燕飛虎，鄒 瑞，王一堯，王芳芳，冉浩男，王 燕

1.海南省腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，海南 ?？?570100；

2.海南省腫瘤醫(yī)院肝膽胰外科，海南 ?？?570100；

3.海南省腫瘤醫(yī)院放療科，海南 ?？?570100；

4.海南省腫瘤醫(yī)院血液腫瘤科，海南 ?？?570100

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，發(fā)病率位居中國(guó)惡性腫瘤前列［1］，其早期臨床癥狀非常隱匿，一般確診時(shí)已是中晚期。找到有效的生物標(biāo)志物對(duì)胃癌進(jìn)行早期篩查和檢測(cè)，有利于對(duì)患者及時(shí)治療，提高患者的生存率。胃癌的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，可能與環(huán)境、幽門螺桿菌感染、遺傳等多種因素有關(guān)［2］，其中基因異常表達(dá)與腫瘤的關(guān)系是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5（protein arginine methyltransferase 5，PRMT5）是一種能調(diào)控細(xì)胞周期的酶，其定位于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，在多種腫瘤中均有異常表達(dá)，并能影響患者的預(yù)后［3-5］。目前關(guān)于PRMT5在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用的相關(guān)研究尚少見(jiàn)。本研究觀察PRMT5在胃癌組織中的表達(dá)水平，旨在探討其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移能力的影響，為臨床診療提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集2016年5月—2019年1月在海南省腫瘤醫(yī)院確診為胃癌并進(jìn)行手術(shù)治療的患者的胃癌組織及其癌旁組織（距離癌組織＞5 cm）標(biāo)本88例。其中男性48例，女性40例；年齡45～70歲，平均（54.33±10.47）歲。收集方式：確診患者行胃癌手術(shù)時(shí)在胃鏡觀察下切下胃癌組織；保存方式：將切下的2～3塊胃癌組織經(jīng)液氮快速冷凍后置-80 ℃保存以備提取基因組DNA。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合胃癌的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，并經(jīng)病理學(xué)檢查確診；年齡＞18歲；術(shù)前均未進(jìn)行放化療等相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他系統(tǒng)或器官腫瘤者；處于妊娠或哺乳期者；臨床資料不全者。本研究經(jīng)海南省腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。

1.3 方法

1.3.1 主要材料與試劑

實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）試劑盒、10%胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（AnnexinⅤ-FITC/PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒均購(gòu)自上海滬震生物科技有限公司，BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司，聚丁二酸丁二醇酯［poly（1,4-butylene succinate），PBS］、苯酚購(gòu)自北京康普匯維科技有限公司，TRIzol 總RNA提取試劑購(gòu)自合肥博美生物科技有限公司，PRMT5單克隆抗體、內(nèi)參GAPDH抗體、Transwell小室均購(gòu)自上海安研商貿(mào)有限公司，人胃癌細(xì)胞系SGC-7901由海南省腫瘤醫(yī)院醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心提供。

1.3.2 主要儀器

WS-300恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自上海旦鼎國(guó)際貿(mào)易有限公司，YKDZ-55顯微鏡購(gòu)自上海永科光學(xué)儀器有限公司，DXFLEX流式細(xì)胞檢測(cè)儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司，酶標(biāo)儀購(gòu)自上海纖檢儀器有限公司，DYCP-31DN瓊脂糖水平電泳儀購(gòu)自上虞艾科儀器設(shè)備有限公司，DP/ZB紫外線投射儀購(gòu)自北京亞歐德鵬科技有限公司。

1.3.3 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)PRMT5在胃癌組織中的表達(dá)

將88例胃癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本放入預(yù)冷的研缽中，研磨成粉，加入適量RIPA裂解液，裂解30 min后，離心15 min，取上清液。按照BCA試劑盒說(shuō)明書上的操作步驟檢測(cè)蛋白濃度。將蛋白樣品和上樣緩沖液充分混勻，置于沸水中煮沸變性5 min，將變性的蛋白放入十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）凝膠上樣孔中，每孔加入25 μL，經(jīng)凝膠電泳分離蛋白組分后，將蛋白轉(zhuǎn)印于聚偏二氟乙烯膜上，加入5%脫脂奶粉封閉2 h；加入PRMT5單克隆抗體（1∶500）于4 ℃低速搖動(dòng)溫育過(guò)夜，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶1 000）于37 ℃低速搖動(dòng)溫育45 min，以GAPDH為內(nèi)參，電化學(xué)發(fā)光顯色后膠片曝光并分析結(jié)果。PRMT5蛋白在胃癌組織中的表達(dá)量以胃癌組織PRMT5條帶灰度值與對(duì)應(yīng)的GAPDH條帶灰度值之比表示。

1.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)

從液氮中取出細(xì)胞系，于37 ℃溶解后加到含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，離心去除上清液，向細(xì)胞沉淀物中加入細(xì)胞培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，接種到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，于37 ℃、濕度95%、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的環(huán)境中培養(yǎng)24 h。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，去除培養(yǎng)液，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901細(xì)胞以105個(gè)細(xì)胞/mL接種至6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔2 mL，培養(yǎng)過(guò)夜。按照LipofectaminTM2000轉(zhuǎn)染說(shuō)明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染分3組：PRMT5小干擾RNA（PRMT5-siRNA）組加入12 μL PRMT5-siRNA轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞；陰性對(duì)照無(wú)意義siRNA序列（siRNANC）組加入12 μL siRNA空載對(duì)照轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞；對(duì)照組為未轉(zhuǎn)染的SGC-7901細(xì)胞。

靶向PRMT 5 的siRNA 序列順義鏈為5’-GGGACUGGAAUACGCUAAUTT-3’，反義鏈為5’-AUUAGCGUAUUCCAGUCCCTT-3’；陰性對(duì)照（si）序列順義鏈為5’-UUCUCCGA ACGUGUCACGUTT-3’，反義鏈為5’-ACGUG ACACGUUCGGAGAATT-3’。

1.3.6 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中PRMT5 mRNA表達(dá)和蛋白水平檢測(cè)

轉(zhuǎn)染24 h后，將1.3.5中的3組細(xì)胞用TRIzol法提取總RNA，用RTFQ-PCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將cDNA，產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增：95 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃ 30 s，54 ℃ 45 s，72 ℃ 60 s，72 ℃ 10 min，35個(gè)循環(huán)，分別取5 μL RTFQ-PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下拍照，采用Image Pro Plus圖像分析軟件比較電泳條帶相對(duì)光密度值，以GAPDH為內(nèi)參基因，分析PRMT5 mRNA相對(duì)表達(dá)量。取轉(zhuǎn)染48 h后1.3.5中3組細(xì)胞，轉(zhuǎn)移細(xì)胞至新的離心管，離心5 min，加入TRIzol并進(jìn)行裂解反應(yīng)30 min，離心取上清液，BCA蛋白定量試劑檢測(cè)蛋白濃度，按照1.3.3方法檢測(cè)各組細(xì)胞PRMT5蛋白表達(dá)水平。

1.3.7 細(xì)胞增殖檢測(cè)

將轉(zhuǎn)染24 h的上述3組細(xì)胞以3×105個(gè)/mL分別接種于96孔板細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加入150 μL細(xì)胞懸液，置于37 ℃、濕度95%、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的環(huán)境中分別培養(yǎng)12、24和48 h后，每孔加入細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）試劑10 μL，37 ℃培養(yǎng)4 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定各組450 nm處的光密度（D）值，計(jì)算細(xì)胞增殖率。細(xì)胞增殖率=（D轉(zhuǎn)染組細(xì)胞/D對(duì)照組細(xì)胞）×100%。

1.3.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

取培養(yǎng)24 h的1.3.5中各組細(xì)胞，將細(xì)胞分別重懸于RPMI-1640培養(yǎng)基中，將重懸后的各組細(xì)胞接種于96孔板中，4×103個(gè)/孔，于37 ℃、濕度95%、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的環(huán)境中分別培養(yǎng)12、24和48 h后，胰蛋白酶消化重懸，轉(zhuǎn)移至離心管，調(diào)整每管細(xì)胞數(shù)約為1×105個(gè)，預(yù)冷PBS洗滌2次，按照凋亡試劑盒說(shuō)明，向細(xì)胞中加入AnnexinⅤ10 μL，避光溫育10 min，預(yù)冷PBS洗滌2次，向每管中加入PI溶液4 μL，立即采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/（正常細(xì)胞數(shù)+凋亡細(xì)胞數(shù)）×100%。

1.3.9 細(xì)胞遷移能力檢測(cè)

取培養(yǎng)24 h的1.3.5中各組細(xì)胞，將其接種于24孔板內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后，用滅菌200 μL吸嘴在細(xì)胞單層上劃痕，用倒置顯微鏡觀察劃痕區(qū)域?qū)挾炔⑴恼?，然后置于培養(yǎng)箱中溫育24 h后在倒置顯微鏡下觀察劃痕區(qū)域?qū)挾茸兓?，用Image軟件測(cè)量劃痕區(qū)域?qū)挾?，?jì)算各組細(xì)胞對(duì)應(yīng)細(xì)胞的劃痕愈合率，每組細(xì)胞設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取平均值為最終結(jié)果。

1.3.10 細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)

將Transwell小室進(jìn)行包被Matrigel基底膠處理。在24孔中加入含10%無(wú)雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基600 μL，將小室放在其中進(jìn)行水化預(yù)處理，小室上孔加入含10%血清培養(yǎng)基，于37 ℃、濕度95%、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的環(huán)境中培養(yǎng)24 h，取出小室，多聚甲醛固定30 min，結(jié)晶紫染色液染色15 min。隨機(jī)選取5個(gè)視野拍照計(jì)數(shù)。

1.3.11 Western blot檢測(cè)蛋白水平

取轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的1.3.5中各組細(xì)胞，按照1.3.3 中方法提取細(xì)胞蛋白并檢測(cè)培養(yǎng)48 h時(shí)cleaved caspase 3、磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated-AKT，p-AKT）蛋白水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以Bioimagining System灰度測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量條帶灰度值；采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用（）表示，比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PRMT5在胃癌組織中高表達(dá)

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，胃癌組織中PRMT5的蛋白相對(duì)表達(dá)量（0.54±0.64）高于癌旁組織（0.24±0.05）（P＜0.01，圖1）。

圖1 PRMT5在胃癌組織中的表達(dá)Fig.1 Expression of PRMT5 in gastric cancer tissues

2.2 胃組織中PRMT5蛋白表達(dá)水平與病理學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，PRMT5蛋白表達(dá)量在不同胃癌病理分級(jí)、TNM分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），而在不同性別、年齡患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05，表1）。

2.3 siRNA能沉默人胃癌細(xì)胞系SGC-7901 PRMT5基因的表達(dá)

空脂質(zhì)體、siRNA-NC、PRMT5-siRNA轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC-7901 48 h后，RTFQ-PCR和Western blot檢測(cè)各組織中PRMT5 mRNA表達(dá)和蛋白水平。結(jié)果顯示，siRNA-NC組細(xì)胞中PRMT5 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量（0.83±0.32）與對(duì)照組（0.81±0.40）相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），PRMT5-siRNA組細(xì)胞中PRMT5 mRNA（0.21±0.31）和蛋白相對(duì)表達(dá)量（0.39±0.30）低于對(duì)照組和siRNA-NC組（0.41±0.29、0.83±0.32）（P＜0.05，圖2）。

表1 PRMT5表達(dá)水平與胃癌臨床特征的關(guān)系Tab.1 Relationship between expression level of PRMT5 and clinical features of gastric cancer

圖2 PRMT5在轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中的表達(dá)Fig.2 Expression of PRMT5 in cells after transfection

2.4 沉默PRMT5能抑制人胃癌細(xì)胞系SGC-7901增殖

在12 h時(shí)，PRMT5-siRNA組細(xì)胞增殖率為（8.01±1.00）%，顯著低于siRNA-NC組的（21.10±2.14）%和對(duì)照組的（22.21±2.00）%（圖3）。

圖3 沉默PRMT5對(duì)人胃癌細(xì)胞系SGC-7901增殖的影響Fig.3 Effects of silencing PRMT5 on proliferation of human gastric cancer cell line SGC-7901

2.5 沉默PRMT5能促進(jìn)胃癌細(xì)胞系SGC-7901凋亡

PRMT5-siRNA組Cleaved caspase 3蛋白相對(duì)表達(dá)量為0.75±0.04，顯著高于對(duì)照組的0.21±0.02和siRNA-NC組的0.22±0.02。12 h時(shí)PRMT5-siRNA組細(xì)胞凋亡率為（12.21±1.01）%，顯著高于對(duì)照組的（2.10±0.10）%和siRNA-NC組的（2.30±0.12）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；24 h時(shí)PRMT5-siRNA組細(xì)胞凋亡率為（17.25±3.01）%，顯著高于對(duì)照組的（4.25±0.89）%和siRNA-NC組的（4.15±0.98）%；48 h時(shí)PRMT5-siRNA組細(xì)胞凋亡率為（20.89±5.21）%，顯著高于對(duì)照組的（5.21±1.02）%和siRNA-NC組的（5.20±1.11）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4）。

圖4 沉默PRMT5對(duì)人胃癌細(xì)胞系SGC-7901凋亡的影響Fig.4 Effects of silencing PRMT5 on apoptosis of human gastric cancer cell line SGC-7901

2.6 PRMT5能抑制人胃癌細(xì)胞系SGC-7901遷移和侵襲能力

PRMT5-siRNA組劃痕愈合率為（42.52±5.32）%，顯著低于對(duì)照組的（84.88±7.65）%和siRNA-NC組的（84.25±7.52）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PRMT5-siRNA組細(xì)胞侵襲數(shù)（22.21±1.36）個(gè)，顯著低于對(duì)照組的（240.69±16.98）個(gè)和siRNA-NC組的（241.31±17.52）個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖5）。

圖5 沉默PRMT5對(duì)人胃癌細(xì)胞系SGC-7901遷移能力和侵襲能力的影響Fig.5 Effects of silencing PRMT5 on migration and invasion abilities of human gastric cancer cell line SGC-7901

2.7 抑制PRMT5的表達(dá)對(duì)P13K、AKT、p-AKT蛋白水平的影響

各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h，Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，PRMT 5-siRNA 組P13K、AKT、p-AKT蛋白相對(duì)表達(dá)分別為0.11±0.02、0.2 1±0.01、0.2 3±0.02，顯著低于對(duì)照組（0.22±0.02、0.58±0.06、0.57±0.08）和siRNA-NC 組（0.2 3±0.03、0.58±0.05、0.57±0.07），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖6）。

圖6 抑制PRMT5的表達(dá)對(duì)P13K、AKT、p-AKT蛋白水平的影響Fig.6 Effects of PRMT5 inhibition on level of P13K,AKT and p-AKT

3 討 論

胃癌惡性程度高，生存率低，預(yù)后較差［7］。探討胃癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移的病理生理機(jī)制對(duì)胃癌的預(yù)防和治療具有重要意義。PRMT5是一種Ⅱ型蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，它可改變生物的遺傳表觀特性，能阻礙抑癌基因的轉(zhuǎn)錄，還能調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞異常增殖，與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［8-10］。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于PRMT5與胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移關(guān)系的研究較少。

基因在癌組織或鄰近正常組織中異常表達(dá)，則認(rèn)為該基因可能具有潛在的調(diào)控癌細(xì)胞增殖及凋亡的作用［11-12］。Kanda等［11］研究發(fā)現(xiàn)，PRMT5在胃癌組織中高表達(dá)，與胃癌的惡性轉(zhuǎn)移有關(guān)。Kong等［13］實(shí)驗(yàn)指出，使用PRMT5抑制劑可抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織的PRMT5蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著高于癌旁組織。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，說(shuō)明PRMT5高表達(dá)是胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素，可能是潛在調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖的致癌基因。

腫瘤分化程度的高低、對(duì)周圍組織或器官的侵犯與否、侵犯的程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是評(píng)估腫瘤患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的重要指標(biāo)。Kong等［13］研究表明，PRMT5蛋白相對(duì)表達(dá)量與胃癌患者的TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，PRMT5蛋白相對(duì)表達(dá)量在病理分級(jí)、TNM分期更高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中更高。本研究觀點(diǎn)與上述研究觀點(diǎn)一致，提示PRMT5高表達(dá)與胃癌的轉(zhuǎn)移惡化密切相關(guān)。

RNA干擾是指由雙鏈RNA誘發(fā)的、同源mRNA的基因沉默，該技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，可用于基因功能的探索及惡性腫瘤的基因治療［14-15］。如沉默P27RF-Rho基因可降低肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力［16］。胃癌細(xì)胞的增殖分化可通過(guò)沉默長(zhǎng)鏈非編碼RNAUCA1基因?qū)崿F(xiàn)，可作為腫瘤基因靶向治療的依據(jù)［17］。目前關(guān)于沉默PRMT5基因?qū)ξ赴┰鲋场⒌蛲龊瓦w移影響的研究較少，為進(jìn)一步研究PRMT5基因在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，本研究將PRMT5質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞SGC-7901中，結(jié)果顯示，通過(guò)沉默PRMT5基因表達(dá)，可抑制胃癌細(xì)胞系SGC-7901的增殖、遷移并促進(jìn)其凋亡，說(shuō)明PRMT5促進(jìn)胃癌的進(jìn)展，這可能是因?yàn)?，一方面PRMT5可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期蛋白和相關(guān)調(diào)節(jié)因子，加速癌細(xì)胞增殖分裂；另一方面，PRMT5可干擾組蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1甲基化轉(zhuǎn)錄因子E2F1［18］，而甲基化的E2F1是細(xì)胞凋亡的促進(jìn)因子。

細(xì)胞凋亡也稱為“固縮壞死”、“程序性細(xì)胞死亡”或“細(xì)胞自殺”，是由基因介導(dǎo)的一系列的細(xì)胞學(xué)變化，是存在于細(xì)胞中的自毀機(jī)制［19］。正常情況下，通過(guò)這個(gè)過(guò)程，機(jī)體能清除衰老及異常細(xì)胞，并在維持很多細(xì)胞功能方面有重要作用，如該過(guò)程發(fā)生病理性干擾，腫瘤細(xì)胞則會(huì)因?yàn)榇嬖诘蛲鋈毕荻粩嘣鲋常?0］。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中最主要的終末剪切酶，也是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分，其主要底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶與DNA修復(fù)、基因完整性監(jiān)護(hù)有關(guān)，能負(fù)調(diào)控使Ca2+/Mg2+依賴性核酸內(nèi)切酶的活性增高，裂解核小體間的DNA，引起細(xì)胞凋亡［21-22］。本研究中沉默PRMT5基因后檢測(cè)cleaved caspase 3蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，沉默PRMT5能上調(diào)cleaved caspase 3的表達(dá)，說(shuō)明沉默PRMT5的表達(dá)導(dǎo)致胃癌細(xì)胞系SGC-7901的凋亡率增加可能通過(guò)上調(diào)cleaved caspase 3的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。

PI3K/AKT信號(hào)通路是腫瘤形成中至關(guān)重要的信號(hào)通路。該通路主導(dǎo)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲等過(guò)程，一旦紊亂會(huì)導(dǎo)致癌癥、神經(jīng)病變等［23］。PI3K是一種胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶，與V-SRC和V-RAS等癌基因的產(chǎn)物相關(guān)，且PI3K本身具有絲氨酸/蘇氨酸激酶的活性，也具有磷脂酰肌醇激酶的活性，當(dāng)接受來(lái)自酪氨酸激酶和G蛋白偶聯(lián)受體的信號(hào)后，PI3K的p85調(diào)節(jié)亞基即被募集到臨近質(zhì)膜的部位，使AKT從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上，并在3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1和3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶2的輔助下，分別使AKT蛋白上的蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)和絲氨酸磷酸化位點(diǎn)磷酸化而使其激活，刺激腫瘤細(xì)胞的增殖［24-25］。有研究顯示，胃癌細(xì)胞的凋亡可通過(guò)抑制PI3K/AKT信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)［26］。也有文獻(xiàn)指出，胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力降低與影響PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān)［27］。本研究結(jié)果顯示，沉默PRMT5能下調(diào)PI3K、p-AKT蛋白水平，且能降低胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，說(shuō)明PRMT5促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，抑制其細(xì)胞凋亡是通過(guò)激活PI3K/AKT信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，PRMT5在胃癌組織中表達(dá)明顯升高，其表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、惡化密切相關(guān)，下調(diào)PRMT5的表達(dá)可明顯減弱胃癌細(xì)胞的增殖、遷移能力，同時(shí)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡。