王凱斌，賀伯偉，徐軍，王志斌

陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科，陜西 咸陽 712000

食管癌是常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率各國間差異較大，而我國是食管癌的高發(fā)地區(qū)，據(jù)流行學調(diào)查顯示，2012年我國食管癌的死亡病例高達29.7萬例，占全球死亡人數(shù)的一半，嚴重威脅我國人群的生命[1]。食管癌的臨床表現(xiàn)無明顯癥狀，通常發(fā)現(xiàn)已是中晚期，預后較差，因此，早期預測食管癌的發(fā)生，提早采取干預措施，在臨床中具有十分重要的意義[2-3]。研究顯示，干擾腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白1(tumor necrosis factor receptor-associated protein 1，TRAP1)可導致腫瘤細胞凋亡，對正常細胞無影響，對腫瘤細胞發(fā)揮重要作用[4]。TRAP1 是熱休克蛋白90家族的重要成員，具有抗氧化和抗凋亡的作用，可以避免細胞的氧化損傷以及凋亡[5]。表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)是一種強有力的有絲分裂劑，具有廣泛的生物學活性，能夠刺激多種組織細胞分裂和增生，促進腫瘤細胞浸潤和轉(zhuǎn)移，提高細胞內(nèi)代謝水平。EGF已在多種腫瘤中過度表達，但其在食管癌中的相關(guān)報道較少[6]。以上兩種指標與食管癌的發(fā)生密切相關(guān)，但其具體臨床意義還需進一步探討。本研究通過觀察TRAP1、EGF在食管癌中的表達水平及其與臨床病理的相關(guān)性，旨在為臨床治療食管癌提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013 年3 月至2017 年3 月在陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤科治療的50 例食管癌患者進行研究(觀察組)。納入標準：(1)符合早期食管癌診斷與治療進展診斷標準[7]；(2)預計生存期≥3個月；(3)認知功能無障礙。排除標準：(1)過敏體質(zhì)或?qū)χ委熕幬镞^敏者；(2)合并心、肝、腎及造血功能障礙患者；(3)不能配合本次研究樣品采集者。觀察組患者中男性31 例，女性19 例；年齡38～69 歲，平均(48.67±7.35)歲。選擇同期于我院體檢的健康人群50例作為對照組，其中男性30 例，女性20 例；年齡39～70 歲，平均(48.72±7.43)歲。兩組受檢者的性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有受檢者均知情并簽署同意書。

1.2 方法 收集食管癌患者的手術(shù)切除組織，制作石蠟切片，使用10%福爾馬林固定標本后，石蠟包埋，得到4 μm厚度的切片，并使用SP免疫組織化學法觀察染色結(jié)果，SP免疫組化通用試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。收集健康人群的正常食管黏膜組織，采用上述方法進行處理。

1.3 結(jié)果判斷標準 于高倍鏡觀察下，選擇10個視野觀察1 000個細胞[8]，首先觀察腫瘤細胞著色的深淺程度，0分為無色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕黃色；再觀察陽性細胞所占百分比，0分為＜10%，1 分為10%～30%，2 分為31%～60%，3 分為＞60%；兩項結(jié)果相加，總分＞2為陽性，反之為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料比較以率表示，采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析法，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的血清TRAP1、EGF 水平比較 觀察組患者的血清TRAP1、EGF陽性表達率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組受檢者血清TRAP1、EGF水平比較[例(%)]

2.2 觀察組TRAP1、EGF表達水平與臨床病理的關(guān)系 在食管癌組織中，TRAP1、EGF 表達水平與發(fā)病部位、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期均有密切關(guān)系(P＜0.05)，見表2。

表2 觀察組TRAP1、EGF表達水平與臨床病理的關(guān)系[例(%)]

2.3 TRAP1、EGF 表達水平與臨床病理的相關(guān)性 將發(fā)病部位、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期作為因變量，將血清TRAP1、EGF 分別作為自變量，Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清TRAP1、EGF 表達水平與腫瘤的發(fā)病部位、分化程度、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移之間均呈正相關(guān)(P＜0.01)，見表3。

表3 血清TRAP1、EGF水平與臨床病理的相關(guān)性

3 討論

食管癌是臨床常見的惡性腫瘤，發(fā)病率較高，多發(fā)生于40歲以上的男性。發(fā)病機制較為復雜，可能與多種因素有關(guān)?；颊咴缙跓o特異性癥狀，僅在吞咽食物時有不同程度的不適，且進展緩慢，中晚期癌已侵犯食管外組織，出現(xiàn)肝、腦等臟器轉(zhuǎn)移等惡病質(zhì)狀態(tài)[9-10]。近年來，食管癌早期診斷方面取得了很大進步，但患者預后仍然較差，因此，研究食管癌病情進展機制，尋找新的治療靶點是改善患者預后的關(guān)鍵[11]。近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，靶向藥物對點治療腫瘤快速發(fā)展，研究腫瘤組織中突變靶向已成為近年來治療腫瘤的熱點。

TRAP1可導致腫瘤細胞凋亡，對正常細胞無影響，在腫瘤細胞中可以發(fā)揮重要作用，因此靶向抑制TRAP1的表達有望成為治療或干預腫瘤生長的重要靶點。EGF作為一種強力的有絲分裂劑，其受體在多種腫瘤組織中被發(fā)現(xiàn)。EGF靶向藥物對EGF突變的腫瘤患者療效顯著，但其在食管癌中的相關(guān)報道較少[12-13]。兩種指標均是靶向藥物對點治療，但其與食管癌的具體意義還需進一步探討。

TRAP1 由645 個 氨基酸構(gòu)成，包 含ATP 結(jié) 合區(qū)域，能夠阻止受損蛋白解折疊，抑制活性氧族ROS 功能，維持線粒體的完整，其在腫瘤細胞中過度表達能影響患者腫瘤的進展，已被證實在多種腫瘤中表達異常[14]。有研究顯示，TRAP1 在食管癌組織中表達過量，與疾病的發(fā)生關(guān)系密切[15]。本研究結(jié)果顯示，食管癌患者TRAP1 陽性表達率明顯高于健康體檢者，TRAP1和發(fā)病部位、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期均關(guān)系密切，且其與分化程度、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移之間呈正相關(guān)。HAQUE 等[16]研究也表明，TRAP1 在食管癌的表達過量。說明，當患者發(fā)生食管癌時，血清TRAP1陽性率升高，在食管癌的發(fā)生過程中具有重要作用，可作為食管癌預后的標志物。分析是因為TRAP1 能夠抑制AMP 依賴的蛋白激酶的活化，克服代謝應(yīng)激，從而促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，激活氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，增強TRAP1 絲氨酸磷酸化，同時其水平的下調(diào)能夠增加活性氧族ROS的產(chǎn)生，導致線粒體功能性損傷，從而發(fā)揮其抗腫瘤細胞凋亡的作用，導致食管癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。

EGF是一種強烈的促細胞有絲分裂劑，其受體被發(fā)生得益于腫瘤組織的諸多報道，腫瘤細胞株受到EGF 的刺激而生長，從而分裂，促進腫瘤細胞的生長，其在腫瘤中的突變已成為近年來研究腫瘤發(fā)展的熱點。將EGF加入細胞培養(yǎng)液內(nèi)，能加速致癌作用的轉(zhuǎn)化，惡性腫瘤細胞能夠分泌EGF 的生長[17-18]。有研究顯示，EGF在食管癌中呈高表達，與食管癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[19]。本研究結(jié)果顯示，食管癌患者EGF陽性表達率明顯高于健康體檢者，EGF 和發(fā)病部位、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期均有密切關(guān)系，且其與分化程度、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移之間呈正相關(guān)。國外研究顯示，EGF在食管癌中表達過量，與疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[20]，與本次研究結(jié)果相似，說明EGF 可預測早期癌發(fā)生，并參與了腫瘤細胞向惡性轉(zhuǎn)化的過程。這可能是因為EGF 的高表達能減弱細胞間黏附能力，使癌細胞侵襲能力相對增加，促使細胞向基底膜轉(zhuǎn)移，從淋巴管進入淋巴結(jié)，進一步發(fā)生轉(zhuǎn)移，還能通過與跨膜表皮生長因子受體相結(jié)合，控制細胞的代謝與癌變。但本次研究樣本較少時間較短，且未分析治療前后各項指標的變化，為更深入探討其機制，今后仍需擴大樣本量，延長實驗時間進一步深入研究。

綜上所述，在食管癌組織中TRAP1、EGF 的高表達與臨床病理存在著密切關(guān)系，可促使疾病進展，為靶向藥物治療食管癌提供了新思路。