李平衛(wèi)，趙紅英，龐艷華，張 彤，汪五清

沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis，CT）是一類能通過細(xì)胞濾器，不能合成高能化合物，必須由宿主細(xì)胞提供ATP的革蘭陰性微生物，已成為全球范圍內(nèi)性傳播疾病常見的病原體之一[1]。其中血清型D-K主要引起泌尿生殖道的慢性感染[2]，如引起男性前列腺炎、附睪炎、尿道炎，女性陰道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、異位妊娠等[3]。有文獻(xiàn)報(bào)道，CT感染能促進(jìn)人免疫缺陷病毒（HIV）和人乳頭瘤病毒（HPV）的傳播，從而增加艾滋病[4]和子宮頸癌[5]的患病率。因此，本研究對(duì)入組的1 237例泌尿生殖道感染患者的宮頸分泌物進(jìn)行CT的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）定性檢測(cè)和陰道分泌物中真菌、滴蟲、白細(xì)胞（WBC)計(jì)數(shù)、過氧化氫（H2O2）、唾液酸苷酶（SNa）、白細(xì)胞酯酶（LE）的檢測(cè)，進(jìn)一步探討生殖道CT感染與陰道分泌物檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性，結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料 收集2016年1月—2017年12月就診于閔行區(qū)中心醫(yī)院性病及婦科門診就診的泌尿生殖道感染女性患者，入組者采用PCR熒光探針法檢測(cè)CT，排除淋球菌感染者，入組1 237例患者，年齡18～61歲，平均年齡（36.8±3.5）歲，均有非婚性行為，或性伴感染史，2周內(nèi)未使用任何藥物治療。

1.1.2 儀器與試劑 CT核酸檢測(cè)試劑盒（上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司），細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（北京中生金域診斷技術(shù)股份有限公司），熒光PCR 檢測(cè)系統(tǒng)（ABI 7500）。

1.1.3 標(biāo)本采集 受檢者取樣前24 h內(nèi)禁止陰道灌洗、性交及盆浴，常規(guī)消毒后暴露宮頸口，無菌生理鹽水洗掉宮頸外分泌物，將無菌棉拭子插入宮頸口內(nèi)1～2 cm，旋轉(zhuǎn)1周，停留15 s后取出，置于無菌樣本管留做CT檢測(cè)備用。再取陰道后穹窿處分泌物2份立即送檢。1份行常規(guī)檢查（NS涂片法）；1份行細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 CT核酸檢測(cè) 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）熒光探針法進(jìn)行定性檢測(cè)，操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 陰道分泌物檢測(cè) ①采用0.9%NaCl顯微濕片法的高倍鏡下選擇20個(gè)視野進(jìn)行觀察，若有滴蟲，則判定為滴蟲陽性；高倍鏡下找到假菌絲（或革蘭陽性孢子)或出芽細(xì)胞呈分枝狀或鏈狀連接，判定為真菌陽性。②細(xì)菌性陰道炎（bacterial vaginosis，BV）聯(lián)合檢測(cè)按說明書進(jìn)行操作。BV三聯(lián)檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：唾液酸苷酶（SNa）單一陽性或SNa陽性同時(shí)白細(xì)胞酯酶（LE）陽性或SNa陽性同時(shí)H2O2濃度異?；?3項(xiàng)全部陽性，如有臨床癥狀經(jīng)綜合鑒定可確診為BV。分別以低倍鏡和高倍鏡進(jìn)行WBC鏡檢，結(jié)果分為-、+、++、+++、++++等級(jí)；LE能使無色的5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸中的乙酸基解離，游離的5-溴-4-氯-3-吲哚變藍(lán)，藍(lán)色的深淺與LE濃度成正比，根據(jù)標(biāo)本檢測(cè)顯色程度，對(duì)照試劑盒色卡，分為 -、±、+、++、+++等級(jí)；H2O2在辣根過氧化物酶催化下使無色的四甲基聯(lián)苯胺脫氫變藍(lán)色，藍(lán)色的深淺與H2O2濃度成正比；SNa能使無色的5-溴-4-氯-3-吲哚-唾液酸中的唾液酸基解離，游離的5-溴-4-氯-3-吲哚變藍(lán)，藍(lán)色的深淺與SNa濃度成正比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CT、真菌、滴蟲檢測(cè)

泌尿生殖道感染者1 237例，CT陽性率為11.40%（141/1 237）；真菌陽性率為 5.98%（74/1 237）；滴蟲陽性率為 3.23%（40/1 237）。

2.2 各年齡段CT、真菌、滴蟲陽性率比較

CT感染在≤25歲組陽性率最高為15.91%，隨著年齡的增長(zhǎng)，CT的陽性率逐漸降低，在＞55歲組為8.0%（表1）。

表1 各年齡段生殖道感染患者CT、真菌、滴蟲陽性率比較 [例(%)]

2.3 CT陽性與陰性患者陰道分泌物檢測(cè)

CT陽性患者陰道分泌物WBC、真菌、滴蟲、H2O2、SNa、LE的陽性率分別為 46.81%（66/141）、6.38%（9/141）、4.96%（7/141）、2.13%（3/141）、14.18%（20/141）、50.35%（71/141）；CT陰性患者陰道分泌物WBC、真菌、滴蟲、H2O2、SNa、LE的陽性率分別29.65%（325/1 096）、5.93%（65/1 096）、3.01%（33/1 096）、1.73%（19/1 096）、9.76%（107/1 096）、41.42%（454/1 096）。真菌、滴蟲、SNa、H2O2在兩組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，WBC和LE在CT陽性患者和CT陰性患者之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）（表 2）。

2.4 CT陽性與陰性患者WBC計(jì)數(shù)和LE活性程度比較

對(duì)CT陽性患者中陰道分泌物檢測(cè)WBC計(jì)數(shù)與CT陰性患者中陰道分泌物檢測(cè)WBC計(jì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩者之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。CT陽性患者陰道分泌物L(fēng)E活性程度與CT陰性患者陰道分泌物L(fēng)E活性程度比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.045）（表 3、表 4）。

表2 CT陽性與陰性患者陰道分泌物檢測(cè)結(jié)果比較 （例）

表3 CT陽性與陰性患者陰道分泌物WBC計(jì)數(shù)比較 [例(%)]

表4 CT陽性與陰性患者陰道分泌物L(fēng)E檢測(cè)結(jié)果比較 [例(%)]

3 討論

生殖道CT感染成為世界范圍內(nèi)常見的細(xì)菌性傳播疾病之一。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道2012年生殖道CT感染的新發(fā)患者為1.31億例[6]，2008—2015年我國(guó)生殖道CT感染發(fā)病率高于淋病和梅毒[7]。另有研究顯示，85%的女性生殖道CT感染隱匿，臨床癥狀不明顯，常延誤治療，其中有30%以上可能發(fā)展為盆腔炎。盆腔炎患者如不及時(shí)治療，將有18%發(fā)展為慢性盆腔疼痛，9%可發(fā)生不良妊娠[8]，嚴(yán)重威脅人類的健康，應(yīng)該引起足夠的重視。

本研究采用PCR熒光探針法對(duì)1 237例擬診為泌尿生殖道CT感染的患者宮頸分泌物進(jìn)行CT感染檢測(cè)，總陽性率為11.40%，低于金玲玲等[9]報(bào)道的CT檢出率24.14%和Katrin等[10]檢出CT的陽性率16.9%，與Olivia等[11]報(bào)道的CT陽性率12.5%相近，這可能與選取不同地區(qū)的患者、選取標(biāo)本的種類、檢測(cè)方法、試劑盒等存在差異有關(guān)。另外將不同年齡段的患者進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，≤25歲擬診為生殖道CT感染的患者CT檢出率最高，為15.91%，低于郭少珊等[12]報(bào)道的＜20歲CT的檢出率（28.09%），這與分組的不同存在差異。在26～35歲年齡段的患者CT陽性率也處于較高水平，為13.28%，隨著年齡的增長(zhǎng)，CT的陽性率也逐漸降低，這可能與性生活頻繁，性伴過多以及非婚性行為有關(guān)。年齡＞55歲的患者CT的陽性率為8.0%；真菌在≤25歲年齡段陽性率最高，檢出率為8.33%；滴蟲在46～55歲年齡段陽性檢出率最高，檢出率為5.50%。研究結(jié)果提示，處于生育階段且性活躍者為CT感染高危人群，且趨于年輕化。因此，≤25歲和26～35歲有性生活的青年女性及其性伴應(yīng)常規(guī)進(jìn)行CT篩查，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，防止遠(yuǎn)期并發(fā)癥的發(fā)生。此外，本實(shí)驗(yàn)主要采用CT定性方法進(jìn)行檢測(cè)，關(guān)于CT的拷貝量是否與泌尿生殖道感染的輕重相關(guān)，需要進(jìn)一步研究。

H2O2直接由產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌分泌，其濃度與乳酸桿菌的數(shù)量成正比，直接反應(yīng)維持陰道正常內(nèi)生態(tài)的乳酸桿菌數(shù)量，與評(píng)價(jià)陰道內(nèi)環(huán)境pH值相比，具有干擾因素少，更能直接反應(yīng)陰道內(nèi)生態(tài)情況。檢測(cè)陰性表示陰道菌群正常，陽性表示陰道微生態(tài)遭到破壞。本研究中CT陰性患者與CT陽性患者H2O2的陽性率分別為1.73%、2.13%，兩組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SNa是由陰道菌叢中的加德納菌和其他一些厭氧菌分泌產(chǎn)生的，當(dāng)正常的微生態(tài)平衡遭到破壞后，這些產(chǎn)SNa的致病菌會(huì)定居并過度繁殖，并最終導(dǎo)致細(xì)菌性陰道炎。本研究中CT陰性患者與CT陽性患者SNa的陽性率分別為9.76%、14.18%，兩組之間比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，CT感染與H2O2、SNa陽性無直接相關(guān)性。

LE主要存在于粒細(xì)胞胞質(zhì)中，直接反映陰道內(nèi)炎癥侵入和陰道黏膜損傷程度，屬于廣泛的非特異性指標(biāo)，較敏感，陽性者提示陰道分泌物內(nèi)含有大量的多核白細(xì)胞，作為一個(gè)參考指標(biāo)，可以幫助臨床醫(yī)生了解患者陰道壁有無實(shí)質(zhì)性黏膜受損，并給予相應(yīng)的臨床治療。本研究發(fā)現(xiàn)，CT陽性的生殖道感染者LE、WBC陽性率分別為50.35%、46.81%，CT陰性的生殖道感染者LE、WBC陽性率為41.42%、29.65%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且CT感染與WBC計(jì)數(shù)和LE的活性呈正相關(guān)。因此，WBC計(jì)數(shù)或LE陽性的受檢者進(jìn)行常規(guī)CT檢測(cè)可以降低CT的漏檢率。由于LE試驗(yàn)結(jié)果屬于定性檢測(cè)，受人肉眼判讀結(jié)果和檢測(cè)樣本的性狀影響較大，因此要結(jié)合臨床和其他檢查結(jié)果進(jìn)行判斷。對(duì)于確診生殖道CT感染的患者進(jìn)行藥物治療后，清除CT的同時(shí)，LE是否轉(zhuǎn)陰需進(jìn)一步跟蹤調(diào)查。假若CT與LE同步進(jìn)行，對(duì)治療后復(fù)查具有一定的指導(dǎo)意義。