于 淼，李 潞，趙紅麗，高 璐

根據(jù)《中國心血管病報告2016》指出，目前心血管病死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡原因的首位，隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，心血管病危險因素流行趨勢明顯，導(dǎo)致心血管病發(fā)病人數(shù)持續(xù)增加，心血管病及疾病負(fù)擔(dān)日漸加重，已成為重大的公共衛(wèi)生問題，其防治工作刻不容緩。目前我國現(xiàn)患心血管病人為2.9億人，其中冠心病(coronary heart disease，CHD)高達(dá)1 100萬人，急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)作為冠心病較為嚴(yán)重的類型，更是嚴(yán)重威脅著人類的健康。冠心病是一種多種內(nèi)在遺傳因子和外在環(huán)境相互作用導(dǎo)致的疾病[1-2]，其中血脂異常是冠心病的主要危險因素。由于載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)的基因多態(tài)性與血脂之間、血脂異常與冠心病發(fā)病之間的密切聯(lián)系，故ApoE的基因多態(tài)性與冠心病之間的內(nèi)在聯(lián)系成為人們關(guān)注的焦點[3-4]。目前ApoE的基因多態(tài)性研究多集中在對血脂水平、降脂療效、藥物副作用等方面，對冠心病的嚴(yán)重類型ACS研究較少。本研究旨在探討ACS病人ApoE的基因多態(tài)性及其與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究選取2017年9月—2018年9月就診于沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院急診或門診并且收住院的ACS病人，且這些病人均急診或擇期行冠狀動脈造影術(shù)，冠狀動脈造影結(jié)果顯示至少1支心外膜冠狀動脈或其主要分支狹窄超過50%，并根據(jù)病變嚴(yán)重程度行單純冠狀動脈造影術(shù)、冠狀動脈內(nèi)球囊擴(kuò)張術(shù)及(或)支架植入術(shù)、冠狀動脈搭橋術(shù)。共收集ACS病人210例作為ACS組，其中男120例，女90例；年齡(59.6±13.2)歲。同時收集體檢中心的健康體檢人群110名作為對照組，此人群無明顯胸悶胸痛、心電圖無明顯ST-T改變等冠心病的臨床表現(xiàn)，其中男60名，女50名；年齡(57.6±10.2)歲。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 所有研究對象均排除家族性高膽固醇血癥、甲狀腺功能異常、肝腎功能異常、感染性疾病、惡性腫瘤以及免疫系統(tǒng)疾病。研究個體之間無血緣關(guān)系。

1.3 儀器和試劑 ApoE基因型檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)購自武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司；血液基因組DNA提取盒購自天根生化科技(北京)有限公司；生化血檢測試劑盒購自沈陽市威澤醫(yī)療用品經(jīng)銷部；全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)為上海宏石醫(yī)療科技有限公司，型號規(guī)格：SLAN-96P。ApoE基因型檢測及血液基因組DNA提取由沈陽市心血管疾病實驗室完成，病人其他生化血檢測由沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗科完成。

1.4 方法

1.4.1 ApoE基因多態(tài)性檢測方法 采用PCR-熒光探針法，通過試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本準(zhǔn)備區(qū)及核酸擴(kuò)增區(qū)，利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道信號強(qiáng)度進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出，完成ACS組及對照組ApoE基因型檢測。

1.4.2 臨床資料采集及血生化指標(biāo)檢測 病人入院后立即進(jìn)行病史采集，包括一般情況、現(xiàn)病史、既往史、家族史、吸煙史、飲酒史及體格檢查[包括體質(zhì)指數(shù)(BMI)]，空腹8 h后于次日抽取靜脈血，檢測肝腎功能、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.4.3 Syntax評分 所有病人均于冠狀脈造影后進(jìn)行Syntax評分，根據(jù)11項冠狀動脈造影病變解剖特點定量評價病變復(fù)雜程度的危險評分方法，用于評價病人冠狀動脈病變程度。Syntax評分中冠狀動脈造影因素包括冠狀動脈分布類型、狹窄部位、是否完全閉塞、三分叉病變、雙分支病變、主動脈相關(guān)開口病變、嚴(yán)重扭曲、病變長度>20 mm、嚴(yán)重鈣化、血栓、彌漫病變/小血管病變。Syntax評分的計算：冠狀動脈直徑≥1.5 mm、冠狀動脈狹窄≥50%的冠心病病人通過計算機(jī)軟件程序計算Syntax評分。

2 結(jié) 果

2.1 ACS組與對照組ApoE基因型及等位基因頻率分布 本研究檢測到5種ApoE基因型，分別是E3/3、E3/2、E4/3、E4/4及E4/2，未發(fā)現(xiàn)E2/2。ACS病人與對照組人群，ApoE基因中等位基因E3頻率均最高。本研究入選的210例ACS病人及對照組110名健康體檢者的基因型分布見表1。在等位基因分布方面，ACS組E4等位基因頻率高于對照組(17.6%與12.3%，P<0.05)，ACS組E2、E3等位基因頻率低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；在ApoE基因型分布方面：由于E4/4、E4/2人數(shù)較少，未進(jìn)行統(tǒng)計分析，ACS組E3/3頻率低于對照組(57.6%與64.5%，P<0.05)。其他基因型比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 ACS組與對照組ApoE基因型及等位基因分布情況

與對照組比較，①P<0.05。

2.2 ACS組不同ApoE異構(gòu)體病人Syntax評分比較 ACS組根據(jù)不同ApoE異構(gòu)體進(jìn)行分組，3組病人冠狀動脈Syntax評分所占比例見圖1。縱坐標(biāo)指各組Syntax評分所占比例，ApoE4冠狀動脈Syntax>32分的比例明顯高于ApoE2、ApoE3(32%與12%、14%，P<0.05)，ApoE4冠狀動脈Syntax<22分的比例明顯低于ApoE2、ApoE3(23%與48%、39%，P<0.05)，其他各組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。

與ApoE4組比較，＊P<0.05。

3 討 論

ApoE基因位于19號染色體長臂，屬于常染色體顯性遺傳基因，具有顯著遺傳多態(tài)性[5]，含有3種等位基因(E2、E3、E4)，產(chǎn)生6種基因型：3種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)和3種雜合子(E2/3、E2/4、E3/4)，編碼3種異構(gòu)體ApoE2(E2/2和E2/3)、ApoE3(E3/3)、ApoE4(E3/4和E4/4)。大量研究證實，ApoE基因可作為一種遺傳因子參與動脈硬化的發(fā)生與發(fā)展[6]，并且指出E4等位基因為動脈硬化發(fā)展的獨立危險因素，而E2等位基因為動脈硬化發(fā)揮保護(hù)作用。在ApoE基因多態(tài)性與心肌梗死相關(guān)性的研究中，不同試驗得出的結(jié)果不盡相同。一些報道提示E4是急性心肌梗死發(fā)病的危險因素[7]，但也有研究指出，ApoE基因多態(tài)性與急性心肌梗死的發(fā)病風(fēng)險有很小的相關(guān)性。ApoE基因多態(tài)性與冠狀動脈血管狹窄程度相關(guān)性報道較少，且結(jié)果不盡相同[8]。有研究結(jié)果顯示，冠心病病人E4等位基因攜帶者其冠狀動脈病變明顯加重，但也有研究持相反觀點，提出ApoE基因多態(tài)性與冠心病冠狀動脈血管嚴(yán)重程度無關(guān)，與冠狀動脈受累數(shù)目亦無關(guān)。故目前隨著ApoE基因多態(tài)性研究的深入，其與冠心病、高血壓、心肌梗死、心力衰竭等的關(guān)系研究層出不窮，但因心血管疾病發(fā)病機(jī)制的多元性及復(fù)雜性[9]，故研究得出的結(jié)論不盡相同。本研究入選ACS病人為研究對象，進(jìn)一步與對照組比較ApoE的基因多態(tài)性分布情況及與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系，研究結(jié)

果顯示，ACS組與對照組ApoE基因中等位基因E3頻率最高，這與以往的研究結(jié)果吻合，ACS組E4等位基因頻率高于對照組(17.6%與12.3%)，ACS組基因型E3/3頻率低于對照組(57.6%與64.5%)。ACS組根據(jù)不同ApoE異構(gòu)體進(jìn)行分組，ApoE4冠狀動脈Syntax評分>32分的比例明顯高于ApoE2、ApoE3(32%與12%、14%，P<0.05)，ApoE4冠狀動脈Syntax評分<22分的比例明顯低于ApoE2、ApoE3(23%與48%、39%，P<0.05)，其他各組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，可見含有ApoE4異構(gòu)體的ACS病人冠狀動脈病變嚴(yán)重者所占比例較大，3種異構(gòu)體中，ApoE2病人冠狀動脈病變相對較輕。 基因多態(tài)性與臨床疾病相關(guān)性是精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的一部分。精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)是在大數(shù)據(jù)分析時代背景下，進(jìn)一步升華個體化醫(yī)學(xué)的精準(zhǔn)性。ApoE的基因多態(tài)性相關(guān)研究依托于沈陽市心血管重點實驗室，本實驗室已陸續(xù)開展了不同人群的ApoE的基因多態(tài)性的研究及與藥物療效及副作用關(guān)系等的研究，其他基因型研究亦在進(jìn)行，旨在通過精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)不斷聯(lián)系起來，進(jìn)一步指導(dǎo)復(fù)雜疾病細(xì)致分組診療、藥物療效及副作用個體差異等工作。

本試驗入選病例較少，相關(guān)病例還在持續(xù)收集中，明確的結(jié)論還需大樣本研究進(jìn)一步證實。