宇 凌， 陳培強(qiáng)， 張 果， 蔡 旭

（1.山東省菏澤市動(dòng)物疫預(yù)防控制中心，山東菏澤274000；2.山東省菏澤市定陶區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，山東菏澤274000；3.山東省菏澤市定陶區(qū)馬集鎮(zhèn)政府，山東菏澤 274000；4.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院，遼寧沈陽110000）

隨著我國(guó)人民生活水平的不斷提高，群眾對(duì)奶產(chǎn)品的需求量和奶品質(zhì)的要求也在相應(yīng)提高。當(dāng)前畜牧業(yè)正朝著減少畜產(chǎn)品中的藥物殘留、保證動(dòng)物產(chǎn)品綠色安全的方向發(fā)展，因此，我國(guó)對(duì)動(dòng)物飼料中添加抗生素等藥物添加劑的控制標(biāo)準(zhǔn)也越來越嚴(yán)格。

有研究發(fā)現(xiàn)酶制劑具有強(qiáng)大的生物學(xué)功能，具備替代抗生素功能的潛在優(yōu)勢(shì)，且綠色環(huán)保，因此，近年來動(dòng)物用功能性酶制劑受到研究人員的青睞，并在畜牧生產(chǎn)應(yīng)用中取得了理想的成果。酶制劑的種類繁多，根據(jù)不同日糧中含有的各種抗?fàn)I養(yǎng)因子及分解酶等進(jìn)行酶制劑的復(fù)配，研發(fā)出具有廣譜性能的復(fù)合酶制劑具有重要意義。目前研究較多的主要有纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶等提高動(dòng)物消化的酶制劑，多用于斷奶仔豬、肉雞、奶牛等動(dòng)物的生產(chǎn)。但目前酶制劑的研究方向在發(fā)生著改變，從最初的促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用及降低氮磷排放等到如今的新型酶制劑更加注重對(duì)動(dòng)物健康的影響，例如新型酶制劑的抑菌殺菌功效、調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群等作用。

本試驗(yàn)用牡丹鮮花發(fā)酵產(chǎn)生的牡丹鮮花酶過濾后得到的渣滓作為試驗(yàn)材料 （渣滓中仍有少量的牡丹鮮花酶），將此渣滓用于泌乳奶牛飼喂試驗(yàn)，以期能找到最佳的添加量，為研究新型牡丹為原料的動(dòng)物飼料添加劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)采用的牡丹鮮花酶渣滓為自制的牡丹鮮花酶過濾后的渣滓。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因素隨機(jī)試驗(yàn)，選取體重、泌乳時(shí)間、產(chǎn)奶量比較接近的40頭泌乳中后期奶牛，將其分為4組，每組10頭，預(yù)試期3 d，試驗(yàn)天數(shù)為18 d，后試期1 d（采集試驗(yàn)用樣品）?？瞻讓?duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別在基礎(chǔ)日糧中添加1%、3%、5%的牡丹鮮花酶渣滓。

1.3 試驗(yàn)日糧 基礎(chǔ)日糧設(shè)計(jì)按NRC（1998）標(biāo)準(zhǔn)?；A(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在菏澤市牡丹區(qū)華英奶牛場(chǎng)進(jìn)行，具體時(shí)間為2019年6月1日 ～2019年6月22日。按照華英奶牛場(chǎng)日常飼養(yǎng)管理進(jìn)行飼喂，3次/d喂料，保證充足的采食和飲水；每日記錄奶牛的泌乳量及健康情況，發(fā)現(xiàn)疾病及時(shí)治療，若發(fā)病情況較為嚴(yán)重，應(yīng)予及時(shí)淘汰。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平%

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 血清指標(biāo)測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后的第1天早晨開飼前，隨機(jī)采集各試驗(yàn)組3頭奶牛尾靜脈血各5 mL。將采集的血樣于陰涼處傾斜析出血清后，再用普通離心機(jī)2500 r/min離心20 min，取上清液分裝到1.5 mL離心管中密閉，在檢測(cè)前置于-20℃冰箱中冷凍保存。由菏澤醫(yī)專附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科代為檢測(cè)。檢測(cè)指標(biāo)：空腹血糖（GLU）、總蛋白（TP ）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、尿素氮（UN）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）。

1.5.2 產(chǎn)奶量和牛奶成分的測(cè)定

1.5.2.1 產(chǎn)奶量的測(cè)定 初始日均產(chǎn)奶量：記錄預(yù)試驗(yàn)3 d的產(chǎn)奶量，求出平均值作為初始產(chǎn)奶量。末日均產(chǎn)奶量：記錄試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天和之后一天的產(chǎn)奶量，求其均值作為末產(chǎn)奶量。

1.5.2.2 牛奶成分的測(cè)定 于試驗(yàn)結(jié)束后的第1天，分3次（早、中、晚）收集奶樣，將3次收集的奶樣分別用容器盛放于4℃冰箱冷藏，分取3次的奶樣按一定比例進(jìn)行混合，并及時(shí)將樣品送至菏澤市食品藥品檢驗(yàn)研究院檢測(cè)。檢測(cè)指標(biāo)包括乳蛋白率、乳脂率、乳糖率、乳體細(xì)胞數(shù)及乳尿素氮含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件中的單因素方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)方差”表示。以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 各試驗(yàn)組泌乳奶牛血清理化指標(biāo) 由表2可知，試驗(yàn)組Ⅱ的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性與對(duì)照組差異顯著 （P＜0.05）；試驗(yàn)組Ⅱ的空腹血糖（GLU）濃度較對(duì)照組和試驗(yàn)組Ⅲ顯著升高 （P＜0.05）；試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ的總膽固醇（TCHO）濃度與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；各組其他血清生化指標(biāo)與對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05）。

2.2 試驗(yàn)前后各組泌乳奶牛產(chǎn)奶量 由表3可知，添加牡丹鮮花酶渣滓的各試驗(yàn)組末產(chǎn)奶量，與空白對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表3 試驗(yàn)前后各組泌乳奶牛的產(chǎn)奶量

2.3 各試驗(yàn)組牛奶成分分析結(jié)果 由表4可知，三個(gè)試驗(yàn)組的乳體細(xì)胞數(shù)顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)組Ⅱ乳糖率較空白對(duì)照組顯著提高4.68%（P＜0.05），試驗(yàn)組Ⅱ的乳尿素氮含量較對(duì)照組顯著降低 （P＜0.05）。其他指標(biāo)各組無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表2 各試驗(yàn)組泌乳奶牛血清理化指標(biāo)

表4 各試驗(yàn)組奶牛牛奶成分

3 討論

3.1 牡丹鮮花酶渣滓對(duì)泌乳奶牛血清理化指標(biāo)的影響 血清理化指標(biāo)反映了奶牛機(jī)體的健康及營(yíng)養(yǎng)狀況，了解奶牛的血清理化指標(biāo)有助于奶牛營(yíng)養(yǎng)代謝疾病的預(yù)防。甘油三脂和總膽固醇可反映動(dòng)物體內(nèi)脂代謝情況，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶參與蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物的合成與代謝，正常情況下處于一定的范圍，隨著生命活動(dòng)的旺盛，其濃度將會(huì)升高。血液中的尿素氮是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，其受飼料中食用氮和自身內(nèi)源分泌氮的影響，尿素氮含量降低，則蛋白質(zhì)利用能力增強(qiáng)，有助于蛋白質(zhì)的沉淀。

試驗(yàn)組奶牛日糧中添加牡丹鮮花酶渣滓，奶牛血清中總膽固醇和空腹血糖濃度升高，說明牡丹鮮花酶渣滓對(duì)泌乳奶牛的脂肪和糖類代謝產(chǎn)生了有利的影響，促進(jìn)了試驗(yàn)?zāi)膛Ｖ竞推咸烟堑拇x，與乳脂率升高的結(jié)果相一致。本試驗(yàn)中三個(gè)試驗(yàn)組中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇含量均比空白對(duì)照組有所提高，也表明牡丹鮮花酶渣滓能夠加速奶牛代謝，提高奶牛的產(chǎn)奶性能。各試驗(yàn)組尿素氮含量較空白對(duì)照組有所降低，表明試驗(yàn)組泌乳奶牛機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)利用率更高。各試驗(yàn)組的血清總蛋白和白蛋白含量均處于正常范圍（奶牛血清中正常的總蛋白含量為62～82 g/L，白蛋白含量為 28～39 g/L），沒有明顯差異，這可能與奶牛自身調(diào)節(jié)功能有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加牡丹鮮花酶渣滓能夠在血清理化指標(biāo)正常范圍內(nèi)促進(jìn)泌乳奶牛的代謝活動(dòng)，不會(huì)對(duì)奶牛產(chǎn)生副作用。

3.2 牡丹鮮花酶渣滓對(duì)泌乳奶牛產(chǎn)奶量的作用效果分析 泌乳后期奶牛的產(chǎn)奶量在整個(gè)試驗(yàn)階段都呈現(xiàn)減少的趨勢(shì) （本試驗(yàn)中所選奶牛處于泌乳中后期）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加牡丹鮮花酶渣滓后對(duì)泌乳后期奶牛產(chǎn)奶量下降有一定程度的減緩作用，對(duì)各組試驗(yàn)前后產(chǎn)奶量進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組日產(chǎn)奶量下降6.78%，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組日產(chǎn)奶量分別降低4.94%、2.73%、4.81%，飼糧中添加3%牡丹鮮花酶渣滓的Ⅱ組產(chǎn)奶量下降的最少，因此飼糧中添加3%的牡丹鮮花酶渣滓效果最好?？赡苁且?yàn)樵谌占Z中添加牡丹鮮花酶渣滓增強(qiáng)了奶牛機(jī)體的自我調(diào)節(jié)功能，減少了對(duì)外界溫度升高所導(dǎo)致的不良應(yīng)激反應(yīng)，從而提高了產(chǎn)奶量。

3.3 牡丹鮮花酶渣滓對(duì)奶牛牛奶成分的影響分析 乳體細(xì)胞數(shù)量可直接反映泌乳奶牛乳房的健康狀況，一般情況下牛奶中體細(xì)胞數(shù)少于50萬，表明泌乳奶牛處于正常狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加牡丹鮮花酶渣滓的三個(gè)試驗(yàn)組的乳體細(xì)胞數(shù)明顯下降，且較空白對(duì)照組差異顯著，這說明牡丹鮮花酶渣滓能夠預(yù)防泌乳奶牛患乳房炎，從而降低牛奶中的白細(xì)胞和其他死細(xì)胞數(shù)目，因此牛奶中細(xì)胞數(shù)顯著減少，從而提高牛奶品質(zhì)。乳脂率是衡量乳品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加牡丹鮮花酶渣滓乳脂率均比空白對(duì)照組有所提高，其中添加3%時(shí)最為顯著，比空白對(duì)照組提高了23.62%。牛奶尿素氮通常用來表示奶牛對(duì)日糧中蛋白質(zhì)的利用情況，牛奶尿素氮的正常水平為8～14 mg/dL。本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組的牛奶尿素氮均在正常值內(nèi)，且各試驗(yàn)組的尿素氮含量比空白對(duì)照組更低，各試驗(yàn)組的乳蛋白及總固體物的含量有升高的趨勢(shì)，這都說明添加牡丹鮮花酶渣滓可提高日糧中的蛋白質(zhì)吸收率，其原因是牡丹鮮花酶渣滓中殘存的牡丹鮮花酶有較好的蛋白分解功能。因此，在日糧中添加牡丹鮮花酶渣滓可以提高乳脂水平，改善牛奶品質(zhì)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，泌乳奶牛飼糧中添加牡丹鮮花酶渣滓對(duì)奶牛沒有副作用，且在本試驗(yàn)條件下，添加3%對(duì)改善奶牛泌乳功能和提高牛奶品質(zhì)的效果最好。