張紅梅，王桂英，魏永濤

(濟南市食品藥品檢驗檢測中心，濟南 250021)

注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀為阿莫西林鈉和克拉維酸鉀(5∶1)的復(fù)方制劑。阿莫西林為廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素；克拉維酸鉀僅有微弱的抗菌活性，但具有較強廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制作用，可保護阿莫西林免遭β-內(nèi)酰胺酶水解。該復(fù)方制劑拓寬了抗菌譜，增加了抗菌活性，臨床上使用廣泛。但其溶液穩(wěn)定性較差，極易變色[1-2]。雖然對于使用過程中的安全性影響尚沒有數(shù)據(jù)支持，但其活性成分含量快速下降可影響其有效性。本實驗結(jié)合臨床實際應(yīng)用情況，通過測定安全性重要指標——有關(guān)物質(zhì)的變化，來探討在有效性下降的同時，其存在的安全性風險。

1 材料和方法

1.1 儀器

1.2 試藥

阿莫西林克拉維酸系統(tǒng)適用性對照品(批號：130588-201603，來源：中國食品藥品檢定研究院)；注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀(編號1、2、3、4，規(guī)格：1.2 g；批號分別為：22190409、190302、608190101、19040942，來源：山東省4個不同廠家)；阿莫西林鈉(批號：3201904306，來源：珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司)；克拉維酸鉀(批號：3561906620，來源：珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司)；0.9%氯化鈉注射液(NS，批號：C180501041，來源：山東科倫藥業(yè)有限公司)；乙腈(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司)；其他試劑均為市售分析純。

1.3 色譜條件[3]

色譜柱：Agilent Zorbax SB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相A：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用2 mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0)，流動相B：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用2 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0)-乙腈(20∶80)；檢測波長：230 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μl；柱溫：30 ℃。

1.4 溶液的制備

系統(tǒng)適用性溶液：取阿莫西林克拉維酸系統(tǒng)適用性對照品約10 mg，加4 ml流動相A溶解。

供試品溶液：4個廠家樣品，各取2瓶。1瓶加20 ml NS溶解，1瓶加10 ml NS溶解，在0 h、0.17 h(10 min)、0.5 h、1 h、2 h、3 h時間點，分別精密量取適量，用流動相A稀釋成每1 ml中約含阿莫西林 2 mg 的溶液。精密稱取阿莫西林鈉原料藥1.0 g和克拉維酸鉀原料藥0.2 g置同一西林瓶中，一瓶加20 ml NS，另一瓶加10 ml NS，在0 h、0.17 h(10 min)、0.5 h、1 h、2 h、3 h時間點，分別精密量取適量，用流動相A稀釋成每1 ml中約含阿莫西林 2 mg 的溶液。精密稱取阿莫西林鈉原料藥1.0 g、克拉維酸鉀原料藥0.2 g，按上述操作分別單獨制備相應(yīng)供試品溶液。

對照溶液：精密量取供試品溶液2 ml，置100 ml量瓶中，用流動相A稀釋至刻度。藥典標準規(guī)定：單個雜質(zhì)不得過對照溶液兩個主峰面積和的2.5%，各雜質(zhì)的和不得過對照溶液兩個主峰面積和的7.0%。

2 結(jié)果

按“1.3”色譜條件測定的有關(guān)物質(zhì)結(jié)果見表1和表2。從結(jié)果中看出：① 單一克拉維酸鉀原料藥用NS溶解后，隨時間延長峰面積幾乎無變化，無雜質(zhì)峰產(chǎn)生。② 4個樣品及阿莫西林鈉與克拉維酸鉀混合物變化趨勢一致，隨時間延長，雜質(zhì)個數(shù)增多，單個最大雜質(zhì)含量增加，并趨于穩(wěn)定，雜質(zhì)總和含量不斷增加。③ 單一阿莫西林鈉原料藥隨時間延長，雜質(zhì)個數(shù)增多，單個最大雜質(zhì)含量增加，雜質(zhì)總和含量不斷增加，但雜質(zhì)個數(shù)明顯比樣品及其與克拉維酸鉀的混合物少。④ 第一步用10 ml NS溶解，隨時間延長，在相同時間點雜質(zhì)個數(shù)、單個最大雜質(zhì)、雜質(zhì)總和明顯比用20 ml NS溶解多。

表1 不同企業(yè)產(chǎn)品在不同時間的有關(guān)物質(zhì)結(jié)果

續(xù)表1

*: 最大雜質(zhì)分離，所以含量較2 h低

表2 不同時間克拉維酸鉀原料藥結(jié)果

通過與系統(tǒng)適用性溶液的標準圖譜疊加比較(見圖1)，幾個典型雜質(zhì)的含量如下(見表3)：① 阿莫西林鈉原料藥中最大雜質(zhì)是阿莫西林閉環(huán)二聚體，占雜質(zhì)總量的50%以上，且隨時間延長一直在增大。② 4個樣品及阿莫西林鈉與克拉維酸鉀混合物最大雜質(zhì)是阿莫西林閉環(huán)三聚體，隨時間延長增大并趨于平穩(wěn)，但阿莫西林閉環(huán)二聚體的含量隨時間延長一直在增加，兩者之和占雜質(zhì)總量的50%左右。

A: 系統(tǒng)適用性溶液的標準圖譜；B：阿莫西林鈉原料藥0 h、3 h與標準圖譜的疊加圖1 高效液相色譜圖

表3 不同企業(yè)產(chǎn)品在不同時間各雜質(zhì)的變化

續(xù)表3

3 討論

從實驗數(shù)據(jù)看出，用NS溶解后，各樣品隨著時間延長，阿莫西林二聚體及三聚體的含量增加非常明顯。高分子聚合物雜質(zhì)是引起速發(fā)型過敏反應(yīng)的主要因素[4-8]，這就增加了藥物的安全性風險；而且溶解液體積越小，溶液濃度越高，雜質(zhì)變化越明顯，提示第一步溶解時盡可能用較大體積NS。在 0 h 和0.17 h(10 min)時，單個最大雜質(zhì)(<2.5%)、雜質(zhì)總和(<7.0%)均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定[3]，但0.5 h后，各樣品的數(shù)據(jù)均超出了限度范圍，所以建議配制的第一步溶液應(yīng)在10 min內(nèi)使用，最好臨用現(xiàn)配。

經(jīng)查詢，全國范圍內(nèi)注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀共有32家生產(chǎn)企業(yè)，61個藥品批準文號，其中山東省有5家企業(yè)、8個批準文號。而國內(nèi)提供原料藥的廠家只有3家。前期我們檢測了9個廠家35批樣品，單個最大雜質(zhì)含量在0.2%～0.6%之間，各雜質(zhì)和含量在0.4%～0.9%之間?？梢姀哪壳艾F(xiàn)有的工藝水平、技術(shù)手段、嚴格的貯存條件來控制雜質(zhì)的含量降低是困難且有限的。基于現(xiàn)實情況，如能在臨床使用過程中抓住細節(jié)、規(guī)范操作，減少雜質(zhì)尤其是高分子聚合物的產(chǎn)生，則可以直接快速地提高藥品的安全性和有效性。

綜上，為保證藥品的安全有效，建議藥典標準增設(shè)聚合物項目的檢查。臨床使用時，要臨用現(xiàn)配；第一步溶解時盡可能用大體積溶劑，溶解后立即注入輸液瓶中并盡快使用，不可放置，一旦變色不可再用。