可能是miR-26b水平較低的老年高血壓患者，更利于心肌細(xì)胞增殖且發(fā)生代償性肥大，心肌間質(zhì)膠原隨之增多，心肌發(fā)生纖維化樣變，持續(xù)肥厚的心肌出現(xiàn)功能和生化反應(yīng)異常，使其順應(yīng)性和僵硬度均發(fā)生改變，進(jìn)而心臟舒張功能出現(xiàn)進(jìn)行性下降，最終導(dǎo)致心臟舒張功能不全。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，循環(huán)miR-26b水平與室間隔厚度、左心室后壁厚度和左心室質(zhì)量指數(shù)均呈負(fù)相關(guān)(P均<0.01)，與E /A 值呈正相關(guān)(P<0.01)。根據(jù)NYHA標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估顯示，miR-26b低水平組心功能減退比例顯著高于miR-26b高水平組(P<0.05)。以上結(jié)果均證實(shí)miR-26b水平低的老年高血壓患者更容易合并左心室肥厚及心功能減退。

多因素分析結(jié)果顯示，年齡、室間隔厚度、左心室后壁厚度及左心室質(zhì)量指數(shù)增加是導(dǎo)致老年高血壓患者左心室肥厚發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)；miR-26b水平升高是保護(hù)因素(P<0.05)。有研究指出[20]，隨著年齡的增加，心肌細(xì)胞體積增大，心臟膠原成分和心臟質(zhì)量增加，長(zhǎng)期超負(fù)荷壓力及左心室適應(yīng)性反應(yīng)衰竭可能導(dǎo)致了左心室肥厚的發(fā)生，因而老年患者LVH的發(fā)生率升高。室間隔厚度和左心室后壁厚度增加，左心室質(zhì)量指數(shù)隨之增加，當(dāng)男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2時(shí)即診斷為左心室肥厚。以往研究報(bào)道，大鼠心臟肥厚組織中miR-26a和miR-26b表達(dá)下調(diào)，并且通過(guò)對(duì)靶點(diǎn)糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)進(jìn)行抑制以調(diào)控心臟肥厚過(guò)程[21]。本研究結(jié)果提示，miR-26b在老年高血壓患者心室肥厚過(guò)程亦發(fā)揮了調(diào)控作用，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。ROC曲線分析顯示，曲線下面積為0.836，95%CI為0.757～0.916，最佳臨界值為8.83，敏感度81.4%，特異度78.9%，提示miR-26b相對(duì)表達(dá)量<8.83即可診斷為心室肥厚，且具有較高的敏感度和特異度。

綜上，循環(huán)miR-26b水平與老年高血壓患者左心室肥厚呈負(fù)相關(guān)，與左室舒張功能呈正相關(guān)，是老年高血壓患者發(fā)生左心室肥厚伴舒張功能不全的保護(hù)因素，同時(shí)可作為潛在的生物標(biāo)志物用于老年高血壓患者左心室肥厚的診斷。今后需進(jìn)一步開(kāi)展循環(huán)miR-26b對(duì)左心室肥厚發(fā)揮保護(hù)作用機(jī)制的研究。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

馮崴：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，論文撰寫(xiě)；張?。禾岢鲅芯克悸?，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；武文君、高蘭蘭：實(shí)施研究過(guò)程，資料搜集整理，論文修改