陳東紅,黃阿賢

(1.福建省藥械聯(lián)合采購中心,福建 福州 350001；2.福建漳州美利得生物工程公司,福建 漳州 363600)

復方益肝顆粒系漳州美利得生物工程公司擬在原南靖縣中醫(yī)院用于治療慢性乙肝老驗方的基礎上研發(fā)的中藥新制劑。驗方是由原福建省名老中醫(yī)肖子精主任提供的，由苦參(君藥)、虎杖、茵陳、白笈、田雞黃等數(shù)味中草藥組成的復方制劑(原為水煎劑)。其作為醫(yī)院制劑用于治療慢性乙肝50余年，臨床上取得較好療效。本實驗是在原處方加以改良，并通過正交試驗確立提取工藝。

1 實驗材料

1.1 儀 器

薄層色譜儀(上海科哲生化科技公司);AB-8型大孔吸附樹脂(天津波鴻樹脂科技有限公司);高效硅膠G板100 mm×200 mm(青島基億達公司)。

1.2 試藥與試劑

復方益肝顆粒(漳州美利得生物工程公司,190926);苦參堿、氧化苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所);苦參、虎杖、茵陳等藥材(漳州藥材站)。試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層掃描法測定苦參堿

2.1.1苦參藥材供試液的制備

稱取苦參藥材粗粉約1.0 g，置具塞錐形瓶中，加氯仿25 mL、濃氨試液0.5 mL，按文獻方法制備，定容到5 mL即得[1-3]。

2.1.2復方益肝膠囊供試品溶液的制備

稱取復方益肝顆粒內容物1.0 g,置有塞錐形瓶中，加氯仿15 mL，濃氨試液0.5 mL，按文獻方法制備，定容到2 mL即得[1-3]。

2.1.3陰性對照液的制備

取除苦參以外的所有藥材，按照樣品供試液的制備方法制備陰性對照液。

2.1.4對照品溶液的制備

精密稱取苦參堿標準品2.2 mg，加無水乙醇定容于1 mL容量瓶中，制成1.1 g/L對照品溶液。

2.1.5對照品溶液的制備

薄層色譜條件及掃描條件高效硅膠G板100 mm×200 mm，點樣后氨熏15 min；異辛烷-丙酮-醋酸乙酯-氨水(4.5∶4.5∶6∶0.3)為展開劑，氨預飽和15 min，稀碘化鉍鉀試液顯色，λs=480 nm，λR=650 nm,雙波長反射式鋸齒掃描。

2.1.6線性關系考察

精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5 μL，點于同一硅膠G薄層板上,依法展開,顯色,掃描測定。以點樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線?；貧w方程為γ=-23 899.6+72 406.3X(r=0.9989，n=5)?？鄥A在1.17～5.83 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.1.7對照品溶液的制備

測定方法精密吸取對照品溶液1 μL和2 μL,苦參藥材供試液2 μL，復方益肝顆粒供試液和陰性對照液各1.5 μL，按標準曲線項下點樣，展開，掃描，Rf=0.65，用外標一點法計算含量。

2.1.8回收率試驗

精密吸取已知含量的樣品3次，分別加入對照品適量，點樣展開，掃描測定。結果平均回收率98.81%，RSD1.95%，實驗表明回收率良好。

2.1.9精密度試驗

精密吸取對照品溶液1 μL，按標準曲線方法重復點樣5次，展開，掃描，峰面積的RSD=1.37%。

2.2 正交試驗

2.2.1因素水平表的研究

參照預實驗結果，在各提取條件中，水用量﹑提取時間、提取次數(shù)對提取的浸膏得率有一定影響。在水平分布的選擇時，中間水平實驗的浸膏得率(9倍量水提取2次，每次2 h)在每一組中均超過了85%，同時考察提取條件對苦參堿指標成分的影響概況，故按表1進行L9(34)正交試驗。

按處方比例取各藥材(水浸泡30 min),按正交試驗條件加水加熱提取數(shù)次,濾過,合并濾液,定容于50 mL容量瓶中備用。

表 1 正交試驗因素水平表

2.2.2苦參正交試驗樣品測定

量取正交提取液各5 mL于分液漏斗中，加入濃氨水2 mL，參照文獻方法制備供試品液[2-3]，定容為約1 mL。取供試品液2 μL照上述測定方法測定。正交試驗分析表見表2。方差分析表明，各因素對苦參堿提取含量無顯著性影響。

實驗中發(fā)現(xiàn)苦參藥材水提物中既含有苦參堿，也含有氧化苦參堿，但在本復方制劑中無法檢測到氧化苦參堿(圖1,色譜條件：高效硅膠G板10 cm×20 cm，點樣后氨熏15 min；展開劑為氯仿-甲醇-氨水=8∶1∶0.2，稀碘化鉍鉀試液顯色)；提示可能有氧化苦參堿逐漸向苦參堿轉化。

表 2 L9(34)苦參堿正交試驗分析表

3 討 論

本實驗選擇苦參堿為復方益肝顆粒劑中君藥苦參含量測定的指標成分之一，可作為輔助控制該劑型的質量標準。薄層掃描檢測苦參堿時發(fā)現(xiàn)，在苦參堿對照品相應位置，后者的斑點較大，說明后者提取效率更高，故采用第二種提取方法[2-3]。

1.苦參藥材,2.復方益肝顆粒,3.樣品,4.氧化苦參堿

由于苦參堿中含有多種生物堿,在薄層色譜中分離較為困難。本實驗采用氯仿-甲醇-氨水、環(huán)己烷-氯仿-甲醇-氨水、環(huán)己烷-氯仿-丙酮-甲醇-氨水、異辛烷-丙酮-醋酸乙酯-氨水等多種展開劑，結果表明,以異辛烷-丙酮-醋酸乙酯-氨水為展開劑,可使苦參堿與其他,堿類成分分離完好,斑點清晰。本法可為復方中藥制劑中苦參堿測定提供參考[4-6]。

正交試驗表明水用量、提取時間及次數(shù)3個因素對本處方中苦參堿含量均無顯著影響,因此其最佳工藝將根據(jù)配方中另一指標成分虎杖苷含量的測定結果再確定。