周殿儒，周 游，魏譚軍，肖 成，梁 源，王 毅?，王 張?，田 媛，胡鳳嬌

（1.達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，四川 達(dá)州 635000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137）

中藥復(fù)方制劑理氣散結(jié)顆粒由柴胡、香附、延胡索、青皮、川芎、當(dāng)歸和白芍組成，具有理氣調(diào)血、散結(jié)止痛的功效，主治肝氣郁結(jié)、氣滯血瘀、乳癖結(jié)塊、乳腺增生、乳癰初起、乳房脹痛。肝五行屬木，主疏泄、藏血，體陰而用陽使其能正常發(fā)揮其疏泄功能，使肝臟柔和而不上亢。乳房為肝經(jīng)循行之所、沖任之脈相連之處、若肝氣郁結(jié)、氣血運(yùn)行不暢，不通則痛乳房就會產(chǎn)生脹痛?？梢姼闻K功能正常是維持乳房生理功能正常的基本條件，肝郁氣滯血瘀是乳腺疾病病機(jī)之本［1］。

理氣散結(jié)顆粒是20 余年的臨床使用證實(shí)理氣散結(jié)丸改劑型所得。通過臨床驗(yàn)證理氣散結(jié)丸療效顯著、安全性好。但由于先前制劑的制劑技術(shù)水平、制劑輔料有限，導(dǎo)致該制劑存在著服用量大（規(guī)格100 丸，9 g/盒，2～3 丸/次，3 次/d，54～81 g/d）、口感差、攜帶不便、起效緩慢等缺點(diǎn)，限制了該藥的推廣。因此，在保持理氣散結(jié)丸物質(zhì)基礎(chǔ)不變的情況下，根據(jù)方中藥材的有效成分及理化性質(zhì)，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和設(shè)備，將理氣散結(jié)丸改進(jìn)，制成生物利用度高、服用量小、順應(yīng)性好、攜帶方便的顆粒劑。前期魏譚軍等［2］已通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)選其提取工藝，王育［3］、李霞等［4］使用HPLC 測定了理氣散結(jié)顆粒中9 種主要成分。本研究利用腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀、棉球致小鼠肉芽組織增生、熱板致小鼠足部疼痛、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)4 個(gè)模型實(shí)驗(yàn)，探討理氣散結(jié)顆粒對氣滯血瘀、乳房脹痛等癥狀的治療作用。

1 材料

1.1 試劑與藥物 腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型 理氣散結(jié)顆粒（達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，批號151125）；理氣散結(jié)丸（達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，批號160812）；復(fù)方丹參片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，批號A6A036）；醋酸地塞米松片［遂成藥業(yè)股份有限公司（原天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司），批號 160117］；布洛芬片（吉林萬通藥業(yè)集團(tuán)鄭州萬通復(fù)升藥業(yè)股份有限公司，批號160218）；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號160218）；小金丸（九寨溝天然藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號160114）；氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號B16040811）；鹽酸腎上腺素注射液［遠(yuǎn)大醫(yī)藥（中國）有限公司生產(chǎn)，批號 160502］；慶大霉素（宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號5140726E）；冰醋酸（重慶茂業(yè)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號2011082）水合氯醛（成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)，批號20100614）。

1.2 儀器 電子天平（賽多利斯儀器有限公司）；SA-5600型全自動(dòng)血液流變測試儀（賽科西德）；電子稱（上海有聲衡器有限公司）；12×100 肝素管（江蘇宇力醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)）；恒溫干燥箱；眼科剪；眼科直鑷；脫脂棉花（均由一人制作棉球，每次稱量20 mg，加慶大霉素浸泡，60 ℃烘箱烤干）；RB-200 型智能熱板儀（成都泰盟軟件有限公司生產(chǎn)）；水盆；秒表。

1.3 動(dòng)物 SPF 級SD 雌性大鼠80 只，體質(zhì)量（200±20）g，四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號51203500000823，購自成都達(dá)碩驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號 SCXK（川）2015-030。KM 種小鼠，SPF 級，全 雌，230 只，體質(zhì)量（20±2）g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號SCXK（川）2015-030，四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號51203500000722、51203500000721。

2 方法

2.1 腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型 大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性藥組（復(fù)方丹參片組0.45 g/kg、小金丸組 0.20 g/kg）、理氣散 結(jié)丸組（1.957 0 g 生藥/kg）、理氣散結(jié)顆粒低、中、高劑量組［0.978 5、1.957 0、3.914 0 g 生藥/kg）。大鼠灌胃給藥，1 次/d，連續(xù)7 d，空白組和模型組灌胃生理鹽水。給藥體積為20 mL/kg。末次給藥后1 h 進(jìn)行第1 次射鹽酸腎上腺素溶液皮下注射［5］。2 h 后，將空白對照組動(dòng)物置于常溫水（20 ℃），其余7 個(gè)組別大鼠置于冰水（0 ℃）中浸泡5 min［6］。在第1 次皮下注射后4 h，進(jìn)行，第2 次皮下注射（方法同第1 次皮下注射），后禁食不禁水，18 h 左右。次晨，動(dòng)物腹主動(dòng)脈采血5 mL，全血抗凝。應(yīng)用全自動(dòng)血液黏度儀測定相關(guān)指標(biāo)，所有采血及測試操作均在4 h 內(nèi)完成［7-8］。

2.2 棉球致小鼠肉芽組織增生模型 小鼠分組同“2.1”項(xiàng)下分組。從小鼠劍突處將棉球植入小鼠左側(cè)腹股溝皮下。第2 天開始灌胃給藥，給藥體積為20 mL/kg，給藥1 次/d，連續(xù)7 d。結(jié)束后麻醉脫頸椎處死。取出棉球肉芽組織，剔除周圍脂肪組織。于60 ℃烘箱內(nèi)干燥4 h 后稱定質(zhì)量，計(jì)算每只動(dòng)物的肉芽腫質(zhì)量=棉球肉芽組織質(zhì)量-20 mg［9-11］。

2.3 熱板致小鼠足部疼痛模型 小鼠分組同“2.1”項(xiàng)下分組。篩選痛閾值在5～30 s 的小鼠，待所有動(dòng)物測試完1 h 后，再測試1 次痛閾值。2 次值取平均值后為動(dòng)物給藥前的痛閾值。痛閾值測定完畢后小鼠灌胃給藥，給藥1 次/d，連續(xù)7 d。分別在末次給藥第15、30、45、60、90、120 分鐘時(shí)，取小鼠放入恒溫的熱板儀中。測定自放入至出現(xiàn)舔后足的潛伏時(shí)間作為該鼠的痛閾值，痛閾值超過60 s 以60 s 計(jì)。計(jì)算每只小鼠在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)的痛閾提高百分率［12-14］。痛閾提高百分率=［（給藥后某個(gè)時(shí)間點(diǎn)的痛閾值-給藥前痛閾值）/給藥前痛閾值］×100%。

2.4 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)模型 小鼠分組同“2.1”項(xiàng)下分組。小鼠灌胃給藥，給藥1 次/d，連續(xù)7 d。動(dòng)物末次給藥后30 min，各鼠分別按10 mL/kg 的體積給予標(biāo)準(zhǔn)注射0.6%醋酸；然后觀察首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間（扭體潛伏期，15 min 內(nèi)未出現(xiàn)扭體反應(yīng)者，其潛伏期計(jì)為900 s）和15 min 內(nèi)出現(xiàn)的扭體反應(yīng)次數(shù)（15 min 內(nèi)未出現(xiàn)扭體反應(yīng)者，其扭體反應(yīng)次數(shù)計(jì)為0 次），統(tǒng)計(jì)15 min 內(nèi)各組出現(xiàn)扭體反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)，并計(jì)算藥物對扭體反應(yīng)的抑制率［12-14］。抑制率=［（空白組扭體反應(yīng)均數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)均數(shù)）/空白組扭體反應(yīng)均數(shù)］×100%

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以（）表示，采用方差分析；等級資料非參數(shù)檢驗(yàn)。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型 與模型組比較，理氣散結(jié)顆粒低劑量組大鼠的全血黏度、全血相對指數(shù)（高切、低切）、全血還原黏度（低切、高切）、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和卡松黏度均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），而血漿黏度明顯升高（P＜0.01），紅細(xì)胞壓積和血沉指標(biāo)的變化不明顯（P＞0.05）；理氣散結(jié)顆粒中劑量組大鼠的全血相對指數(shù)（高切）、全血還原黏度（高切）、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和卡松黏度均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），而其它指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。理氣散結(jié)顆粒高劑量組大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1～2。

表1 理氣散結(jié)顆粒對腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型的影響（）

表1 理氣散結(jié)顆粒對腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型的影響（）

注：與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與理氣散結(jié)丸組比較，＾P＜0.05，＾＾P＜0.01。

表2 理氣散結(jié)顆粒對腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型的影響（）

表2 理氣散結(jié)顆粒對腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型的影響（）

注：與模型對照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與理氣散結(jié)丸組比較，＾P＜0.05，＾＾P＜0.01。

3.2 棉球致小鼠肉芽組織增生模型 與模型組比較，理氣散結(jié)顆粒低、中劑量組肉芽腫質(zhì)量均明顯減輕（P＜0.05）。見表3。

3.3 熱板致小鼠足部疼痛模型 與給藥前痛閾值比較，中劑量組小鼠的痛閾值在第15 分鐘時(shí)降低（P＜0.05）。與模型組比較，中劑量組小鼠的痛閾值在第90、120 分鐘時(shí)升高（P＜0.05）；高劑量組小鼠的痛閾值在第45、90 分鐘時(shí)均升高（P＜0.05）。見表4。

3.4 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)模型 與模型組比較，理氣散結(jié)顆粒 低、中、高劑量 組小鼠 的扭體 次數(shù)減 少（P＜0.01）；中劑量組和高劑量組小鼠的扭體潛伏期明顯延長（P＜0.05，P＜0.01）。見表5。

表3 理氣散結(jié)顆粒對棉球致小鼠肉芽組織增生模型的影響（，n＝10）

表3 理氣散結(jié)顆粒對棉球致小鼠肉芽組織增生模型的影響（，n＝10）

注：與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

表4 理氣散結(jié)顆粒對熱板致小鼠足部疼痛模型的影響（，n＝10）

表4 理氣散結(jié)顆粒對熱板致小鼠足部疼痛模型的影響（，n＝10）

注：與給藥前痛閾值比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，?P ＜0.05，??P＜0.01；與理氣散結(jié)丸組比較，＾P＜0.05。

4 討論

中醫(yī)中有“女子以肝為先天”《臨證指南醫(yī)案·卷九》之說。肝之經(jīng)脈循股陰，入毛中，過陰器，抵小腹，上貫膈，布胸脅，繞乳頭而行，與沖、任兩脈相通，沖脈有血海之稱，任脈為陰脈之海，與胞宮互相聯(lián)系，故對女子行經(jīng)、胎產(chǎn)及乳汁排泄起至關(guān)重要的作用［15］。肝氣郁結(jié)疏泄失司、氣機(jī)不暢，依據(jù)氣血津精液之間的相互關(guān)系“氣為血之帥，血為氣之母”，故氣滯可導(dǎo)致血瘀，而血瘀也可引起氣滯，造成氣滯血瘀且氣滯于乳絡(luò)，不通則痛，引起乳房脹痛、乳癖結(jié)塊等諸多癥狀。通過對前人認(rèn)識的總結(jié)和長期的臨床觀察，得出乳腺增生病既存在肝郁血虛，又存在氣滯血瘀的病機(jī)特點(diǎn)，病位之本在肝，標(biāo)在乳房。而傳統(tǒng)的治法欠于全面，多重在消除腫痛、結(jié)塊等局部病灶，忽視了臟腑氣機(jī)的總體功能。因而根據(jù)仲景遵從“但見一證便是，不必悉具”的原則，提出了養(yǎng)肝調(diào)肝之治療大法，以理氣散結(jié)丸對肝氣郁結(jié)、氣滯血瘀、乳腺增生等癥進(jìn)行治療。中醫(yī)理論認(rèn)為寒為陰邪，主收引，性凝滯，寒邪作用于血脈，血脈收引攣縮，血行緩慢而化生瘀血；另一方面，肝主疏泄和藏血，依據(jù)七情理論中提到“肝在志為怒，過怒傷肝”，使血行受到影響，是導(dǎo)致血瘀證的主要原因之一。依據(jù)上述論述，課題組以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理生理學(xué)基礎(chǔ)從“寒凝”“氣滯”方面入手建立動(dòng)物模型，大鼠皮下注射大劑量腎上腺素注射液模擬“暴怒”時(shí)機(jī)體分泌大量腎腺素的特點(diǎn)，以冰水浸泡及持續(xù)低溫冷冰模擬“寒邪”侵襲，二者綜合作用模擬“寒凝氣滯血瘀證”模型［16］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究血瘀證可具體表現(xiàn)為“濃、黏、凝、聚”等血液流變學(xué)異常，這會導(dǎo)致血管壁增厚、血液變得黏稠、管腔狹窄，由于這些因素在局部血管中形成了血栓，阻斷了血液正常的流通［17］。在腎上腺素聯(lián)合冰水致大鼠寒凝氣滯血瘀模型實(shí)驗(yàn)中，理氣散結(jié)顆粒低劑量能降低模型大鼠的全血黏度、血液濃度、紅細(xì)胞聚集性，并增加紅細(xì)胞的變形能力，有利于改善血液流變學(xué)異常，其作用優(yōu)于理氣散結(jié)丸。理氣散結(jié)顆粒對炎癥后期肉芽增生病理變化具有抑制作用，作用強(qiáng)度與理氣散結(jié)丸相當(dāng)，量效關(guān)系由強(qiáng)至弱依次為低劑量、中劑量、高劑量。其鎮(zhèn)痛作用均以中、高劑量的作用最明顯，低劑量次之。

表5 理氣散結(jié)顆粒對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)模型的影響（，n＝10）

表5 理氣散結(jié)顆粒對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)模型的影響（，n＝10）

注：與模型對照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與理氣散結(jié)丸組比較，＾P＜0.05，＾＾P＜0.01。

理氣散結(jié)顆粒柴胡疏肝解郁為君、香附理氣疏肝、以順肝性，青皮增強(qiáng)疏肝破氣之。柴胡、香附等疏肝解郁藥物可促進(jìn)雌激素在肝臟的代謝，減輕雌激素對乳房的不良刺激［18］。芍藥斂養(yǎng)肝血、緩急止痛。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，芍藥苷有一定的保肝作用［19］。川芎辛散善行，有血中氣藥之稱，氣入血分，使血脈通暢，瘀滯消散，活血兼行氣，有良好的活血祛瘀之功，活血化瘀藥物可改善機(jī)體血液循環(huán)，降低血液黏稠度，抑制膠原纖維合成，從而促使增生腫塊消失［20］。當(dāng)歸長于補(bǔ)血，有補(bǔ)血之圣藥之稱，助芍藥補(bǔ)養(yǎng)肝血，避免川芎行散力過強(qiáng)，耗血?jiǎng)友幑惨责B(yǎng)肝血、柔肝體、調(diào)肝而恢復(fù)肝正常的順達(dá)之性。李偉霞等［21］通過實(shí)驗(yàn)亦證明當(dāng)歸、川芎配伍后對血瘀大鼠的血液流變學(xué)和凝血功能指標(biāo)的改善作用優(yōu)于單味藥。延胡索具活血化瘀、行氣止痛功效，既能行氣解郁之力，又助活血止痛之功［22］。蜂房以增止痛之功，佐以山慈菇消癰散結(jié)；甘草為使，緩急止痛，調(diào)和諸藥。

總之，理氣散結(jié)顆粒能改善血液流變學(xué)異常，抑制炎癥后期肉芽增生，以低劑量效果為佳。其在鎮(zhèn)痛作用方面亦有明顯的作用，高劑量效果較好。