付 剛

焦作市第二人民醫(yī)院病理科,河南 焦作 454000

非小細(xì)胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）是臨床上較為常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，相關(guān)研究顯示NSCLC的發(fā)病率可達(dá)145/10萬(wàn)人以上，且近年來(lái)呈現(xiàn)出了一定的上升趨勢(shì)［1］。NLCLC的遠(yuǎn)期生存預(yù)后較差，臨床上缺乏相應(yīng)的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)［2］。血清學(xué)指標(biāo)在惡性腫瘤的診斷及臨床預(yù)后評(píng)估過(guò)程中具有重要的參考意義，其檢測(cè)較為方便、經(jīng)濟(jì)、微創(chuàng)，且短期內(nèi)可以反復(fù)測(cè)量。近年來(lái)在對(duì)于NSCLC的發(fā)病機(jī)制的研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)腺苷激酶-1（thymidine kinase 1，TK-1）在促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞來(lái)源惡性腫瘤的增殖過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用，TK-1可以通過(guò)磷酸化脫氧核苷酸，增強(qiáng)NSCLC病情的進(jìn)展［3-5］。本研究通過(guò)選取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民醫(yī)院進(jìn)行診治的78例NSCLC患者作為研究對(duì)象，探討了血清中TK-1的表達(dá)，揭示了其與患者臨床預(yù)后的關(guān)系，從而為臨床上肺癌患者的預(yù)后評(píng)估提供可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民醫(yī)院進(jìn)行診治的78例NSCLC患者作為NSCLC組，同時(shí)測(cè)定30例健康對(duì)象作為健康組。 NSCLC組中，男49例，女29例，年齡47～83歲，平均年齡（63.8±12.9）歲，病理學(xué)類型：腺癌53例、鱗癌25例；分化程度：高分化22例、中分化26例、低分化30例；TNM分期：Ⅰ期29例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例、Ⅳ期11例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。健康組30例中，男19例，女11例，年齡41～79歲，平均年齡（61.0±11.8）歲。NSCLC組和健康組的年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）NSCLC患者經(jīng)CT、MRI、病理學(xué)檢查證實(shí)，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)［4］；（2）接受血清TK-1檢查前，患者無(wú)放化療、生物及免疫治療病史；（3）本研究在我院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審批通過(guò)后實(shí)施。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他部位腫瘤疾病的患者；（2）伴有精神、認(rèn)知功能障礙的患者。

1.3 血清TK-1檢測(cè)方法

用ELISA法檢測(cè)TK-1水平，采用患者的肘部靜脈血5 ml，1 000 r/min離心10 min，取上清液待測(cè)。密封袋中取出實(shí)驗(yàn)板條，空白孔中加入樣品或者稀釋液100 ul/孔，檢測(cè)孔中加入標(biāo)本100 ul/孔，膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，36℃條件下孵育60～90 min，磷酸鹽緩沖液清洗5次，空白對(duì)照孔中加入生物素抗體稀釋液100 ul，檢測(cè)孔中加入生物素抗體檢測(cè)液100 ul，膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，36℃條件下孵育30～60 min，空白對(duì)照孔中加入酶結(jié)合稀釋液100 ul，檢測(cè)孔中加入酶結(jié)合檢測(cè)液100 ul，膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，磷酸鹽緩沖液清洗5次，加入TMB顯色底液（品牌：YSRIBIO，湖州英創(chuàng)生物科技公司），避光36℃孵育15 min，加入終止液100 ul，3 min內(nèi)檢測(cè)OD450值，BioTek酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)伯騰儀器有限公司。

1.4 血清TK-1參考值

本研究在查閱大量文獻(xiàn)的及臨床數(shù)據(jù)分析的基礎(chǔ)上［5］，健康人群的血清TK-1水平范圍0～2.0 pmol/L，＞2.0 pmol/L判定為異常（TK-1陽(yáng)性）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究收集的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行處理，血清TK-1、年齡等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；TK-1陽(yáng)性率、性別等計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組和健康組的血清TK-1水平及陽(yáng)性率比較

血清TK-1水平及陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比，NSCLC組高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 NSCLC組和健康組的血清TK-1水平及陽(yáng)性率比較

2.2 NSCLC組血清TK-1陽(yáng)性率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

NSCLC組患者的血清TK-1陽(yáng)性率均與患者的分化程度、TNM分期、病灶最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 NSCLC組血清TK-1陽(yáng)性率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

2.3 NSCLC組血清TK-1陽(yáng)性率與患者預(yù)后的關(guān)系

血清TK-1陽(yáng)性NSCLC患者的3年存活率為28.57%，顯著的低于TK-1陰性患者的51.16%（P＜0.05）；血清TK-1陽(yáng)性NSCLC患者的中位生存時(shí)間21個(gè)月顯著的短于血清TK-1陰性患者的27個(gè)月（P＜0.05），見(jiàn)表3，圖1。

表3 NSCLC組血清TK-1陽(yáng)性率與患者預(yù)后的關(guān)系

圖1 TK-1陽(yáng)性率與NSCLC患者生存時(shí)間的關(guān)系

3 討論

NSCLC癌細(xì)胞生物學(xué)浸潤(rùn)及侵襲的能力較強(qiáng)，對(duì)于腹腔內(nèi)臟器浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高。在多種病理生理機(jī)制的激活過(guò)程中，NSCLC細(xì)胞生物學(xué)行為的改變，能夠加劇NSCLC患者整體臨床預(yù)后的惡化［6］。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者多臟器功能衰竭的比例可超過(guò)35%以上，其遠(yuǎn)期總體生存時(shí)間不足38個(gè)月［7-8］。迄今為止臨床上仍然缺乏對(duì)于NSCLC預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)，雖然血清CA125及CA199等腫瘤生物學(xué)指標(biāo)可以在一定程度上反應(yīng)患者遠(yuǎn)期預(yù)后，但其預(yù)測(cè)靈敏度不足40%，特異度也較低［9］。尋找合適和敏感的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，是臨床醫(yī)師共同關(guān)注的課題，同時(shí)可以為臨床上早期臨床決策及肺癌患者出院后的重點(diǎn)隨訪提供依據(jù)。

在NSCLC肺癌細(xì)胞DNA增殖的過(guò)程中，需要經(jīng)過(guò)脫氧核苷酸的磷酸化修飾，TK-1能夠影響到癌細(xì)胞核分裂過(guò)程中底物限速酶的活性，導(dǎo)致限速酶的過(guò)度激活，增加了DNA異常分裂合成的速度［10-11］。TK-1對(duì)于癌細(xì)胞內(nèi)MAPK或者P16下游信號(hào)通路的激活，能夠增加癌細(xì)胞基因錯(cuò)配的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致基因錯(cuò)配修復(fù)能力的下降［12-13］?；仡檱?guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)可以發(fā)現(xiàn)，TK-1在NSCLC、甲狀腺癌及肝癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，并能夠?yàn)榧膊〉脑\斷及臨床預(yù)后提供一定的參考。

本研究發(fā)現(xiàn)，在NSCLC患者血清中TK-1的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照人群，NSCLC患者體內(nèi)TK-1的異常高表達(dá)可以通過(guò)促進(jìn)癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增，增加了癌基因異常整合和轉(zhuǎn)錄翻譯的風(fēng)險(xiǎn)，最終促進(jìn)了NSCLC的病情進(jìn)展。唐興等［14-15］研究者通過(guò)回顧性分析了73例樣本量的NSCLC患者的門(mén)診血清學(xué)診斷資料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病例組患者血清中的TK-1可上升25%以上，明顯高于正常人群，這與本研究的結(jié)論較為一致。對(duì)于TK-1與患者臨床特征的分析可以發(fā)現(xiàn)，分化程度較差、TNM分期較晚、病灶直徑較大、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清中的TK-1明顯上升，其中低分化肺癌患者的血清TK-1陽(yáng)性率可達(dá)50%以上，而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的血清TK-1的陽(yáng)性率甚至可達(dá)60%以上，這些均證實(shí)TK-1的表達(dá)與肺癌患者的臨床特征密切相關(guān)。但需要注意的是，本研究中并未發(fā)現(xiàn)腺癌、鱗癌等患者血清TK-1的表達(dá)差別，提示不同的上皮細(xì)胞來(lái)源并不會(huì)影響到TK-1的表達(dá)，TK-1的表達(dá)缺乏細(xì)胞細(xì)胞性。對(duì)于TK-1與NSCLC患者遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系分析可見(jiàn)，TK-1高表達(dá)的患者，其遠(yuǎn)期預(yù)后較差，3年生存率較低，且中位生存時(shí)間僅僅為21個(gè)月，表明TK-1與患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)，臨床上可以通過(guò)隨訪NSCLC患者血清中TK-1的表達(dá)，進(jìn)而評(píng)估出院患者的生存預(yù)后。但需要注意的是，唐興等研究者并未發(fā)現(xiàn)TK-1與NSCLC患者3年生存率的關(guān)系，考慮樣本量的不足、臨床資料的收集偏移等，均可能影響到了研究結(jié)論的差別。

綜上所述，在NSCLC患者血清中TK-1的表達(dá)明顯上升，TK-1與肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化程度及臨床分期等具有密切的聯(lián)系，臨床上通過(guò)隨訪血清中TK-1的表達(dá)，可以為評(píng)估肺癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后提供一定的參考。