何繼東
本文采用乙腈一次性提取,復(fù)合固相萃取凈化,氣相色譜(ECD)檢測(cè),建立了一種分析茶葉中滴滴涕各異構(gòu)體殘留量的前處理方法。實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)該前處理方法提取的樣品,平均回收率在88.2%~102.2%之間,精密度RSD在1.1%~10.5%之間,檢出限在0.0006~0.005mg/kg之間。該前處理方法具有試劑使用量少、凈化效果好、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢出限低、重復(fù)性和回收率好等優(yōu)點(diǎn)。
茶葉是我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,更是大眾喜愛(ài)的傳統(tǒng)飲品,作為茶葉的國(guó)際貿(mào)易大國(guó),潛在的農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)已直接影響到我國(guó)茶葉出口,也對(duì)人類(lèi)健康造成一定的影響。茶葉中含有色素、揮發(fā)性有機(jī)酸、茶多酚、茶堿等物質(zhì),樣品成分復(fù)雜,干擾物較多,其前處理的凈化效果直接影響到農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,建立一種更便捷、準(zhǔn)確的前處理方法十分重要。本實(shí)驗(yàn)使用復(fù)合固相萃凈化前處理,氣相色譜檢測(cè)滴滴涕各異構(gòu)體的殘留量,取得了較好的檢測(cè)效果。
一、實(shí)驗(yàn)部分
1、儀器與設(shè)備
Agilent6890N氣相色譜儀(美國(guó)Agilent公司),配備ECD檢測(cè)器;色譜柱:HP-5MS UI(30m×0.25mm×0.25um毛細(xì)柱);電子天平(感量0.01g);高速組織搗碎機(jī);均質(zhì)儀(PRO 250);高速離心機(jī);氮吹儀;固相萃取架。
2、試劑與材料
丙酮、正己烷、乙腈和甲苯均為色譜純,無(wú)水硫酸鈉為分析純650℃灼燒4小時(shí),儲(chǔ)存在干燥器內(nèi)。洗脫溶劑為乙腈+甲苯(3:1)、丙酮+正己烷(1:9)。石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱(CNWBOND GCB/NH2500mg/500mg/6mL),弗羅里硅土柱(Cleanert Florisil 1000 mg/6 mL)。滴滴涕農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品濃度為100ug/mL,均購(gòu)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境科研監(jiān)測(cè)所,分別為: p,p′-滴滴伊(p,p′-DDE)、o,p′-滴滴涕(o,p′-DDT)、p,p′-滴滴滴(p,p′-DDD)、p,p′-滴滴涕(p,p′-DDT)。
3、樣品前處理
(1)樣品的提取。準(zhǔn)確稱(chēng)取2g樣品(精確至0.01g)于50mL離心管中加乙腈10mL提取,15000r/min均質(zhì)2min,8000r/min離心5min,取5mL上清液備用。
(2)樣品的凈化。
①將石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱放入固相萃取架,加入高約1cm的無(wú)水硫酸鈉,用4 mL乙腈+甲苯(3:1)活化,加入離心后的5ml樣品上清液過(guò)石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱,并用20mL玻璃離心管收集,用10mL乙腈+甲苯((3:1)洗脫,收集所有洗脫液。用80℃水浴通入氮?dú)鉂饪s近干,加3mL正己烷溶解殘?jiān)鼈溆谩?/p>
②弗羅里硅土柱放入固相萃取架,用5mL丙酮+正己烷(1:9),再用5mL正己烷活化平衡。活化液到達(dá)填充物表面時(shí)倒入“1.4.2.1”溶解液,用15mL玻璃離心管收集,用5ml正己烷+丙酮(9:1)淋洗溶解殘?jiān)牟Aщx心管,淋洗液倒入凈化柱洗脫,然后再重復(fù)一次,收集全部洗脫液用40℃水浴通入氮?dú)鉂饪s近干。用正己烷定容至1.0ml,混勻裝瓶上機(jī)檢測(cè)。
4、色譜條件
色譜柱:HP-5MS UI(30m×0.25mm×0.25um毛細(xì)柱);載氣:高純氮?dú)猓?9.999%);載氣流量:1.2mL/min;隔墊吹掃3.0mL/min;尾吹58.8mL/min ;檢測(cè)器:ECD,檢測(cè)器溫度320℃;進(jìn)樣口溫度270℃;進(jìn)樣方式:分流自動(dòng)進(jìn)樣,分流比10:1;控制模式:恒定流量;升溫程序:90℃保持1.0min、以15/min升到200℃保持7.0min、以8℃/min升到230℃保持11min、以30℃/min升到310℃保持3.0min;進(jìn)樣量1.0uL,峰面積外標(biāo)法定量。
二、結(jié)果與討論
1、凈化方法的選擇
茶葉中的色素、揮發(fā)性有機(jī)酸、茶多酚、茶堿等物質(zhì)會(huì)對(duì)氣相色譜檢測(cè)造成嚴(yán)重干擾,甚至影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,而常用的硫酸磺化法凈化,需多次凈化,且液液分配操作復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)采用乙腈作提取溶液,用GCB/NH2石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱加弗羅里硅土柱復(fù)合凈化,用于去除樣品基質(zhì)中的類(lèi)甾體、色素、各種有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和脂肪酸,能夠達(dá)到良好的凈化效果(圖1復(fù)合固相萃取法凈化的茶葉基質(zhì)圖譜)。但是石墨化炭黑有較強(qiáng)的吸附作用,故在實(shí)驗(yàn)中為了獲得較好的凈化效果和較高的回收率,對(duì)洗脫劑進(jìn)行比較后,選擇用乙腈+甲苯(3:1)作為石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱的洗脫劑,正己烷+丙酮(9:1)作為弗羅里硅土柱的洗脫劑。
2、色譜分離情況
按照上述色譜條件測(cè)試,基質(zhì)空白雜質(zhì)峰少對(duì)目標(biāo)峰無(wú)干擾,4種滴滴涕異構(gòu)體可得到良好的分離效果(見(jiàn)圖2? 4種滴滴涕異構(gòu)體添加樣品色譜圖)。
3、線性范圍及相關(guān)系數(shù)
線性范圍為:0.025mg/L~0.5mg/L,各濃度分別為:0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L 、0.25mg/L、0.5mg/L,按上述色譜條件進(jìn)樣分析,通過(guò)計(jì)算得到相關(guān)系數(shù)、線性方程、檢出限,見(jiàn)表1。
4、方法的回收率與精密度
準(zhǔn)確稱(chēng)取2組,每組3個(gè)不含農(nóng)藥殘留的茶葉樣品,每個(gè)樣品2.00g。兩組樣品添加值分別為0.05 mg/kg、0.1 mg/kg,使用上述“1.3樣品前處理”方法進(jìn)行樣品提取后分析,兩組添加樣品回收率和精密度見(jiàn)表2,兩組添加樣品平均回收率在88.2%~102.2%之間,精密度RSD在1.1%~10.5%之間,檢測(cè)中未出現(xiàn)色譜峰干擾情況,回收率高,重復(fù)性良好。
三、結(jié)論
本文采用乙腈一次性提取,復(fù)合固相萃取凈化前處理,氣相色譜(ECD)檢測(cè)茶葉中滴滴涕的殘留。該前處理方法具有試劑使用量少、凈化效果好、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢出限低、重復(fù)性和回收率好等優(yōu)點(diǎn),能夠滿足茶葉中滴滴涕各異構(gòu)體殘留量的檢測(cè)需求。
(作者單位:236000 安徽省阜陽(yáng)市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)中心)